猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9基因的克隆与原核表达

通过PCR方法从重组质粒pSK-B2扩增得到非结构蛋白Nsp9的基因片段。将基因克隆至原核表达载体pET-28a( ),得到重组表达载体pET-28-Nsp9,转化Escherichia coliBL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为27.3 kD,表达量占菌体蛋白的43.2%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV的免疫特性和分子生物学功能奠定了基础。     

Effects of Inhibition of Different Rumen Microbial Activity on Rumen Fermentation and Fatty Acid Metabolism in Buffaloes

This study was aimed to evaluate the effects of inhibiting rumen bacteria,fungi and protozoa with adding linoleic acid and linolenic acid on in vitro rumen fermentation and fatty acid metabolism in buffaloes.Both fatty acids were supplemented with substrate and roughage (3:7) at the rate of 3% on dry matter (DM) basis in an in vitro batch culture system,there were 5 repetitions for each group.At the same time,four groups were set up:Control group and inhibition groups of protozoa,bacteria and fungi.After 24 h of incubation,total gas production,CH₄,pH,VFA,NH₃-N,MCP and LFA concentrations were measured.The results showed that:①With the addition of linolenic acid,compared with control group,the gas production decreased significantly after inhibition the growth of bacteria and protozoa,CH₄ production increased significantly after inhibition of the growth bacteria and fungi,and CH₄ production decreased significantly after inhibition of the growth protozoa (P<0.05).With the addition of linoleic acid,compared with control group,the gas production decreased significantly after inhibiting the growth of bacteria,fungi or protozoa,and CH₄ production was significantly lower than other groups after inhibition of protozoa (P<0.05).② After inhibiting the growth of bacteria,fungi or protozoa,the pH and MCP concentration were affected significantly with the addition of linolenic acid (P<0.05),there was no significant effect on NH₃-N concentration with the addition of linoleic acid (P>0.05).③ Compared with control group,the content of acetic acid and propionic acid was reduced significantly after inhibiting the growth of bacteria,fungi or protozoa (P<0.05).The butyric acid was reduced significantly after inhibiting the growth of bacteria with the addition of linolenic acid (P<0.05).The butyric acid was reduced significantly after inhibiting the growth of bacteria,fungi or protozoa with the addition of linoleic acid (P<0.05).④ Compared with control group, the concentrations of C11:0, C12:0, C13:0, C14:0, C14:1n5, C15:1n5, C16:1n7, C16:0, C18:3n3, C18:2n6c, C18:0, C20:2n6, C20:3n6, C20:1, C20:3n3, C20:0, C21:0, C22:6n3, C22:2n6, C22:0 was reduced significantly after inhibiting the growth of bacteria with the addition of linolenic acid, the concentrations of C12:0, C13:0, C14:0, C15:0, C16:1n7, C16:0, C17:0, C18:3n6, C18:3n3, C18:2n6c, C18:1n9t, C18:0, C18:2(cis-9,trans-11), C18:2(trans-10,cis-12), C20:2n6, C20:1, C20:0, C21:0, C22:6n3, C22:0, C23:0, C24:1n9, C24:0 was reduced significantly after inhibiting the growth of bacteria with the addition of linoleic acid (P<0.05).The results revealed that the addition of linoleic acid and linolenic acid could significantly manipulate in vitro rumen fermentation parameters,CH₄ yield and fatty acid composition after inhibiting the growth of bacteria,fungi or protozoa.Protozoa greatly contributed to total gas and CH₄ production while bacteria significantly affected rumen fatty acid metabolism.     

猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律研究

为制定科学的免疫程序,从根本上控制猪繁殖与呼吸综合征的发生,用ELISA诊断试剂盒分别对母猪、仔猪进行了母源抗体和免疫抗体检测。试验证明母猪在配种前15 d首免,怀孕2个月时二免,在下一次配种前15 d再免,如此按生产周期免疫可以抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。在母猪产前1个月免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,所产仔猪母源抗体60日龄时为阴性,故45日龄左右对仔猪进行首免最佳,为确定仔猪首免日龄提供了理论依据。对40日龄仔猪免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗后,仔猪58日龄时抗体S/P平均值最高,到160日龄育肥猪时抗体S/P平均值为阴性,这时不能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染。对40日龄仔猪肌肉注射2 mL猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,70日龄同剂量二免,85日龄时抗体S/P值平均值最高,到180日龄育肥猪时抗体S/P平均值仍为阳性,还能抵抗猪繁殖与呼吸综合征的感染,如果作为肉猪可以安全上市;作为后备母猪,在配种前进行免疫即可。非免疫母猪、仔猪对照组抗体均为阴性。通过试验基本上查明了猪繁殖与呼吸综合征母源抗体和免疫抗体的消长规律,为以后制定免疫程序提供了理论依据。     

野猪病原体混合感染的PCR诊断与防控

野猪集约饲养是目前新发展起来的养殖产业之一,野猪抗病力强,发生猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等烈性传染病病例的报道较少。2009年8月,山西寿阳某野猪场出现高发病、高死亡病例,应用PCR技术进行了病原检测,结果为野仔猪混合感染猪肺炎支原体、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟。证明野猪对以上疫病具有易感性,并提出一些防制办法,对野猪饲养建立合理的免疫程序具有一定的参考价值。     

用CODEHOP设计简并引物克隆反刍月形单胞菌K6乙酸激酶基因片段

利用CODEHOP设计细菌乙酸激酶的简并引物,选用1对引物ACKSe以高效丙酸生成菌反刍月形单胞菌K6基因组DNA进行PCR,得到749 bp PCR产物,产物经pMD18-T载体克隆转化至DH5α大肠杆菌中,测序后经Blastx比对,此DNA产物与其他菌属来源的乙酸激酶蛋白序列具有相似性,所克隆的序列即为K6的乙酸激酶基因片段。用CODEHOP程序化设计的简并引物可信性强,阳性率高。该基因的成功克隆为丙酸生成菌K6乙酸代谢工程研究提供了依据。     

脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01)。上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。     

不同热处理DDGS蛋白质营养价值及瘤胃降解特性与其分子结构的相关性研究

试验旨在研究不同热处理干酒精糟及其可溶物(DDGS)蛋白质化学成分、康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)组分、瘤胃降解特性和小肠消化率与蛋白质分子结构的相关性。采用CNCPS、尼龙袋技术及三步体外法对不同热处理的DDGS营养价值进行评定,利用傅里叶变换红外光谱技术(FTIR)分析蛋白质分子结构的变化,进而探求它们之间的相关关系。结果表明:加热使DDGS瘤胃降解率和小肠消化率降低,使小肠可消化蛋白增加;不同热处理对DDGS蛋白质分子结构均有显著影响(P<0.05);蛋白质分子结构中的酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ带的峰高和峰面积、酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带峰高和峰面积的比值与DDGS中蛋白质的营养价值、瘤胃降解参数及小肠消化率存在显著相关关系(P<0.05)。可见,不同热处理对DDGS蛋白质分子结构、营养价值和瘤胃降解特性及小肠消化率均有影响,DDGS中蛋白质分子结构可以有效地估测蛋白质营养特性,并可利用FTIR光谱技术对DDGS营养价值及加热程度进行评定。     

添加单宁酸对青贮葛藤茎叶品质的影响

为探讨添加单宁酸对青贮葛藤(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)茎叶品质的影响,以青绿葛藤茎叶为原料,添加3％和4％单宁酸青贮60 d后,对其进行感官鉴定,并进行有机酸、干物质损失率及营养成分的分析.结果表明:添加单宁酸的贮葛藤茎叶质地松散完整,具有酸香味,干物质损失率显著降低(P＜0.05);可溶性碳水化合物和中性洗涤纤维含量显著增加(P＜0.05);在添加单宁酸的青贮葛藤茎叶中,未检测出丙酸和丁酸.因此,葛藤青贮时添加单宁酸有利于营养物质的保持,可明显提高其品质.     

长链非编码RNA及其在医学、家畜方面的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,没有或少有编码蛋白的能力。LncRNA参与编码基因表达调控的表观遗传机制,能够直接调控靶基因的转录与蛋白的降解等,在基因组印记、转录调控及人类疾病等方面有着广泛功能。作者着重对LncRNA的特点、分类、作用机制及其在医学和家畜方面的研究进展作一综述,最后对LncRNA在家畜方面的研究与应用进行展望。     

DHI、TMR饲喂技术在奶牛养殖中存在的问题及对策

本文阐述了DHI、TMR饲喂技术在西安市奶牛养殖过程中存在的问题,并针对存在的问题提出对策和建议,供大家参考。