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液泡加工酶(VPE)基因是植物内启动和执行细胞程序性死亡的关键基因,β型VPE是种子特异表达并且为种子蛋白成熟所必须的基因.本研究以黑比诺葡萄(Vitis vinifera cv.Pinot Noir)花后8个不同时期胚珠的cDNA混合样为模板,通过RT-PCR扩增得到葡萄β型液泡加工酶基因(暂命名VvβVPE,GenBank登录号:KC136352),开放阅读框1 485 bp.进一步将VvβVPE克隆到pGEX-6P-1原核表达载体并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,经IPTG诱导,获得约81.3 kD的包涵体融合蛋白GST-VvβVPE.将诱导条件优化后,在37℃、0.05 mmol/L IPTG诱导5h后融合蛋白GST-VvβVPE的表达量最大,采用电透析与盐酸胍处理后透析复性两种方法获得纯化包涵体蛋白,电透析纯化法获得纯化包涵体蛋白的浓度可达到免疫要求.使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,经Western blot检测,该抗血清(稀释到1∶10 000)与GST-VvβVPE融合蛋白识别反应良好,获得的抗血清可用于以后的VvβVPE的酶活性分析、免疫亚细胞定位分析以及转基因植株蛋白水平的鉴定等,为进一步明确VvβVPE在葡萄胚珠发育中的作用提供基础数据. 相似文献
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瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-lep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒。用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22 kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符。给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4~5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22 kD的人瘦素蛋白的表达。研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达。 相似文献
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天津市设施农业现状分析与发展对策研究 总被引:1,自引:3,他引:1
在对天津市设施农业发展基本态势、潜在优势和主要问题进行深入分析的基础上,提出制定中长期规划、完善补贴政策、加快农民组织化建设、加强基础设施建设以及打造设施农业品牌等可操作性对策建议。 相似文献
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由于高校思想政治课普遍存在着到课率低、抬头率低和参与率低的现象,因此各高校需要在既定的教学内容条件下进行教学方法的改革与创新。在系统阐述了历史音像资料在毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论课程教学中的作用基础上,深入分析了历史音像资料的应用方法,包括:精心选择历史音像资料,提高资料的信度;用心编辑历史音像资料,增强资料的精度;精心安排历史音像资料的应用量,提升资料的效度等。教学实践表明,合理使用历史音像资料对提升毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论课程教学的生动性和趣味性,培育学生历史唯物主义观和提升学生的课堂参与度具有事半功倍之效。同时还提出了强化历史音像资料在毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论课程教学中应用的建议,即建设历史音像资料分享公共平台、适度应用历史音像资料创新教学方式、课上观看和课后观看相结合,提高学生主动学习毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论课程的可能性。 相似文献
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采用地统计学的变异函数分析方法对我国2006年棉花长势空间变异特性进行了分析,结果表明,基于县域尺度的我国长势指标存在空间异质性.5月真叶数、6月真叶数、7月总果节数、9月成铃数的半方差值随间隔的变化很好的符合高斯理论模型的变化趋势,模型拟合的决定系数变化在0.472~0.856之间,8月成铃数则较好地符合球状理论模型,模型拟合的决定系数为0.879.空间自相关范围分别是 1644.25、1822.61、2293.59、2777.63、1195.56 km.5月份单株真叶数99.9%的空间变异是由于结构性因素的原因造成的,7月份的单株总果节数的96.7%的空间变异是由于结构性因素的原因造成的,6月单株真叶数、8月单株成铃数、9月单株成铃数的空间分布的结构比分别为0.61、0.929、0.869. 相似文献
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