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为表达犬冠状病毒(canine coronavirus, CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白;纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原,免疫蛋鸡,用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体,通过Western blot检测抗体滴度,用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示,S1蛋白全长无表达,CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128 000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈... 相似文献
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[目的]了解黑穗醋栗发生二次萌芽过程中总酚含量及其合成代谢关键酶活性的变化规律,为揭示黑穗醋栗发生二次萌芽的内在机理及其人工调控提供科学依据.[方法]以易发生二次萌芽的黑穗醋栗品种亚德和不易发生二次萌芽的黑穗醋栗品种布劳德为试材,使用30.0 mg/L赤霉素(GA3)和50.0 mg/L脱落酸(ABA)进行叶面喷施处理,以喷清水为对照(CK1和CK2),利用Folin-酚比色法和酶联免疫分析试剂盒测定各处理黑穗醋栗品种二次萌芽的总酚含量及关键酶活性.[结果]在黑穗醋栗品种亚德和布劳德发生二次萌芽过程中,总酚含量及苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查尔酮异构酶(CHI)和肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性降低,多酚氧化酶(PPO)活性升高;经30.0 mg/L GA3处理后亚德和布劳德二次萌芽的总酚含量明显低于CK1和CK2,PAL和CHI活性明显低于CK1和CK2,PPO活性明显高于CK1和CK2,C4H活性总体上低于CK1和CK2;经50.0 mg/L ABA处理后亚德二次萌芽的总酚含量显著高于GA3处理和CK1(P<0.05,下同),经50.0 mg/L ABA处理亚德各测定日期(除8月17日外)的总酚含量均显著高于GA3处理,且明显高于CK2;50.0 mg/L ABA处理的亚德和布劳德PAL活性明显高于GA3处理及CK1和CK2,PPO活性除8月17日外均显著低于GA3处理,且明显低于CK1和CK2,CHI和C4H活性总体上明显高于GA3处理及CK1和CK2.[结论]叶面喷施50.0 mg/L ABA可提高黑穗醋栗品种亚德和布劳德二次萌芽的代谢关键酶PAL、CHI和C4H活性,降低PPO活性,促进总酚合成并抑制其氧化分解,从而抑制黑穗醋栗品种亚德和布劳德发生二次萌芽. 相似文献
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本文报道了左旋咪唑对鸡新城疫病疫苗免疫效果的影响。进行了两个实验:每个实验分为10毫克/千克,左旋咪唑给药组和空白对照组。实验一观察对鸡ND疫苗初次免疫的影响:疫苗免疫前用药,5日龄时给药,连用3天,7日龄滴鼻给予ND—Lasota系疫苗;疫苗免疫后用药,7日龄时滴鼻给予ND—Lasota系活疫苗,13日龄时给药,连用3天。实验二观察对鸡ND疫苗二次免疫的影响:7日龄时饮水给予ND+IBD二联活疫苗,40日龄时给药,连用3天,42日龄时肌肉注射ND—Lasota系疫苗。实验一结果显示,免疫前用药,10mg/kg左旋咪唑用药组,首次免疫后7~21d,抗体滴度与未用药对照组比较无明显差别,但28d抗体滴度明显高于未用药对照组;免疫后用药,用药后21d,10mg/kg左旋咪唑用药组,抗体滴度明显高于空白对照组。实验二结果显示10mg/kg左旋咪唑用药组,疫苗二次免疫后7~28d,抗体滴度明显高于未用药对照组。 相似文献
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冬小麦抗倒春寒性能鉴定方法和指标的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
倒春寒是限制黄淮冬麦区小麦稳产和丰产的主要因素之一,选育抗倒春寒小麦新品种是降低倒春寒危害的重要手段,建立简单易行、易推广且全面系统的小麦抗倒春寒性能鉴定方法和指标体系对保障粮食安全有着重要意义。本文系统总结了冬小麦抗倒春寒鉴定的方法和指标,进行了比较和评价,并提出鉴定原则和程序。(1)鉴定方法方面,主要包括直接鉴定法、间接鉴定法和综合鉴定法等,直接鉴定法有田间自然鉴定法(引种栽培应用最广,但周期长、工作量大)、人工模拟气候室法(周期短、可重复性强,但对设备与技术要求较高)和生长恢复法(冬前冻害鉴定较多,抗倒春寒鉴定方面较少,一般与其它鉴定方法配合使用)等;间接鉴定法有助倒春寒危害温度阈值的研究,但目前指标与抗寒性关系还未有明确定论,应用受到限制;综合鉴定法鉴定结果全面而准确,但对技术、成本要求较高且工作量较大。因此,在鉴定过程中要结合实际情况合理搭配、综合运用。(2)鉴定指标方面,主要包括形态与农艺、生理生化、气象与生态指标等,形态与农艺指标一般用于田间自然鉴定法,常以数量、质量、颜色和形态变化等作为参考项;生理生化指标一般用于间接鉴定法,包括活性氧、渗透调节物质、内源激素含量、抗氧化酶活性以及光合与呼吸特性等;气象与生态指标常应用于各种鉴定方法,气温、地温、冠层温度、半致死温度和恢复生长最低温度常作为鉴定指标,而光照、CO2、湿度和肥力等因素会影响结果准确性。(3)关于鉴定原则与程序,本文提出了鉴定结果的地域性、指标选用的针对性、鉴定方法与指标的综合性和实用性等鉴定原则,并以易灾期、品种敏感期、敏感器官、鉴定方法和指标、低温程度、田间/盆栽试验、数学分析方法、抗寒性能评价与分级为主要流程的鉴定程序。最后,从抗寒生理研究、新兴技术鉴定研究与应用和鉴定产品的研发等方面做了展望。 相似文献
90.
土地利用和农业管理对丹江流域非点源氮污染的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
为研究土地利用和农业管理对流域非点源氮污染的影响,选择南水北调中线的重要水源地丹江流域作为研究区,应用SWAT模型模拟了流域地表水硝酸盐氮和氨氮负荷,揭示了土地利用变化和不同施肥灌溉措施对氮污染负荷的贡献。结果表明:(1)流域内全年氮污染分布不均,硝酸盐氮和氨氮污染较为严重的时段集中在每年7—9月,输出量分别为734.32,735.36 t,占全年硝酸盐氮和氨氮输出量的50%以上;(2)硝酸盐氮和氨氮的输出量具有较大的空间差异,自上游至下游逐渐加重,污染较为严重的子流域主要集中在丹凤县和商南县;(3)通过设置情景模拟,当坡度大于15°和25°的耕地退耕还林时,流域硝酸盐氮负荷分别减少59.83%和45.89%,氨氮负荷分别减少48.91%和35.78%。当流域内施肥量和灌溉量分别降低20%时,流域硝酸盐氮负荷分别减少3.63%和13.26%,氨氮负荷分别减少0.12%和15.65%;(4)耕地是流域氮污染的主要来源,降低流域施肥灌溉量和陡坡地退耕还林是控制流域非点源氮污染的关键。 相似文献