一种高效提取桑树根围土壤微生物总DNA的方法

为了建立桑树根围土壤微生物群落结构的分子生态学试验技术体系,采取不同的细胞裂解方法及DNA沉淀方法直接提取桑树根围土壤微生物总DNA,并以采用试剂盒提取的桑树根围土壤微生物总DNA为参照,筛选出一种能有效提取高纯度、多样性土壤微生物总DNA的方法:以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(SDS)为裂解液,经反复冻融裂解细胞,在DNA提取液中添加聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)、牛血清蛋白(BSA)、CaCl2去除腐殖酸,并结合聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀和纯化DNA。该方法简便、快速,获得的桑树根围土壤微生物基因组DNA分子长度在23 kb以上,土壤鲜样的微生物DNA产率为11.2μg/g,且纯度较高,D(260 nm)/D(230 nm)=1.42,D(260 nm)/D(280 nm)=1.37,可直接用于PCR扩增及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。     

进境番茄种子中番茄褐色皱纹果病毒的检测鉴定

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是烟草花叶病毒属新成员,番茄和辣椒是其主要寄主,被中国、欧盟、美国、澳大利亚、土耳其、新西兰、智利、阿根廷、俄罗斯、哈萨克斯坦、泰国等国家或地区纳入需检疫的有害生物.我们利用电镜观察、RT-PCR和SYBR Green实时...     

丁香疫霉病菌PCR和实时荧光PCR检测

 为了快速、准确地检测丁香疫霉病菌 (Phytophthora syringae, PSY),根据GeneBank中PSY的ITS序列设计特异引物Psy1/Psy2和探针P-Psy,建立了常规PCR和实时荧光PCR检测方法。利用引物Psy1/Psy2扩增供试的26株PSY能得到585 bp的预期目标条带,但扩增其它61个非PSY供试菌株不能得到预期产物,检测灵敏度为12 pg菌丝DNA;探针P-Psy对供试26株PSY表现为阳性扩增,而对其它菌株和空白对照均表现为阴性扩增,检测灵敏度可达120 fg菌丝DNA,比常规PCR高100倍;引物Psy1/Psy2和探针P-Psy对5 g土壤中PSY卵孢子的检测灵敏度分别为20 000个和200个。样品检测试验表明两种PCR方法可用于口岸植物检疫中快速、准确和特异地检测丁香疫霉病菌。     

进境新西兰猕猴桃中猕猴桃果腐病菌的检测与鉴定

对来自新西兰的猕猴桃进行了病原菌的分离培养,结果在果实中分离到2株疑似猕猴桃果腐病菌的菌株Na-3419和Na-4756。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Na-3419和Na-4756在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,菌株Na-3419与Gen Bank中登录号EU482221.1和EU482220.1的菌株序列同源性达到100%,菌株Na-4756与Gen Bank中登录号AY359230.1、AY359226.1和KR859079.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种猕猴桃3 d后开始发病。根据上述试验结果,将分离获得的菌株Na-3419和Na-4756鉴定为猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)。这是上海口岸首次在进境的猕猴桃果实上截获该有害生物。     

2种桑树砧木实生苗对干旱和淹水的生理生化响应特征

以生产中常用的广东桑和鲁桑2种桑树砧木类型1年生实生苗为试材,采用自然干旱和盆栽淹水法,研究了桑树砧木实生苗对干旱胁迫和淹水胁迫的生理生化响应变化特性.结果 显示,2种桑树砧木实生苗光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)和胞间CO2浓度(Ci)随干旱和淹水处理时间的增加而下降.干旱条件下,2种桑树砧木实生苗MDA含量、H2O2含量、Pro含量、POD酶活性和CAT酶活性随干旱处理时间增加而升高,且鲁桑实生苗高于广东桑实生苗,而SOD酶活性呈不断下降趋势.淹水条件下,2种桑树砧木实生苗MDA含量、H2O2含量、POD酶活性、CAT酶活性和SOD酶活性随淹水时间增加而升高,且广东桑实生苗高于鲁桑实生苗,而Pro含量呈不断下降趋势.不同类型桑树砧木实生苗在不同胁迫条件及不同处理时间下,各生理生化指标存在显著差异.综合隶属函数、主成分分析法对2种桑树砧木实生苗进行耐旱性和耐淹性综合评价分析,鲁桑实生苗表现出较强的耐旱能力,而广东桑实生苗表现出较强的耐淹水能力.     

多重RT-PCR方法检测3种检疫性病毒的研究

根据番茄环斑病毒(ToRSV)、南芥菜花叶病毒(ArMV)和草莓潜隐环斑病毒(SLRSV)3种检疫性病毒的外壳蛋白基因保守序列设计特异性引物,在建立各种病毒单个RT-PCR技术的基础上,通过优化多重RT-PCR反应条件,初步建立了同步检测这3种病毒的多重RT-PCR检测体系。结果表明:3对引物特异性较强,分别可以扩增出580、438、298bp的目的片断;该方法快速、灵敏、准确,为同时检测进境百合中多种病毒提供了参考。     

鸢尾黄斑病毒研究进展

鸢尾黄斑病毒是番茄斑萎病毒属一种新近检测鉴定的病毒。本文对该病毒的理化特性、传播方式、寄主范围和危害症状、检测方法和防治方法等方面进行了综述。     

兰花褐斑病菌可视化基因芯片检测技术

兰花褐斑病菌(Acidovorax cattleyae,Ac)是一种严重为害兰花的检疫性有害生物。根据Lep A基因序列设计特异性引物和探针,利用可视化基因芯片技术,建立了Ac的基因芯片检测方法。测试结果显示,供试的3株兰花褐斑病菌菌株均为阳性,其他19株对照菌株为阴性。菌体DNA的检测灵敏度可达到450 fg,是常规PCR的100倍;人工模拟感染兰花样品的检测灵敏度为1.6×10~3 CFU。可视化基因芯片检测技术的强特异性,高灵敏度,易操作性和低成本特点适合口岸一线和基层实验室开展兰花褐斑病菌的快速检测。     

转基因植物生产基因工程疫苗技术

用转基因植物生产有用的外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统，它可能替代传统的外源蛋白生产体系。通过外源基因的瞬时表达或稳定表达方式，多种基因工程疫苗已在植物中表达成功，并保持良好的免疫原性。本文概要介绍了国内外利用转基因植物生产疫苗的研究现状，并对转基因植物生产疫苗的潜在优势、存在的问题及其相关技术作一综述。     

果园覆草的生理生态基础

长期以来,我国的果树生产过分依赖化肥农药、化学制剂、深井灌水等人工技术,虽然取得了暂时的商业利益,但也带来了诸如果园肥力退化,环境化学污染,地面蒸发加剧,果树生产能力衰退等问题.因此,必须采取措施创造合理的人工生态系统,保持生态相对平衡.