我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析

自2006年以来,我国大面积暴发高致病性猪蓝耳病,但目前对其病原HP-PRRSV的起源还不得而知.本试验通过对多株HP-PRRSV进行全长基因组分析,发现HP-PRRSV中存在4处缺失,而且这4处缺失是逐步形成的,在中间过渡类型的毒株中存在着缺失1处、2处、3处的毒株.此外,中间过渡类型毒株中的一些氨基酸基序也是逐步变化的.本试验初步阐明了我国HP-PRRSV的起源是CH-1a-1ike PRRSV,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹.     

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒（SIV H3N2）的HA基因插入到伪狂犬病病毒（PRV）通用转移载体pBdTK-Uni中，获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞，经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞（PK-15、IBRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞）对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较，未见显著差异，对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析，表明该重组病毒遗传性状稳定。     

广东省宠物源伪中间型葡萄球菌的耐药性调查研究

为调查广东省宠物源伪中间型葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)的携带和耐药情况,从小动物临床采集皮肤、耳部和鼻腔等部位的样品,分离鉴定伪中间型葡萄球菌,并采用琼脂稀释法和纸片扩散法对伪中间型葡萄球菌进行抗菌药物敏感性检测,采用PCR方法检测mecA基因。结果表明,从898个样品中共分离到144株伪中间型葡萄球菌,检出率为16.0%,皮肤、耳部和鼻腔的伪中间型葡萄球菌检出率分别为20%(64/319)、17.8%(64/359)和7.5%(3/40)。抗菌药物敏感性检测和mecA基因检测结果显示有89株(61.8%)为耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌(MRSP)。伪中间型葡萄球菌对氨苄西林、红霉素、阿奇霉素、克林霉素和四环素的耐药率均在80%以上,对利福平和阿米卡星的耐药率低于8%,对万古霉素、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀和替考拉宁均敏感。大部分(>69%)MRSP对红霉素、克林霉素、泰乐菌素、阿奇霉素、复方新诺明、四环素、环丙沙星和恩诺沙星等抗菌药物表现耐药。本研究结果表明宠物源伪中间型葡萄球菌的耐药情况严重且MRSP的检出率高,应高度重视宠物源细菌耐药问题。     

美洲大蠊i型溶菌酶基因的克隆及其功能预测

溶菌酶是昆虫先天性免疫系统的重要组成成分。以冈比亚按蚊i型溶菌酶氨基酸序列为种子序列,在美洲大蠊EST库中查找相似序列。通过RT-PCR和RACE PCR技术,克隆获得美洲大蠊i型溶菌酶基因。生物信息学分析表明,所克隆的溶菌酶基因片段长度为525bp,包括5’非编码区12bp,3’非编码区18bp和完整的开放阅读框495bp,其编码164个氨基酸,包括溶菌酶成熟肽137个氨基酸和27个信号肽氨基酸。经同源比对,它与黑腹果蝇和冈比亚按蚊的i型溶菌酶具有同源性,并且具备了异构肽活性的功能位点H,但缺失了抑菌活性的功能位点E/D/S,这为其功能和分子进化研究提供了重要的基础。     

单播草坪匍匐翦股颖溶磷菌筛选及溶磷能力的初步研究

对西安地区单播草坪匍匐翦股颖根际联合固氮菌进行分离的基础上,采用PKO无机磷培养基和蒙金娜有机 培养基对匍匐翦股颖根际分离的联合固氮菌(共获得188种分离物)中具有溶磷能力的菌株(占29.3％),通过对菌株溶 磷圈大小的测定,最终筛选出溶磷能力较强菌株4株,分离物溶解无机磷D/d值在1.324~3.014之间;而溶解有机磷的能力 在1.239~2.156之间。     

Expression and Bioinformatic Analysis of ADIPOQ Gene in Hanper Sheep

The aim of this study was to investigate the expression and biological characteristics of adiponectin (ADIPOQ) gene in longissimus dorsi muscle of Hanper sheep at different months of age.The ADIPOQ gene mRNA expression was detected in longissimus dorsi muscle of Hanper sheep at 3 different growth periods (1,7 and 13 months old) by Real-time quantitative PCR.The bioinformatics method was used to analyze the nucleotide and amino acid sequences of ADIPOQ gene,protein characteristics and network interaction protein.The results showed that ADIPOQ gene was expressed in longissimus dorsi muscle of Hanper sheep,which showed an increasing trend with the growth of the months age without significant difference (P>0.05).There was higher homology of ADIPOQ gene with Capra hircus (98.60%,99.00%) and Bos taurus (98.60%,87.00%) in nucleotide and amino acid sequences.The results of physical and chemical properties analysis showed that the molecular formula of ADIPOQ protein was C₁₁₇₂H₁₇₇₆N₃₁₄O₃₄₉S₅,the molecular mass was 26.00 ku,and the theoretical isoelectric point (pI) was 5.88,which suggested that the protein was acidic.The average value of ADIPOQ hydrophilic protein (GRAVY) was －0.403,which indicated that the protein was hydrophilic and didn’t belong to transmembrane protein.In addition,the signal peptide sequence was Met¹-Ala¹⁷,and the cleavage site was between Ala¹⁷ and Arg¹⁸.ADIPOQ existed collagen structure domain and C1Q conserved structure domain at position 45－101 and 101－237,respectively.The secondary structure mainly composed of random coil (66.95%).The construction of protein interaction network indicated that ADIPOQ might interact with ADIPOR1,ADIPOR2,CDH13 and LEP.The results provided a theoretical basis for further exploring the molecular biological functions of ADIPOQ gene in the process of muscle development in Hanper sheep.     

松嫩平原艾蒿无性系种群根茎的年龄结构研究

将艾蒿根茎划分为不同年龄级,按长度和生物量统计其年龄结构,分析各龄根茎数量特征的变化规律.结果表明:艾蒿根茎的最大存活年龄为4龄;其根茎长度年龄结构为增长型;生物量年龄结构为稳定型;开花期根茎累积长度为6984.8 cm·m-2,根茎生物量为103.7 g·m-2;单位长度根茎的干物质贮存量随着龄级的增加而不断增大;高龄根茎具有较强的生活力;根茎长度比根茎生物量具有更大的生态可塑性.     

H5N1亚型禽流感病毒A/Guangxi/1/2005株抗药机制的研究

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-GX05)。通过全基因测序并与S-GX05全基因序列进行对比,结果显示S-GX05只在其M2蛋白中有一个氨基酸位点发生突变,即A30P;抗药性鉴定这两株病毒的半数药物抑制浓度(IC50)分别为0.9μM和48.9μM,表明R-GX05对金刚烷胺表现出一定程度的抗性。动物实验证实,这两株病毒对BALB/c小鼠的致病性基本一致,均表现出高致病性,其MLD50分别为4.7 log10 EID50和5.0 log10 EID50,两株病毒在小鼠体内各组织脏器中的分布及增殖能力也基本相同。这些结果表明,S-GX05在药物压力下产生抗药性后,并未引起其它生物学特性的改变。A30P的发现为进一步从分子水平上研究H5N1亚型AIV的抗药机制及新型抗流感新药的研发奠定了基础。     

黄芩地膜露头栽培密度研究

目的:探索地膜露头栽培模式下陇西同类地区黄芩栽培的最佳密度。方法:采用35 cm黑膜覆盖露头栽培模式,在控制统一行距的条件下,设计4种不同的株距进行田间栽培试验,通过观测黄芩地上部分、地下药用部位的生长量、试验区药材产量和种子产量等生物经济指标,结合经济效益分析,优选黄芩地膜露头栽培的最佳密度。结果:株距5 cm栽培的鲜药产量较高,但药材商品规格、产籽量均低,增产不增收;株距15 cm栽培的鲜药商品规格较高,但产量和产籽量均偏低,经济效益低;株距10 cm栽培的出苗率、鲜药产量、产籽量、田间长势、药材商品规格表现好。结论:黄芩35 cm黑膜覆盖露头栽培,在陇西同类地区的最佳密度为行距30 cm、株距10 cm,即亩保苗22 000-22 500株。     

颈静脉灌注不同模式的氨基酸混合物对泌乳奶牛乳蛋白合成的影响

本试验旨在比较颈静脉灌注酪蛋白模式和理想模式的氨基酸混合物对泌乳中期荷斯坦奶牛乳产量、乳成分以及乳腺对氨基酸摄取利用的影响。选择8头泌乳中期[泌乳天数:(82±11)d]荷斯坦奶牛作为试验动物,试验采用随机区组设计,将试验牛随机分为2组,分别颈静脉灌注160g/d酪蛋白模式(Casein组)和理想模式的氨基酸混合物(R组)。2个试验组分别以各自灌注前作为空白对照组(C1组为Casein组的空白对照组,C2组为R组的空白对照组)。预试期14d,灌注期5d。试验采用全混合日粮(TMR)饲喂,以玉米、豆粕、棉籽粕、玉米青贮、苜蓿干草和羊草为主要原料,参照NRC(2001)奶牛饲养标准配制。结果表明:灌注酪蛋白模式的氨基酸混合物后,乳蛋白产量和含量较灌注前呈上升趋势(乳蛋白产量上升7.14%,P=0.078;乳蛋白含量上升3.27%,P=0.072);并且,奶牛动脉血浆中异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)和组氨酸(His)的浓度较灌注前有不同程度的上升(Ile的浓度提高31.5%,P=0.097;Leu的浓度提高65.9%,P=0.041;Lys的浓度提高36.9%,P=0.088;His的浓度提高40.1%,P=0.010),而苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)和精氨酸(Arg)的浓度在数值上虽较灌注前高但无显著差异(P0.05)。灌注酪蛋白模式的氨基酸混合物后,奶牛乳腺对天冬氨酸(Asp)和半胱氨酸(Cys)的摄取率显著升高(Asp的摄取率提高95.2%,P=0.031;Cys的摄取率提高49.6%,P=0.031),而奶牛乳腺对甘氨酸(Gly)的摄取率显著降低(降低158.3%,P=0.041)。灌注理想模式的氨基酸混合物后,乳蛋白含量比灌注前有上升趋势(提高5.78%,P=0.064),而乳脂产量显著低于灌注前(降低8.57%,P=0.015);并且,奶牛动脉血浆中Arg的浓度有上升趋势(提高18.0%,P=0.093),而酪氨酸(Tyr)的浓度呈下降趋势(降低47.8%,P=0.074)。灌注理想模式的氨基酸混合物后,奶牛乳腺对谷氨酸(Glu)、Cys和Ile的摄取率显著上升(Glu的摄取率提高118.7%,P=0.015;Cys的摄取率提高77.4%,P=0.032;Ile的摄取率提高46.0%,P=0.012),而奶牛乳腺对Ser的摄取率呈下降趋势(降低56.2%,P=0.052)。灌注氨基酸混合物后,Casein组乳脂产量增量显著高于R组(P=0.012),且Casein组的乳产量增量(P=0.095)和乳糖产量增量(P=0.091)较R组有升高的趋势,而2组间其他指标增量无显著差异(P0.05)。由此得出,在本试验条件下,颈静脉灌注酪蛋白模式和理想模式的氨基酸混合物均可提高泌乳奶牛的乳蛋白含量,而灌注酪蛋白模式氨基酸混合物同时可以促进乳蛋白产量的升高,因此,颈静脉灌注酪蛋白模式氨基酸混合物的效果优于灌注理想模式氨基酸混合物。