体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究

为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89 kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。     

贵州半细毛羊促生长激素分泌素受体基因SNPs筛查与变异分析

通过研究促生长激素分泌素受体（growth hormone secretagogue receptor,GHSR）基因多态性,为贵州半细毛羊选种选育提供进一步的分子生物学依据。试验选取36只贵州半细毛羊构建DNA池,设计1对引物扩增其GHSR基因第2外显子及第1、2内含子部分序列并进行双向测序,对SNPs位点等位基因频率进行估算,利用在线生物信息学软件分析SNPs位点对GHSR基因RNA二级结构的影响。结果发现,在贵州半细毛羊GHSR基因中筛选到2个SNPs：T70G和G229A,均为同义突变,SNPs位点导致GHSR基因mRNA二级结构发生变化。GHSR基因多态性可能影响贵州半细毛羊的生长。     

串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立

利用猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原,建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5 μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,37 ℃封闭2 h;血清最适稀释度为1∶100,37 ℃作用2 h;兔抗猪IgG/辣根酶（HRP）（1∶3000）,37 ℃作用2 h;37 ℃避光显色15 min读取D_{450 nm}值。结果经统计学分析得出,S/P值≥0.254为阳性,S/P值≤0.212为阴性。所建立的ELISA方法检测其他5种猪常见病原阳性血清,其D_{450 nm}值均小于0.212。利用建立的ELISA方法对临床免疫勃林格殷格翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗4周后的猪血清70份进行检测,其D_{450 nm}值均大于0.85,表明本研究建立的重组GP5表位蛋白间接ELISA方法可用于临床样品的监测。     

磷矿周围环境砷污染情况调查

调查磷矿周围环境和畜禽组织砷含量,为掌握磷矿区周围畜禽产品安全提供依据。采用原子吸收光谱法进行测定。结果表明,环境中砷含量从高到低依次为水体、白菜、土壤、大米、玉米、牧草,而辣椒和萝卜未检出砷;鸡内脏及肌肉砷含量从高到低依次为肾脏、肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肌肉;鸭内脏及肌肉砷含量从高到低依次为肾脏、肝脏、肺脏、肌肉、脾脏、心脏;猪内脏及肌肉砷含量从高到低依次为肠、肾脏、肝脏、脾脏,而心脏、肺脏和肌肉未检出。说明磷矿周围饲养的畜禽存在砷污染现象。     

山东省牛主要污染物产生量估算及环境效应研究

[目的]估算了山东省牛粪便的总量及其养分的负荷量和占当年排泄污染物的比例。[方法]根据2010年山东省和各地市牛存栏的行业和统计局两套数据和2012年行业数据,通过计算参数和估算的方法算出了牛粪产生总量。[结果]全省牛粪总共约在7000~9700万 t 之间,占当年所有畜禽粪便产生量的34.07%~37.37%之间,即三分之一以上。德州、济南两市单是牛粪便的土地承载量分别达到了29.7 t/hm2和27.4 t/hm2,接近了欧洲标准30 t/hm2的限量值。[结论]应该引起我们对全省牛业发展方式和发展战略的高度重视。     

鹿血清蛋白抗氧化肽体外抗氧化性及其机理研究

在碱性蛋白酶最适条件下水解鹿血清蛋白,水解时间为0~5 h,鹿血清蛋白抗氧化肽的水解度(DH)随着水解时间增加而增加(P0.05),鹿血清蛋白抗氧化肽还原能力、清除自由基的作用和Cu2+螯合能力随着水解时间的增加而显著提高(P0.05),鹿血清蛋白抗氧化肽能有效抑制硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)生成(P0.05)。结果表明,鹿血清蛋白抗氧化肽的抗氧化活性取决水解时间,鹿血清蛋白抗氧化肽是有效的抗氧化剂。     

新公共管理理念与政府财务报告的完善

自20世纪70年代以后，在全球掀起的一场针对公共部门治理的变革中，以绩效为导向、信息透明为保障、引进商业管理的技术与方法为主要特征的新公共管理运动成了推动这一变革的主导力。在此变革中，最基础的则是政府会计和财务报告体系的改革。论述了新公共管理的基本特征及其对政府财务报告改革提出的要求，并探讨了对我国政府会计和财务报告体系改革的相关问题。     

重庆市经济增长与就业关系的实证研究

利用重庆市1978-2003年人均GDP和三产业就业资料,采用回归分析,研究经济增长对重庆市就业率增长的贡献.结果表明,经济增长对就业的贡献率逐渐降低,同时提出在经济增长的同时能增加就业的几点建议.     

财务信息对上市公司高层变动的影响分析

上市公司高层变动受多种因素的影响,经营业绩是其中一个重要因素,能有效反映公司经营绩效的财务信息,对高层变动的影响也是不容忽视的.通过对深市样本公司的高层变动与会计信息的实证分析,进一步证明了不同会计信息对高层变动的影响程度及二者的关系,从而为投资者和管理者及其他财务数据使用者提供有效的参考依据.     

牛疱疹病毒Ⅰ型gB基因的原核表达及产物的抗原性分析

采用PCR方法，以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因，克隆至pGEM—T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21（DE3），在IPTG诱导下表达。经SDS-PAGE鉴定，gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段在大肠埃希氏菌BL21（DE3）中以融合蛋白形式获得了表达。以磁化组氨酸蛋白纯化系统对融合蛋白纯化后，Western-blotting和ELISA分析结果表明，这些融合蛋白均与BHV-1标准阳性血清反应，可作为抗原用于牛传染性鼻气管炎ELISA检测方法的建立。