双抗夹心ELISA方法检测转cry8Ca基因烟草的杀虫蛋白

为了检测抗金龟子幼虫的转cry8Ca基因烟草杀虫蛋白的含量,对双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测体系中的反应条件进行了优化.采用方阵法对血清抗体的反应浓度进行筛选,对提取液、包被液、封闭液和底物作用时间进行比较和优选,结果确定多克隆抗体浓度为1:3200.酶标结合物浓度为1:400,pH 9.6碳酸缓冲液提取,pH7.4磷酸缓冲液包被,0.5%明胶.PBST封闭,TMB底物作用15 min为最佳双抗夹心ELISA检测条件.通过这一检测体系,对转cry8Ca基因烟草植株进行检测,S12株系的Cry8C蛋白含量最高,每克鲜重含有12.683～14.461 Pg,占总蛋白量的0.052%-0.062%.     

对苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株增效剂的初步筛选

测定了19种化合物包括无机盐、有机物等,在添加浓度为0.1%,0.2%,0.5%和0.8%的剂量下对HBF-1晶体粉剂的增效作用。采用浸饲料饲喂法的方法进行试验,初筛结果表明:无机类:MgSO4(0.5%,0.8%),CaCl2(0.5%,0.8%),MgCl2(0.5%,0.8%)等三种物质有显著的增效作用;有机类:柠檬酸(0.2%,0.5%,0.8%)对HBF-1菌株有明显增效作用。     

球孢白僵菌HFW-05几丁质酶基因的克隆与序列分析

通过对粉虱、小菜蛾高效的球孢白僵菌HFW-05几丁质酶基因的克隆及序列分析,旨在从分子水平上了解HFW-05菌株的几丁质酶特性。根据已发表的几丁质酶基因序列(EU828354)设计几丁质酶基因全长引物,扩增HF-WBbchit1全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)克隆载体pMD19-T连接获得含有HFWBbchit1全长基因的重组质粒pMDchit1并测序。该基因的编码区包括1 047 bp,编码了348个氨基酸,分子量约为36.795 kDa,进行同源性比较分析结果表明:其基因序列与球孢白僵菌菌株NCIM1216几丁质酶基因(EU828354)和球孢白僵菌菌株Bb0062几丁质酶基因(AY145440)的核苷酸同源性最高,同源性达到98%。氨基酸序列与球孢白僵菌菌株Bb0062几丁质酶(AAN41259)同源性达到99%。     

苏云金杆菌与其他芽孢杆菌在土壤中消长动态的关系

选用具有天然标记的产核黄素的苏云金杆菌(以下简称Bt)CH菌株作为供试菌株,在土壤模拟条件下与钾细菌、磷细菌及土壤中固有芽孢杆菌之间消长动态的关系进行了初步研究。结果表明,Bt与土壤中固有的芽孢杆菌之间不存在拮抗关系。在自然土壤中,供试Bt与钾细菌或磷细菌混合添加处理与不添加处理土样中菌数的消长变化趋势几乎完全相同,由此可以说明,它们之间也不存在拮抗关系。在没有其他生物因子影响的灭菌土壤中,供试Bt与钾细菌、磷细菌之间表现出一定程度上的生存竞争关系。     

河北棉铃虫疾病发生及流行的田间调查

１９９５～１９９７年在河北省邯郸、衡水、保定３个市对１～４代棉铃虫幼虫进行了调查,结果表明：能够抑制棉铃虫种群数量变动及导致疾病发生与流行的主要病原菌种类有病毒,包括核型多角体病毒、质型多角体病毒和颗粒体病毒;细菌为苏云金杆菌;真菌有绿僵菌和白僵菌。因感病致死的棉铃虫视年度、世代不同而差异显著,平均死亡率为２１．１％,高的可达５７．１％。研究还表明：棉铃虫疾病的发生及流行与宿主种群、病原菌种群及环境因素关系密切。     

大茂山地区苏云金芽孢杆菌分布与多样性研究

为了对大茂山地区苏云金芽孢杆菌的分布与多样性进行研究,本试验利用温度-抗生素筛选法从大茂山不同海拔地区采集的784份土壤样品中分离得到76株苏云金芽孢杆菌,发现在海拔900~1200 m之间为土壤最佳采集区域。对这76株菌株进行光学显微观察,发现其伴孢晶体呈现球形、菱形、方形、不规则形等多种形态;PCR-RFLP对分离获得的76株菌株基因鉴定发现,主要包含cry1、cry2等7种基因类型,其中有28株未鉴定出基因型;其SDS-PAGE晶体蛋白分析发现,这些菌株主要表达130 kDa、97 kDa、66 kDa和45 kDa蛋白。对铜绿丽金龟进行生物活性测定,17株具有高毒力的菌株中的16株含有cry8Ca基因,另一株未鉴定出已有基因型。从晶体形态、基因类型、SDS-PAGE检测以及生物活性方面均说明苏云金芽孢杆菌在河北省大茂山地区的分布具有良好的多样性。     

苏云金芽孢杆菌的研究发展史与"十一五"立项思考

论述了苏云金杆菌研究发展史以及主要研究领域和今后的研究热点,并对“十一五”立项进行了探讨。     

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎的毒力测定

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后生产高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株     

河北苏云金杆菌的分布与不同土壤类型及不同植被种类的关系

从河北省６个生态区１４８个县（市）采集土样４６３７份，分离到苏云金杆菌２４１株。结果表明苏云金杆菌在不同土壤类型及不同植被条件下的分布有很大差异。草甸褐土中分出率最高，为１４％；而粟钙土、湿潮土等分出率较低，仅为２％左右；在风沙土和盐土中未分离到苏云金杆菌。     

一株对美国白蛾高毒力苏云金芽孢杆菌的杀虫基因鉴定

美国白蛾是一种重要的检疫害虫,为进行有效地控制,筛选出了一株对其具有高毒力的苏云金芽孢杆菌。HYW-8是从黑龙江伊春市土壤中通过抗生素筛选法分离到的一株形成小菱形晶体的苏云金芽孢杆菌,利用PCR-RFLP对其基因型进行鉴定,并采用浸液法对美国白蛾进行生物活性测定。结果发现,菌株HYW-8含有cry1Ab、cry1E基因和一种未知cry2基因。生物测定结果表明,其对美国白蛾具有很高的杀虫毒力,LC_(50)为7.4×10~5芽孢/mL,低于标准菌株HD-1。因此,HYW-8对防治美国白蛾具有较强的应用潜力。