江苏省番茄黄化曲叶病的病原分子诊断

 2007年冬季在江苏省兴化市和南京市一些日光温室大棚中发生了一种新的番茄病毒病,主要表现为植株矮缩,叶片上卷,叶缘黄化等,危害十分严重。为明确其病原,对田间表现典型症状的20份病样进行了分子检测,结果全部检测到粉虱传双生病毒;对其中12份进行序列同源性分析,发现其同源性超过98%,说明其极可能是一个分离物;将该序列与Genbank进行BLAST分析,发现其与番茄黄化曲叶病毒的同源性最高,达99％。     

水稻条纹病毒单克隆抗体的制备及检测应用

 用水稻条纹病毒(RSV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代且分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞。各株单抗腹水的ELISA效价均在1:80000~1:5120000之间。Westernblot分析表明,4株单抗均与RSV的35kDa的外壳蛋白亚基有特异反应。建立了间接ELISA测定RSV的方法,4株单抗检测病汁液的稀释度能达到2560倍以上,与其它病毒无交叉反应。对江苏省部分县市的大田灰飞虱带毒率进行检测,结果显示灰飞虱的带毒率为12.5%~41.5%     

一种室内大量饲养灰飞虱的方法

灰飞虱是重要的农业害虫和病毒传播介体,为给相关研究提供足够的活体材料,建立了一种室内灰飞虱规模化饲养的方法,笔者经一系列生物学试验,对温度、光强、饲养密度等条件进行了优化,并对产卵和换苗时间进行了规定。试验表明饲养温度24~28℃,光照强度5000~7000lx,不同龄期虫的饲养密度分别为300~400头/杯（若虫）、200~300头/杯（3~4龄虫）、100~200头/杯（成虫）适合各自饲养时水稻苗的生长、灰飞虱的发育繁殖、卵的孵化等。为保证同批次虫龄的一致性,规定产卵时间和换苗时间分别为48h和8~10天。此方法条件因素明确,可操作性强,不受场地、时间、环境等自然条件限制;可随时提供足量试验用龄次标准试虫。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒海南分离物基因组测定与毒源分析

为分析2012年采自海南西瓜上具黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染典型症状的病毒分离物CGMMV-HaiN12的分子特征和可能来源, 以病叶总RNA为模板, 分3段进行RT-PCR扩增, 测定了该分离物基因组全长序列。结果表明CGMMV-HaiN12基因组全长为6 425 bp（GenBank登录号KC852074）, 与已报道的CGMMV分离物相比, 除5′和3′端非编码区核苷酸数目略有不同外, 编码区的基因结构完全相同。CGMMV-HaiN12全基因组序列与韩国分离物AF417242的相似性为99.6%、遗传距离为0.004, 在进化树的末端两者聚为一支。将CGMMV-HaiN12与已发布的中日韩分离物的外壳蛋白基因序列进行遗传进化分析, 所有分离物在0.000~0.027的遗传距离上聚为一支, 显示这些分离物具有高度的相关性, 而与欧洲的西班牙和俄罗斯的2个代表分离物具有较大差别。在进化树末端, CGMMV-HaiN12与3个韩国分离物（AJ245440、JF838188、AF417242）、2个我国湖南分离物（JQ715592、JQ715595）聚为一支, 表明CGMMV-HaiN12可能由韩国传入, 并且与传入我国湖南的分离物高度同源。在海南本地不进行西瓜制种的情况下, 为控制CGMMV在海南的危害应加强对进入海南的西瓜和砧木种子的检疫工作。     

稻瘟病菌原生质体的制备和再生菌株的致病性

以稻瘟病（Ｍａｇｎａｒｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）菌株ＺＡ４９、１３１为供试菌株,进行原生质体的制备试验。结果表明：用９种酶均能消化该菌细胞壁,并获得一定数量的原生质体;产生原生质体效率最高的是酶Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４和Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ,且这两种酶以１０ｍｇ／ｍｌ浓度产生的原生质体数量最多,消化２￣３ｈ后即可获得相当数量的原生质体,最适作用温度分别为３０℃和３２℃。以几丁质降解酶与Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４或Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ混且时对制备原生质体有很好的增效作用。作用认为,Ｎｏｖｏｚｙｍ ＾ＴＭ２３４和Ｄｒｉｓｅｌａｓｅ的作用浓度以５ｍｇ／ｍｌ最为经济、实用。所制备的原生质体均能再生菌丝和具有产生与原菌株相同致病性分生孢子的能力。     

玉米粗缩病播期避病作用的研究

玉米粗缩病发生与否,与玉米获毒叶龄期关系密切。目前种植的杂交玉米,播期弹性较大。据灰飞虱的消长、传毒规律,合理确定玉米播种期,使感病叶龄期与灰飞虱传毒盛期最大限度的避开,可避免或大幅度减轻玉米粗缩病的严重发生。     

江苏菜豆上分离的番茄黄化曲叶病毒基因组序列分析

 2012年,江苏南京菜豆上出现了一种新的病毒病害,病株表现明显的叶片皱缩、植株矮化等症状。根据其症状及介体发生状况,对其伴随的病毒种类进行了研究,结果从中检测到一种粉虱传双生病毒,对其基因组DNA-A组分克隆测序后发现其全长2 781 bp,编码6个ORF,BLAST及聚类分析结果显示该病毒与番茄黄化曲叶病毒同源性最高(99%),是番茄黄化曲叶病毒的一个分离物。这是江苏省番茄黄化曲叶病毒侵染菜豆的首次报道,暗示番茄黄化曲叶病毒可能是我国菜豆种植的重要潜在威胁。     

活性氧在油菜与核盘菌Sclerotinia sclerotisclerotiorum互作中的作用

为比较S．sclerotiorum侵染后,油菜不同抗性品种组织内活性氧产生情况,通过DAB和伊文思兰染色,分别检测接种病菌后不同抗感品种的氧进发（Reactive Oxygen Intermediates,ROIs）的产生及其诱导的细胞死亡情况。结果表明,抗性品种中双9号、皖油14产生ROIs及细胞死亡的程度均轻于感病品种沪油15、史力丰。使用抗氧化剂如抗坏血酸、H2O2酶预处理叶片后,病斑比对照减小。H2O2预处理则能显著增大病斑,忍受ROIs可能是油菜抗Ssclerotionun的机理之一。通过甲苯胺蓝染色检测细胞壁修复情况的结果表明,抗性品种叶片在菌丝定殖早期的细胞壁中多酚化合物过氧化结合物的产生量大于感病品种。     

小麦梭条花叶病的流行因素及危害损失

小麦梭条花叶病在我省始见于70年代中期,1980年后,扩展蔓延极为迅速,危害日趋严重,成为我省小麦主要病害之一。研究证明,该病病原为一种线状病毒,土壤里残留麦根中的禾谷多粘菌(Polymyxa graminis)是传病介体,秋播后带毒菌的游动孢子侵入麦根感染麦苗,翌年2～3月为发病盛期,当气温升至15℃以上时,症状逐渐隐潜。为探明该病害在我省的危害情况,我们在结合病原、传播途径、发生规律和防治措施研究的同时,对流行因素和产量损失分别进行了调查和测定。     

江苏黄瓜绿斑驳花叶病毒的鉴定

为确定从江苏省洪泽县大棚西瓜、仪征市露地瓠瓜、东台市露地南瓜上采集到3个表现为褪绿、斑驳花叶症状的病样是否为黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)侵染,采用电子镜观察、RT-PCR和序列测定方法对其进行鉴定。电子显微镜下可见300 nm×18 nm大小的直杆状病毒粒子。根据已报道的CGMMV外壳蛋白质(cp)基因序列合成特异性引物,对所提取病样的总RNA进行RT-PCR扩增,3个分离物的RNA模板中均可扩增到大小为500 bp左右的DNA片段,测序结果表明3个分离物的片段均含有486个核苷酸,包含完整的cp基因,编码161个氨基酸。3个分离物与已报道的7个CGMMV分离物核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为91.8%～99.8%和98.1%～100.0%,与同属的其他3个病毒(Kyuri绿斑驳花叶病毒、黄瓜果实斑驳花叶病毒和小西葫芦绿斑驳花叶病毒)cp基因核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为40.7%～54.7%和44.4%～60.2%,表明所采集的3个病样由CGMMV侵染引起。