从土壤中高效分离苏云金杆菌的方法

在醋酸钠分离方法的基础上添加抗生素,能显著提高从土壤中分离苏云金杆菌的效率。当青霉素钠盐和硫酸庆大霉素的浓度分别达到４００μｇ／ｍｌ时,除地衣芽孢杆菌,短小芽孢杆菌和日本甲虫芽孢杆菌有产生长外,其它９种杂菌均不能生长。对２９个Ｂｔ亚种的生长抑制试验结果表明,仅４业种有轻度至中度的生长抑制,但仍能形成孢晶。其它各亚种均能正常生长和形成孢晶。醋酸钠－抗生素方法的可操作浓度为每克土壤稀土２０倍,较醋酸钠     

进境澳大利亚豌豆细菌性萎蔫病病原菌的分离鉴定

 2008年3月自澳大利亚进口的豌豆种苗病变部位分离到致病性菌株,该菌株能引起豌豆茎部、卷须萎蔫腐烂,叶片褪绿等症状。针刺接种豌豆,发生的病变状态与自然发病的症状相同,且在接种发病植株中又分离到形态上一致的病原菌,得到了柯赫法则的验证。经形态特征、培养性状、生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定其为桃色欧文氏菌(Erwinia persicina)。这是我国首次从进境豌豆中检出该病害。     

准噶尔盆地南缘梭梭群落春季融雪期的土壤呼吸动态

积雪对温带中高纬度地区早春土壤温度和水分具有调控作用,并对土壤呼吸具有重要影响。利用箱式法观测2012年早春积雪融化阶段古尔班通古特沙漠南缘典型温带荒漠梭梭群落内土壤呼吸的动态变化。结果表明：春季融雪期梭梭群落土壤呼吸变异极大,变化范围为0.2~1.2 μmol•m-²•s^-1,日平均土壤呼吸速率变化呈先增后减趋势,但土壤最大呼吸速率随土壤含水量的减少而减少。融雪期灌丛内外土壤呼吸变化规律相同,梭梭灌丛内土壤呼吸速率显著高于灌丛外。融雪期土壤含水量与最大土壤呼吸具有显著的相关关系,但在日尺度上土壤温度与土壤呼吸具有显著的相关关系。研究表明：积雪融化对土壤呼吸具有显著的激发效应,早春积雪变化对土壤呼吸速率将产生重要影响。     

东洞庭湖湿地水鸟群落季节动态格局

为了对东洞庭湖湿地鸟类的继续研究提供数据和理论依据,2005年7月~2006年12月采用样方法和样线法对该湿地水鸟进行了调查,共记录到水鸟89种,并对其季节动态格局进行了研究分析,结果表明,全年水鸟种类和数量均是冬季多,夏季少,特别是数量波动有明显的冬季高峰期和夏季低谷期,季节差异非常显著。     

秸秆菌糠在肉羊育肥生产中的应用

中国是世界上食用菌生产第一大国,年产食用菌4.5×106左右[2].食用菌生产后的下脚料——菌糠,其成分主要是食用菌的菌丝残体和经食用菌分解的纤维素、半纤维素和木质素等,含丰定的氨基酸、菌类多糖和矿物质元素,营养价值相当于糠麸类饲料[2,3].     

同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。     

人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达

本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白（ovalbumin,OVA）基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5’端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹（Western blot）法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列（登录号NM₂05152）一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。     

猫人工授精技术研究进展

人工授精技术是一种较先进的辅助生殖技术,可提高繁殖育种的效益,但因猫类较独特的生殖特点,其人工授精技术发展受限。近年来,科研人员和临床工作者借鉴其他物种相对成熟的人工授精技术,结合猫类生殖特点,对猫人工授精过程中精液采集、精液品质评估、精液保存、刺激母猫排卵方式及具体的人工输精等相关技术进行了优化和创新,如开发了新颖实用的尿导管法采精技术以采集猫精液;在传统精液品质评估的基础上,配合使用荧光染色技术、流式细胞技术及体外受精技术对猫精液品质进行评估;探索不同冷冻液配方及冷冻程序对猫精液保存效果的影响,并尝试使用超快速冷冻法保存公猫遗传物质;研究使用不同种类及不同剂量的激素对诱导母猫发情和排卵效果的差异,以及不同输精部位、方法及时机对母猫妊娠结果的影响等。尽管其中一些新技术与方法已在试验动物中彰显出了其实际应用潜力,但当下依旧还存在操作相对复杂、成本较高、效果低于预期等问题,导致目前猫人工授精技术的应用较局限,不如在犬或其他动物中应用广泛,未来还需更进一步研究和探索才能满足临床实际应用的需要。文章就上述猫人工授精技术中各个方面的研究进展进行了综述,以期为该技术的进一步研究和应用提供参考。     

植物甾醇对断奶仔猪生产性能和血液生化指标的影响

为了研究植物甾醇对断奶仔猪生产性能和血清胆固醇等血液生化指标的影响,试验选用28日龄杜长大断奶仔猪90头作为试验动物,随机分为3组,每组3个重复,每个重复10头,分别饲喂基础日粮（空白对照组）与在基础日粮中分别添加40 mg/kg（试验组1）和60mg/kg植物甾醇（试验组2）的试验日粮。试验分三期进行,共34 d。试验结果表明,与对照组相比,植物甾醇试验组降低了断奶仔猪的料肉比（P〉0.05）;试验组1血清总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著降低（P〈0.05）;两试验组组均可显著提高血清总蛋白（TP）含量（P〈0.05）,并对超氧化物歧化酶（SOD）的活性有一定程度的提高作用（P〉0.05）。因此,日粮中添加植物甾醇可以提高断奶仔猪的生产性能,并显著降低其血液胆固醇水平。     

实时荧光定量PCR检测鸭疫里默氏杆菌方法的建立和应用

根据我们实验室发现的鸭疫里默氏杆菌（RA）荚膜多糖蛋白基因序列（DQ151838）,设计和合成荧光定量PCR引物和探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法。该法的表达式Y=-3.416X＋39.492,相关系数1.000,PCR循环效率96.2%,DNA拷贝数在10^0～10^8范围内检测曲线有良好的线性关系。该法的最适Mg^2＋、引物和探针浓度分别为4～5mmol/L、0.16～0.2μmol/L和0.16μmol/L,最低能够检测到RA的DNA模板为2.0copies/μL。1/10半数致死量的RA人工皮下注射感染7日龄樱桃谷鸭后2h即可在心、肝、肺、胸腺、食管中检测到RA核酸;感染后8h即可在心、肝、脾、肺、肾、脑、胰、食管、气管、胸腺、法氏囊、十二指肠、直肠、血液和咽喉拭子检测到RA核酸,36～120h是RA在感染雏鸭除了咽喉、食管和气管各个组织器官繁殖数量最高峰期,其后逐渐下降。RA人工感染致死雏鸭的心、肝、脑RA分离和FQ-PCR检测符合率为100%。对临床送检具有典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭的肝脏、心血和脑组织的FQ-PCR检测的阳性率均为100%,而RA分离的阳性率分别只有74.3%（26/35）、82.9%（29/35）和91.4%（32/35）。FQ-PCR可用于鸭疫里默氏杆菌感染的快速诊断、流行病学调查和鸭产品的检疫等。