胞壁酰二肽对体外奶牛乳腺上皮细胞生长及胞内NOD2 mRNA表达的影响

【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于太阳能温度补偿的光合生物制氢反应器自控系统的设计

针对太阳能光合生物连续制氢运行工艺的要求,设计了太阳能加热温度补偿自控系统,以STK12C5A0882单片机作为控制器,选用Pt100型温度传感器采集温度,实现实时温度调节曲线的在线显示.光合生物制氢反应器制冷和制热的切换由继电器控制,软件设计采用了PID算法.试验结果表明,该系统具有调节精密,控制稳定,数据在线记录及监测等优点,系统检测响应是时间小于10 ms,调控响应时间小于30 s,可将温度控制在(30±2)℃,温度波动小于±2℃,能够有效提高太阳能光合生物制氢反应器的温度控制精度.     

基于高通量测序的猕猴桃根腐病根际土壤真菌群落研究

以猕猴桃根腐病根际土壤真菌群落为研究对象,通过高通量测序,研究猕猴桃根腐病感病植株与未感病植株根际土壤真菌群落结构的分布情况,为猕猴桃根腐病生物防治提供理论依据。结果表明,与未感病植株相比,猕猴桃植株感染根腐病后,其根际土壤真菌的群落结构和相对丰度发生了变化。在门分类水平上,感病植株根际土壤子囊菌门相对丰度较高,而接合菌门和担子菌门较低。在纲分类水平上,感病植株根际土壤粪壳菌纲相对丰度较高,伞菌纲、盘菌纲较低。在目分类水平上,感病植株根际土壤肉座菌目相对丰度较高,而Sordaihales, Trechnsporales、小壳菌目较低。在科分类水平上,感病植株根际土壤赤壳科相对丰度较高,而毛球壳科、囊菌科的较低。在属分类水平上,感病植株根际土壤的赤霉菌属、丛赤壳属相对丰度较高。     

基于FSOS模型的巴布亚新几内亚林地利用规划方案探索

采用以模拟退火算法为原理的中国森林模拟与优化平台FSOS(Forest Simulation Optimization System),初步探讨了巴布亚新几内亚国家层面林地利用规划方案。方案一,继续维持现有方式经营天然林;方案二,选出部分宜林荒地经营人工林,并保护天然林,对其林地进行短期(25年)和长期(200年)利用和保护规划,并与种植棕榈油的方案做对比分析。结果表明：按方案一经营,该地区每年最多生产1 000万m³木材,且天然林将逐渐减少至所剩无几;按方案二经营,人工林木材产量明显大幅度提高,且大部分天然林也得到了有效保护。该经营策略可为巴布亚新几内亚天然林保护和人工林木材生产规划提供参考。     

生猪生产形势分析及后市展望

<正>受非洲猪瘟疫情影响,6月末,生猪存栏及能繁母猪存栏同比降幅均超过25.0%,产能去化速度较快;猪肉消费量受疫情及价格上涨双重制约,降幅达到12.1%;上半年进口猪肉81.9万吨,同比增长26.3%。综合供需分析,春节后猪肉市场供应偏紧,猪价上涨较快,上半年生猪养殖头均盈利136元。一、上半年生猪生产形势1.生猪存栏明显下降。据400个生猪定点监测县数据显示,非洲猪瘟疫情发生以来,生猪存栏及能繁母猪存栏同比降幅呈不断加大态势,今     

灵昆鸡体尺与屠宰性能的相关性分析

灵昆鸡原产于温州市龙湾区灵昆岛,故得其名.灵昆鸡是浙江省优良地方鸡种之一,属蛋肉兼用型,具有体型大,肉质好,产蛋多,成熟早,抗病力强和适应性好等特点[1].     

绵阳市奶牛内寄生虫的调查与分析

据笔者调查,目前影响本市奶牛业健康持续发展的重要疾病主要有奶牛寄生虫病和乳房炎等。奶牛感染寄生虫不仅降低饲料报酬,还因虫体机械性损伤,分泌毒素干扰组织器官的功能使奶牛长期处于病理状态,导致产奶量下降,影响乳品质。此外,奶牛感染寄生虫常导致奶牛呈渐进性贫血和消瘦,     

鹿啃毛症治疗体会

人工饲养的鹿群由于饲料单一或营养缺乏,导致鹿群互相啃咬,形成大小不一的秃斑。发病季节多在晚冬或早春。经改变饲料配方,补充盐分、矿物质及微量元素等措施后,病情得到缓解和治愈。     

黑龙江几种桑果品质的测定分析

不同品种的桑果其可溶性固形物、总酸、固酸比、氨基态氮含量存在差异 ,可作为评价桑果品质的重要参考指标.经测试 :龙椹2号和龙椹3号可溶性固形物的百分含量高出对照品种4个百分点 ;总酸的百分含量远低于对照品种 ;固酸比远大于对照品种 ;氨基态氮的含量小于对照品种.初步认为龙椹2号和龙椹3号桑果品质优于野生对照品种.