花生毛状根诱导及其体外培养

[目的]优化花生毛状根诱导条件,为体外培养毛状根生产白藜芦醇以及培养花生根结线虫奠定基础。[方法]研究不同的发根农杆菌及其菌液浓度、外植体类型、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导的影响。[结果]发根农杆菌ACCC10060的毛状根诱导率高于ATCC11325;幼叶外植体的毛状根诱导率高于子叶;最佳侵染菌液浓度为0.2～0.4;最佳共培养时间为2 d;最佳侵染时间为10～15 min;菌液中添加75μmol/L乙酰丁香酮(AS)可以提高毛状根诱导率。通过毛状根能在无激素的MS培养上自主生长以及毛状根冠瘿碱检测,确定发根农杆菌中Ri质粒中已整合到花生基因组中。毛状根体外培养的研究表明,液体培养效果好于固体培养,最佳液体培养基为无激素的MS培养基。[结论]该研究建立的花生毛状根培养体系,将为花生转基因技术的完善及利用毛状根生产白藜芦醇和无菌的花生根结线虫提供试验基础。     

一个花生EMS突变体的鉴定及其生长习性的遗传分析

生长习性是影响花生种植密度的重要因子,与株型育种及产量高度相关。花生突变体A38来自匍匐型高油酸品种Sun Oleic97R的EMS诱变,其株型直立,且高抗花生晚斑病。本研究以该突变体A38与其野生型Sun Oleic97R杂交构建的F_1、F_2群体为材料,开展了A38的表型鉴定及其生长习性的遗传分析。与匍匐型的Sun Oleic 97R相比,突变体A38的生长习性为直立型,所有F_1植株表现半匍匐表型,F_2分离群体中直立、半匍匐和匍匐的分离比例比符合1∶2∶1。表明A38的直立突变表型受单隐性核基因控制,匍匐对直立为不完全显性。研究结果将为下一步控制花生生长习性基因的克隆、株型的分子设计育种改良奠定基础。     

荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究

利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序。测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%。Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础。     

利用组培方法鉴定花生苗期抗旱性

为评价不同花生品种(系)苗期的抗旱性,本试验将聚乙二醇(PEG-6000)加入到MS0培养基模拟干旱胁迫,测定不同浓度PEG-6000胁迫条件下12个花生品种(系)离体主茎的生根特性,应用隶属函数法评价其苗期抗旱性。结果表明,45 g/L是评价花生品种(系)苗期抗旱性的适宜PEG-6000浓度。根据隶属函数值,花育16号的抗旱性最强,花育19号和H1816为中等抗旱品种(系),弱抗旱品种(系)为C70532、花育46、花育9812、NP13、H2833、丰花1号和花育45号,不抗旱品种(系)为花育53号和花育25号。     

影响夏玉米增产的主要原因及对策

一、影响夏玉米增产的主要原因 (一)没能一播全苗 1、种子发芽率不一,播种时一样对待.有的种子发芽率高达90%以上,有的种子发芽率刚达国标85%,农民没作发芽试验,加上农村大都使用机播,将发芽率高的种子和发芽率偏低的种子定成一个播塞播种,发芽率低的种子出苗偏稀,造成缺苗断垄现象.     

基于Geoprocessing的油菜产地肥力自动分析方法

以湖北省油菜主产地肥力信息为例,利用Kriging方法进行肥力分析的流程,建立Geoprocessing模型.通过对土壤养分数据更新建模,进一步阐明Geoprocessing模型的重构方法.结果表明,Geoprocessing在进行油菜肥力分析时能提高效率.     

miRNA-125b在牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞中诱导细胞凋亡的研究

为研究miRNA-125b在致细胞病变牛病毒性腹泻病毒(cpBVDV)感染牛肾细胞(MDBK细胞)过程中诱导细胞凋亡的机制,本研究将cpBVDV感染MDBK细胞,并将构建的pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞作为阳性对照.采用荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测细胞中miRNA-125b和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2) mRNA转录水平,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率.检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞中miRNA-125b的转录水平分别为正常细胞对照组的2.01倍和3.85倍,Bcl-2 mRNA的转录水平分别为对照组的0.71倍和0.31倍;pcDNA-miR-125b转染MDBK细胞48 h后,Bcl-2 mRNA的转录水平为正常细胞对照组的0.42倍.细胞凋亡检测结果显示,cpBVDV感染MDBK细胞12 h和24 h,细胞的凋亡率分别为15.06％和36.43％;pcDNA3.1-miR-125b转染48 h,细胞的凋亡率为25.56％.结果表明miRNA-125b在cpBVDV感染MDBK细胞过程中能够通过抑制抗凋亡基因Bcl-2 mRNA转录水平从而诱导细胞产生凋亡.     

花生对北方根结线虫病抗性遗传规律的研究

用对花生根结线虫病表现抗性和感病的材料进行杂交,并将杂交得到的F1代种子及F1代自交得到的F2代种子种植在病圃内,调查植株的抗感病性,结果显示,F1代植株全部表现为感病,F2代抗病植株与感病植株的分离比率为1∶3,符合遗传分离规律。初步认为,亲本花生抗病材料的抗性是受一对隐性基因控制。     

花生花药培养的初步研究

本研究对14个基因型花生的花药进行了培养。结果表明,花药愈伤组织诱导率受基因型、花蕾长度、蔗糖浓度和基本培养基等因素的影响。小孢子单核期为适宜的诱导时期,培养基以6％～13％蔗糖浓度的B5培养基较好;基因型不同,愈伤组织诱导的最适基本培养基不同,在接种的14个基因型中,11个基因型(占78．57％)在B5培养基上产生较高的愈伤组织诱导率,变幅为62．75％～97．8％。在附加4．0mg／L 6-BA、0．5mg／L TDZ和0．4mg／L AA的改良MS养基上,基因型19获得了11．63％的体胚分化率。     

实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立

根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明：构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7~21和8~25,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43℃、86.09℃,表明扩增产物特异性非常好。本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定。