利用CRISPR/Cas9技术敲除RNA甲基化酶TRDMT1基因及其功能初探

为构建TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系,利用CRISPR/Cas9系统在TRDMT1基因第1个外显子前插入BGH Ploy(A)转录终止序列,终止TRDMT1基因表达。利用重叠PCR方法合成sgRNA序列,构建TRDMT1-gRNA载体及含不同抗生素基因的同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro和TRDMT1-LOXP-Neo;将同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo及TRDMT1-gRNA、Cas9表达载体MLM3613共转染HEK293细胞;利用Puromycin和Neomycin抗生素筛选细胞,通过RT-qPCR检测TRDMT1基因转录终止效率。通过细胞生长曲线和划痕试验检测TRDMT1基因敲除对HEK293细胞增殖和迁移能力的影响。结果表明:成功构建了TRDMT1-gRNA载体及TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo同源重组载体;与正常HEK293细胞相比,试验组TRDMT1表达量仅为1%;TRDMT1基因敲除后显著影响HEK293细胞增殖和迁移。这一研究通过CRISPR/Cas9技术成功构建了TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系(HEK293-TKO),为RNA甲基化研究提供了一种有效的工具;TRDMT1基因可能与细胞的增殖和迁移有关。     

聚焦生猪市场

<正>2018年8月,我国确认出现首例非洲猪瘟疫情,截至2019年7月3日,全国共发生非洲猪瘟疫情143起,扑杀生猪116万余头。根据农业农村部公布的最新数据,2019年5月全国生猪存栏24 894万头,与去年同期相比下降22.90%;全国能繁母猪存栏量为2 489万头,与去年同期相比下降23.90%。生猪存栏量的大幅下降和疫情对生猪养殖行业的巨大冲击,让生猪价格一直处在"过山     

高产广适玉米新品种囤玉3318的选育及栽培技术

囤玉3318是河南省金囤种业有限公司于2010年用自选系J9078作母本、自选系J12Q008作父本杂交组配而成的玉米单交种,并于2018年通过山西省审定。该品种具有高产、稳产、抗病、广适、活秆成熟等特点。适宜在山西省南部复播区种植,适宜密度4 500～4 800株/亩。     

苜蓿干草调制贮藏技术研究进展

苜蓿不仅营养价值高,而且适口性好、产量高,是优质的动物饲料。为了使苜蓿能够被更高效地加工利用,总结了前人在苜蓿收获与贮藏等生产环节中的经验,综述了苜蓿从刈割、翻晒、打捆到贮藏等流程的进展。     

肉鸡有机磷类农药中毒的防治

近日锦州市大围子村养殖户家发生了一起肉鸡敌百虫的中毒事件.原因是进入夏天,农户家担心虫卵复生而导致寄生虫病的发生,所以在家里展开了一次用敌百虫灭虫卵的活动.不小心将农药滴落到肉鸡的饲料中,结果导致58只肉鸡中毒,27只鸡死亡. 1病因 此农户由于担心饲料霉变,而将饲料铺洒在料库中间.当用敌百虫灭蝇卵时,导致敌百虫污染到饲料而引起中毒.因为敌百虫为有机磷酸酯类化合物,经消化系统、呼吸系统及皮肤黏膜均可吸收.此次是因为肉鸡采食到能够引起中毒剂量的含药饲料后,经胃、肠消化器官吸收进入动物机体后与肉鸡体内的胆碱酯酶结合,形成了磷酯化的胆碱酯酶,从而抑制胆碱酯酶的活性,使其失去了水解乙酰胆碱的能力,导致乙酰胆碱在肉鸡体内大量蓄积,导致部分肉鸡中毒甚至是死亡.     

仔猪白肌病的防治

仔猪白肌病是由于微量元素硒及维生素E缺乏引起的营养代谢性疾病。因仔猪发病率较高，多见骨骼肌、心肌纤维以及肝组织发生变性、坏死和渗出性素质及脑软化为主要特征的病变，因病变部位肌肉色淡，甚至苍白而得名。1病因缺硒可分为两种情况。一为饲养环境缺硒，随着标准化养猪模式的实行，圈舍地面多为混凝土，土壤中的硒元素仔猪不能吸收。二为条件性硒缺乏，由于仔猪饲料配合不当，长期饲喂缺硒饲料或因阴雨过多，使饲料的硒含量减少。此外，仔猪本病的发生与含硫氨基酸及维生素A、B、C缺乏等因素有关。     

小菜蛾取食对2个芥菜变种芥子油苷组分和含量的影响

以2个芥菜变种(大叶芥和宽柄芥)为材料,研究小菜蛾对芥菜为害的选择性,并采用高效液相色谱法分析小菜蛾取食和机械损伤对叶片中芥子油苷组分和含量的影响.结果发现,小菜蛾对大叶芥的为害程度明显大于宽柄芥.在正常生长的宽柄芥和大叶芥叶片中分别检测到6种和8种芥子油苷,其中2-丙烯基芥子油苷是2个变种叶片中最主要的组分,占总含量的92%以上.宽柄芥叶片总芥子油苷含量极显著低于大叶芥,两者分别为7.21μmol/g和13.31μmol/g.当叶片被小菜蛾取食24h后,2个变种总芥子油苷含量均明显升高,且宽柄芥叶片升高的幅度远大于大叶芥,分别达21.35μmol/g和20.49μmol/g;而2个变种各组分中2-丙烯基芥子油苷含量升高更明显,且宽柄芥叶片升高的幅度同样远大于大叶芥.同时,小菜蛾取食诱导2个变种叶片合成了新的芥子油苷组分,其中大叶芥叶产生了一种含量很低的吲哚族芥子油苷(4-羟基吲哚-3-甲基芥子油苷),而宽柄芥中产生了一种低含量的脂肪族芥子油苷(10-甲基亚磺酰癸基芥子油苷)和一种低含量的吲哚族芥子油苷(1-甲氧吲哚-3-甲基芥子油苷).研究表明,2个芥菜变种中叶片芥子油苷含量高者受小菜蛾为害重,小菜蛾取食会诱导芥菜产生新的芥子油苷,并且诱导芥子油苷大量合成,但对不同变种的诱导作用存在差异.2-丙烯基芥子油苷在芥菜响应昆虫取食胁迫中发挥主要作用,且受害程度轻的芥菜中2-丙烯基芥子油苷对昆虫取食胁迫的反应更敏感.     

乘胜前进 创新发展 把农机社会化管理工作提高到新水平

1.2011年上半年山西省农机社会化服务管理工作成绩突出2011年全省计划新建农机专业合作社200个,上半年实际新建163个,完成全年目标的81.5%。全年计划新增农机大户1000个,实际新增农机大户575个,完成目标任务的57.5%。全年新增农机维修网点目标任务150个,实际完成新增111个,完成目标任务的74%。