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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立 总被引:4,自引:0,他引:4
采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NSl基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。 相似文献
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为了解Nsp2Δ1882-2241缺失后弱化的高致病性PRRSV(TJM株)对宿主免疫学应答的刺激机理,本研究分析了免疫猪血清中的细胞因子及变化规律。将14头4周龄易感仔猪随机分为3组:第1组接种PRRSV TJM-F92株,为免疫组;第2组接种高致病性PRRSV TJ-F5毒株,为攻毒组;第3组不接种疫苗及病毒,为对照组。接种后28d,用TJ-F5毒株攻击试验猪,于不同时间点采集血样,用ELISA法测定血清中的PRRSV抗体、IL-2、IL-10、IL-12p40、TNF-α、IFN-α和IFN-β水平。结果显示:(1)与对照组和攻毒组相比,免疫组猪IL-12p40水平持续上调,于免疫后28d受PRRSV强毒攻击后,其水平开始缓慢降低,但仍高于攻毒后的对照组。(2)免疫组IL-2水平在接种疫苗后的前21d内无明显升高且低于攻毒组,在受到强毒攻击后其IL-2水平却有明显升高。(3)免疫组IL-10水平与对照组无明显差别,并在免疫14d后一直显著低于攻毒组(P〈0.01)。(4)免疫组接种疫苗后的前21d内,TNF-α水平保持稳定,28d明显上调。攻毒组TNF-α水平0~28d一直低于对照组,且在21d达到最低(P〈0.01)。免疫组在28d受强毒攻击后,其TNF-α水平下降且在攻毒7d时最为明显(P〈0.01),此后恢复到正常水平。(5)免疫组免疫后28d时IFN-α水平升高,在受到强毒攻击后再次显著降低(P〈0.01)。免疫组IFN-β水平一直低于对照组和攻毒组,不因强毒攻击而变化。以上结果提示,IL-12上调在PRRSV免疫保护中起明显作用;另外,上调TNF-α及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。 相似文献
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猪瘟在我国被列为一类动物传染病,是危害养猪业生产的主要传染病之一。自2007年起,我国制定了以强制免疫为主的猪瘟综合防控策略,在实施了近10年的强制免疫后,我国的猪瘟群体免疫抗体合格率持续维持在较高水平,病原检出率逐年下降,猪瘟临床表现趋于和缓,流行情况趋于稳定。虽然现阶段仍存在原种场、种猪场和商品场的免疫水平参差不齐,不同省份间免疫状况差异较大,诊断、鉴别技术发展相对缓慢等情况,但强制免疫政策的实施有效控制了猪瘟的发生与流行。2017年猪瘟退出了国家强制免疫计划,改为对符合条件的养殖场实行"先打后补"的财政补助政策,这表明我国猪瘟防控取得阶段性成果,猪瘟防控进入了新的历史阶段。但防控也面临着若干新问题:一是养殖者主体责任意识不强;二是病原阳性率与临床发病率匹配度较低;三是疫情监测网络监测效率低;四是如何做好高密度免疫;五是财政支持政策需进行科学调整;六是需研究猪瘟净化方案。解决好这些问题是我国下一阶段猪瘟防控工作的关键:一要明确养殖者的防疫主体责任;二要厘清猪瘟监测阳性率与实际发病率之间关系;三要强化猪瘟监测网络建设;四要建立系统的疫苗效果评价机制;五要优化财政支持政策,充分发挥政府和市场两种资源;六要尽快研究制定符合我国国情的猪瘟净化技术方案。 相似文献
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细胞粘附分子(cell adhesion molecules.CAMs)是指参与细胞与细胞、细胞与基质之间粘附.影响和调节细胞与其周围环境之间反应的细胞因子。它们在细胞的生长发育、炎症反应、免疫应答、血栓形成、组织修复以及肿瘤的转移等生理病理过程中发挥着重要作用。目前已发现的粘附分子可以分为五类:免疫球蛋白超家族(immunoglobulin guper family,ISF)、选择索家族(seleetin family,SF)、整合素家族(integrin family.IF)、钙粘合素家族(cadhefin family.CF)和归巢受体(homing receptor)。 相似文献
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黄河流域农业水资源优化配置 总被引:4,自引:1,他引:4
黄河流域水资源供需矛盾日趋尖锐,本文围绕水资源最优利用问题,对黄河流域水资源配置原则,农业水资源在地区之间、作物之间以及作物不同生育阶段之间的合理配置进行了分析、探讨。 相似文献
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