Construction of eukaryotic expression vector of fusion gene CD80-IgG and its expression in Chinese hamster ovary cells

AIM: To construct the eukaryotic expression vector CD80-IgG by fusing the cDNA encoding extracellular portion of murine CD80 to the 5'-terminus of cDNA encoding Fc fragment of murine immunoglobulin G1 and to express the fusion protein in Chinese hamster ovary (CHO) cells. METHODS: The two cDNAs was amplified by PCR respectively from plasmid pcDNA/B7 containing the full-length cDNA of murine CD80 from murine spleen cells, and cloned to the eukaryotic expression vector pcDNA3.0 by directional cloning. The resultant recombinant plasmid pcDNA/CD80-IgG was transfected into CHO cells with liposome transfection reagent. The stably expressing cells were obtained by G418 screening. Western blot, Dot ELISA, and flow cytometry were used to detect the expression of the fusion protein and its immunological activity. RESULTS: DNA sequencing verified the correction of the construction of recombinant plasmid pcDNA/CD80-IgG. The expressed fusion protein was detected in the supernatant of transfected CHO cells and the molecular weight of the protein was similar to what we expected. Its immunological activity was also established. CONCLUSION: The recombinant plasmid pcDNA/CD80-IgG was successfully constructed and it expressed the fusion protein CD80-IgG.     

广东省广州市活禽批发市场从业人员H7N9流感“知信行”现状调查

为了解广东省广州市活禽批发市场从业人员对H7N9流感的认知、态度和行为,也为制定针对性的健康教育措施提供依据,2017年4—5月对广州市全部6个活禽批发市场的435名从业人员进行了问卷调查。调查结果显示:318名密切接触人员和117名非密切接触人员对H7N9流感相关知识的总知晓率分别为80.59%和69.60%;在"发现对禽高致病性的H7N9流感病毒""病死禽应该进行深埋或焚烧等无害化处理""外省养殖场发生过H7N9流感疫情"方面,密切接触者的知晓率显著高于非密切接触者(P0.03);获取H7N9流感知识的途径主要有培训,以及电视、网络和海报等宣传媒介;绝大多数市场从业人员认为政府有能力防控H7N9流感,对政府采取的H7N9流感防控措施及对目前的"1110"制度感到满意,认为活禽集中屠宰可行(P0.01);从业人员在预防H7N9流感时,接触禽类后用肥皂或洗手液洗手的占比最高(83.45%),其次是戴手套(69.20%)和穿水鞋(63.91%),而戴口罩(39.77%)和用消毒液消毒手(35.86%)的占比较低。调查认为,广州市活禽批发市场从业人员的H7N9流感知识知晓率较高,但个人防护措施实施不全面。调查结果提示,应充分利用培训,以及电视和网络等优势媒介,强化微信和微博等新兴媒介,加强对H7N9流感防控知识的宣传。     

潜伏期马立克氏病病鸡血清型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析。结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的。     

我国马铃薯帚顶病毒的分子检测

<正>马铃薯是我国第四大粮食作物,在生长过程中易受多种病毒侵染,其中马铃薯帚顶病毒(potato mop-top virus,PMTV)致病性强、危害严重,被我国列入进境植物检疫禁止进境物名录。该病毒于1966年在爱尔兰和北苏格兰被首次发现(CalvertHarriso,1966),随后扩散蔓延到世界诸多马铃薯主产区。感染该病毒的植株主要表现为帚顶,上部叶片出现褪绿V型环纹,基部叶片出现不规则黄色斑块、环纹和     

烟草气候斑病的发生规律及防治

１９９０－１９９４年研究结果表明，低温是诱发气候斑病的主要因素，不同品种抗性差异显著，氮钾比失调，偏施碳铵地发病严重，当大面积种植感病品种，寄主处于感病阶段，遇气温突然下降和多雨时，最易流行。在防治上，采取以农业防治为主、化学辅的有效措施。     

铅、镉和铬在叶类蔬菜中的累积及对其生长的影响

 研究结果表明: 重金属元素铅(Pb) 、镉(Cd) 、铬(Cr) 对几种叶类蔬菜生长和产量都有明显的影响, 且其影响因蔬菜种类、元素种类和浓度的不同而有很大差异, 叶用莴苣> 苋菜> 芥菜> 菜薹>蕹菜, Cr > Cd > Pb ; 不同蔬菜类型可食部位积累重金属元素的顺序为苋菜> 叶用莴苣> 菜薹> 蕹菜> 芥菜;各元素从营养液向蔬菜体内转移的迁移累积率顺序为Cd > Cr > Pb。随着各元素浓度的增大, 对蔬菜生长的影响和其可食部分的富集量随之加大。     

香菇原生质体单核体的再生与交配型的关系

在８个香菇菌株原生质体单核体交配型的测定中,有４个菌株测定出两种交配型,其余４个菌株只测得一种交配型。在得到两种交配型的菌株中,其交配型比例也不是１∶１。进一步的实验表明,产生这一现象的主要原因与两种交配型原生质体单核体的再生能力不同有关。在申香２号菌株１０７个单核体中,ＡｘＢｘ交配型只有２６个,而且都是在再生阶段的前期产后的,后期出现的单核体则都是ＡｙＢｙ型菌落。     

鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明：所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明：鹅星状病毒FLX株的变异株病毒（命名为SCCD）可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株（命名为SDPD）不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明：鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风（脏器尿酸盐沉积）表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。     

三唑磷在水中残留分析方法的研究

本文以乙酸乙酯加15%NaCl溶液为萃取剂,浓缩后定容,使用气相色谱具FPD检测器,对水样中三唑磷进行残留分析。结果表明,添加浓度在0.001～0.1mg/L范围时,添加回收率102.84%～106.68%,变异系数为0.25%～2.56%,方法的最小检出量为3.5×10-2g,最低检测浓度为0.0001mg/kg。     

Immune responses in piglets infected with highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection compromises the host's innate and adaptive immunity. The aim of this study was to investigate the immune responses of piglets infected with highly pathogenic (HP) PRRSV (HuN4 strain) with or without the immunization with CH-1R attenuated PRRSV vaccine. The response was evaluated for the clinical signs, pathological changes and virus load in immune organs, antibody responses and levels of serum IFN-γ, IL-4 and IL-10. The result showed that in comparison with the piglets received the immunization, the piglets infected with HP-PRRSV alone had the thymus atrophy, decreased serum levels of IL-4 and increased serum levels of IL-10 and INF-γ. These results suggest that elevated IL-10 levels at the early stage of the infection may enhance virus survival and delay the induction of protective immunity, while increased levels of IL-4 induce the effective immune responses and increase the animals' health status.