棉花皱叶病毒LAMP检测方法的建立

棉花皱叶病毒(Cotton leaf crumple virus,CLCrV)是危害棉花的重要病毒之一,属中国进境检疫性植物病毒,本研究根据其DNA-B基因序列设计LAMP特异性引物,通过试验建立CLCrV的LAMP检测方法。该方法检测快速,15min即可检测到扩增曲线;特异性强,可有效区分同属的CLCrV、棉花曲叶病毒(CLCuV)、非洲木薯花叶病毒(ACMV)及番茄黄化曲叶病毒(TYLCV);灵敏度高,可检测到约43fg/μL的总DNA,比普通PCR灵敏度高1 000倍;并可通过肉眼观察浊度或颜色反应进行结果判断。该方法适用于现场CLCrV的快速检测。     

基因编辑作物的发展及检测监管现状

随着以ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9技术为代表的基因编辑技术的不断发展,越来越多的基因编辑作物不断问世,围绕着基因编辑作物的监管态度和检测技术将成为新的问题。笔者简要介绍了目前运用基因编辑技术培育的基因修饰作物的现状,并以ZFN技术为代表,分析了世界上有关国家对基因编辑作物的监管态度,并针对基因编辑作物检测可能存在的问题进行了分析。旨在为我国未来可能出现的基因编辑作物进出口的监管和检测工作提供参考。     

葡萄品种鉴定技术及其在遗传多样性研究中的应用进展

葡萄品种的鉴定是葡萄种质资源研究和新品种保护的基础。为了对葡萄种质资源的安全引进和输出提供技术保障,本文归纳了葡萄品种鉴定中常用技术及其在遗传多样性领域的研究进展,总结了在葡萄品种鉴定过程中存在的问题,分析了分子技术在葡萄品种鉴定中的发展趋势,并对今后品种鉴定工作进行了展望。     

植物病原细菌DNA分子检测技术

在DNA检测技术建立之前,种子上的病菌及未显症的病害的快速检测和鉴定几乎是不可能的.随着DNA检测技术的发展,在隐症植物材料上的病害检测变得快速可靠.本文主要介绍DNA检测技术在植物病原细菌检测中的应用.     

实时荧光RT-PCR方法检测马铃薯V病毒

为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;对马铃薯V病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯A病毒、李痘病毒及马铃薯X病毒具有良好的特异性。该方法快速、灵敏、无需任何PCR后处理且交叉污染风险小,可用于马铃薯V病毒的快速检测。     

谷斑皮蠹分子检测方法

根据Simon(1994)发表的COI基因的通用引物,扩增了谷斑皮蠹、黑斑皮蠹、条斑皮蠹和花斑皮蠹不同地理种群的COI基因片段.经序列比对后,依据多态位点,设计了检测谷斑皮蠹的特异引物.PCR结果表明:引物可成功扩增出谷斑皮蠹样品的基因片段.而其他斑皮蠹属种类基因片段不能被扩增.     

榆树黄化病植原体的分子检测与鉴定

 利用植原体16SrRNA基因的通用引物R16rrLF2/R16mR1和R16F2n/R16R2对山东泰山上发生的榆树(Ulmus parvifolia)黄化病感病植株总DNA进行巢式PCR扩增,得到了约1.2kb的特异性片段,从分子水平证实了榆树黄化病的病原(EY-China)为植原体。将扩增到的片段测序,并进行一致性和系统进化树分析。结果表明,该分离物属于植原体榆树黄化组(Candidatus Phytoplasma ulmi),与该组成员16SrRNA序列的一致性均在98.2%以上,其中与16SrV-B亚组中的纸桑丛枝(Paper mulberry wiches'-broom)和枣疯病(Jujube witches'-broom)植原体一致性最高,达到99.4%,在系统进化树中与该亚组成员聚类到同一个分支,说明该分离物属于植原体16SrV-B亚组。本研究首次对在中国引致榆树黄化病的植原体进行了分子检测,并通过核酸序列分析将其鉴定到亚组水平。     

植原体TaqMan探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

 本研究成功建立了植原体分类鉴定和检测的TaqMan探针实时荧光PCR方法,该方法根据植原体16S rDNA保守区设计了1个TaqMan广谱探针和3个植原体组间点突变特异性探针,并对9种植原体和5种细菌以及3个植物样本进行实时荧光PCR。结果表明,用广谱探针可检测到所有植原体产生荧光信号,而细菌不产生荧光信号。当用植原体组间特异性探针检测时,仅能检测到该组植原体产生荧光信号,检测的敏感性比常规的PCR-电泳检测高约100倍、检测速度有较大提高。由于PCR产物是荧光探针检测,本方法特异性强,并可以用组特异探针直接确定植原体种类。实验采用完全闭管检测,降低了污染机会。本研究为其它原核生物、特别是不能培养菌、难培养菌的检测鉴定和分类提供了新方法。     

苹果茎沟病毒KRL-1分离物外壳蛋白基因序列测定

以KRL-1(库尔勒香梨分离物)总RNA为模板,采用RT-PCR技术,扩增外壳蛋白(CP)基因的cDNA片段,将其克隆到pMD18-T载体上。通过序列测定,分析结果表明:KRL-1CP基因由714个核苷酸组成,编码237个氨基酸。KRL-1与ASGV其它分离物CP基因的核苷酸同源性为90%-93%,氨基酸同源性为94%-98%。根据KRL-1与其他分离物CP基因序列和生物学症状上的差异,可推断KRL-1存在较大的分子变异。     

玉米细菌性枯萎病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

成功建立了玉米细菌性枯萎病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法.该方法根据细菌16S rDNA序列的特异性,设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变特异性探针,并对10种细菌菌株和5种植原体进行了实时荧光PCR.结果表明,只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光信号,而其它参考菌不产生荧光信号,检测的绝对灵敏度是14.2 fg/μl质粒DNA,比常规的PCR电泳检测高约100倍.整个检测过程只需2h,完全闭管,降低了污染的机会,无须PCR后处理.