猪睾丸组织定量PCR分析中内参基因的选择

【目的】采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对基因表达进行分析时,选择适当的内参基因是获得准确分析结果的关键。在猪睾丸分子生物学研究中,表达稳定的蛋白编码内参基因和micro RNA(miRNA)内参基因均有哪些目前尚不清楚。本研究旨在筛选出合适的内参基因,为准确定量不同时期猪睾丸组织中目的基因的表达提供可靠依据。【方法】选用8个不同发育时期(E 90、D 1、D 30、D 60、D 90、D 120、D 150、DM)的猪睾丸组织为材料,采用Trizol裂解法提取各样品的总RNA,利用Nan Drop ND-2000分光光度计检测总RNA的浓度和纯度。设计并合成已报道的猪其他组织中表达相对稳定的5个编码内参基因(GAPDH、TBP、β-actin、SDHA和B2M)以及5个miRNA内参基因(U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103)的特异性引物序列,逆转录得到cDNA模板后,按1:10梯度稀释为7个浓度梯度进行qRT-PCR反应以构建标准曲线。并对10个候选内参基因在各时期睾丸组织中的表达情况进行实时荧光定量全面检测,采用Ge Norm法对定量结果进行综合分析,最后根据内参基因稳定性值(M值)的大小筛选出最稳定的参考基因;M值越小,表明内参基因的稳定性越好,反之则越差。【结果】对GAPDH、TBP、β-actin、SDHA、B2M、U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103 10个候选内参基因的熔解曲线进行分析发现,均无非特异扩增及引物二聚体,说明各内参基因特异性良好,qRT-PCR反应的专一性高;以Ct值为纵坐标,相对拷贝数的对数为横坐标进行标准曲线分析可知,各内参基因在系列稀释的浓度梯度内具有良好的线性关系;通过对10个候选内参基因在不同时期猪睾丸组织中的表达稳定性分析发现,蛋白编码基因中,最稳定的为TBP,最不稳定的是GAPDH;miRNA候选内参中,最稳定的为U6,最不稳定的是ssc-miR-26a。【结论】成功筛选出猪睾丸组织基因表达分析中稳定表达的内参基因TBP和U6,可作为猪睾丸组织基因表达研究中最佳内参基因候选者。     

玉米水解物对糖醋酒液的叶面附着性的影响

制备玉米水解物,将其与适量的糖醋酒液混配,再用清水稀释,获得不同浓度的一系列混合液(A～E)。测定了各种混合液的粘度值和叶片附着率,同时测试了它们对橘小实蝇雌虫的引诱效果。结果表明:玉米水解物+糖醋酒混合液C(玉米水解物的浓度为350 mL/750 mL)的粘度值为1117.3 MPa·s,在苹果叶片上的附着率在75%以上;与糖醋酒液相比,混合液C对橘小实蝇雌虫的引诱效果无显著变化。     

南充市区夏季鸟类群落结构调查

近年来．不少学者对南充鸟类多样性进行了研究,但关于夏季鸟类群落方面的报道很少。2013年3—5月对该地区的鸟类采用路线统计法进行了调查,共观察到鸟类34种,隶属4个目16科,其中非雀形目6种,雀形目28种。     

江苏省推进化肥定额使用面临的挑战与对策

化肥是保障粮食安全的基础,但过量投入会造成资源浪费和农业面源污染,严重制约农业绿色低碳发展。本文从生态环境保护、农业绿色转型、农产品品质提升、化肥减量潜能挖掘等方面分析了江苏省推进化肥定额使用的必要性,提出推进化肥定额使用面临的挑战以及应对策略。     

浅析小鹅瘟病的综合防制

小鹅瘟病是由小鹅瘟病毒引起雏鹅的急性或亚急性败血症性传染病,临床上以渗出性肠炎为主要病理变化,有时表现神经症状。本病易发于４～２０日龄的雏鹅,发病后传染快,病死率高。现将近几年来小鹅瘟病综合防制情况浅析如下。１流行特点１．１在自然感染情况下,只有雏鹅...     

围封、浅耕翻改良对退化羊草草甸草地土壤种子库的影响

应用幼苗萌发法比较研究了浅耕翻改良、围封改良和自由放牧对退化羊草草甸草地土壤种子库的影响.结果表明,浅耕翻改良、围封改良措施均可显著提高退化羊草草地土壤种子库的密度,改善种子库的物种组成结构,其中围封改良较浅耕翻改良措施对土壤种子库的补偿和修复更为有利.     

山西省中部地区紫花苜蓿引种试验

研究比较了引进国外的9个紫花苜蓿品种和阿尔冈金苜蓿的生长特性、产草量、营养价值。结果表明,引进的9个紫花苜蓿品种的各个性状均优于对照品种,其中PHABULOUS、GRANDEUR、WL323等3个苜蓿品种长势和再生性强、产草量高、营养丰富,适合山西省中部地区大面积推广种植。     

牛粪生物利用研究进展

随着养殖业的快速发展,规模化养殖奶牛和肉牛的数量增多,牛粪的排放总量也快速增加,牛粪中含有大量的矿质元素和丰富的营养成分,是一种良好的生物质资源.基于此,就牛粪在养殖、有机肥、能源及其他方面的利用进行综述,旨在为牛粪的处理及综合利用提供参考.     

松材线虫病及其媒介昆虫松墨天牛综合防治进展

松材线虫病和松墨天牛是全球性的林业检疫病虫害,而引起松材线虫病的唯一病原即为松材线虫,且松材线虫需借助松墨天牛进行传播。目前我国已根据松材线虫和松墨天牛的生物学特性和发生规律等研发了一系列综合防治措施,在松材线虫病和松墨天牛防治中取得了一定成效。本文总结了现有的防治措施供林业实际生产中选择实施,并为后续研发提供参考。