2011年-2013年滨州及其周边地区4种猪病毒性疾病的流行情况分析

通过对滨州及其周边地区2011年-2013年316个场次采集病料进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒与猪圆环病毒2型的检测,并对检测结果进行了统计分析,了解滨州及其周边地区上述4种疫病的流行状况。     

猪圆环病毒2型感染对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗体液免疫的影响

本试验采用ELISA方法对单独接种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株灭活苗组(HP组,n=3)和PCV2感染且出现病毒血症后接种PRRSV变异株灭活苗组(PCV2/HP组,n=3)不同时相血清中的PRRSV抗体进行检测;并对HP和PCV2/HP组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和荧光定量PCR检测。结果表明,在首免后70 d HP组血清平均抗体效价极显著高于PCV2/HP组(P<0.01);首免后56、63和77 d HP组平均抗体效价明显高于PCV2/HP组。其中在首免后56和63 d HP组抗体阳性率均达67%(2/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率为0;在首免后70和77 d HP组抗体阳性率均达100%(3/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率仅为0和33%(1/3)。结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制PRRSV变异株(JXA1)特异性的抗体反应。     

家蚕P450基因CYP305B1的基因组序列克隆及结构分析

为了研究家蚕P450基因CYP305B1的结构,采用反向PCR技术克隆了家蚕CYP305B1基因的基因组序列,经序列测定,拼接得到家蚕CYP305B1全基因序列,发现家蚕CYP305B1的第1内含子位于5′端非翻译区序列(5′-UTR)中间。将家蚕CYP305B1与野桑蚕P450基因CYP305B1V1序列进行同源性比较的结果表明,二者在5′-UTR上游-400～-770 bp序列间的同源性只有40.4%,序列差异最大的是第1内含子和第6内含子。在第1内含子中,野桑蚕CYP305B1V1在翻译起始密码ATG上游-340之前存在330 bp的插入序列,在-110～-340 bp间二者的同源性也只有46.9%;在第6内含子中,家蚕CYP305B1比野桑蚕CYP305B1V1多了一段约300 bp的插入序列。研究结果有助于进一步探究该基因的转录和调控机制。     

4种豆科牧草总皂苷含量的测定及其生长过程中含量的变化

以香草醛-冰醋酸为显色剂,采用分光光度法,测定三萜皂苷的含量,对波长、精密度、重现性和稳定性进行检测。并分别对鹰嘴紫云英Astragalus sinicus、红豆草Onobrychis viciaefolia、百脉根Lotus cornicμLatus和小冠花Coronilla varia 4种豆科牧草中皂苷的含量进行测定。结果表明,此方法简便易行,精密度高,重现性好,在25 min内测试结果稳定可靠。4种豆科牧草在整个生育时期总皂苷含量的变化不完全一致。鹰嘴紫云英和红豆草在初花期总皂苷含量最低,产草量较高,牧草品质优良,适宜青饲或调制干草;盛花期总皂苷含量丰富,产草量最高,宜作为生产中提取皂苷产品的原料。小冠花总皂苷含量始终较低,是一种优质的豆科牧草,不会使反刍家畜产生臌胀病。红豆草、鹰嘴紫云英、小冠花和百脉根4种豆科牧草在整个生育期皂苷含量均为叶中多于茎中。     

牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因的克隆表达及其重组蛋白免疫原性

本试验将新疆株牛巴贝斯虫的MSA-2c基因克隆,并构建重组质粒pGEX-4T-2/MSA-2c.利用大肠杆菌原核表达系统进行外源蛋白的表达,并成功诱导出GST-MSA-2c融合蛋白.通过优化诱导条件,得到了较高的可溶性表达;利用亲和层析技术纯化后的重组蛋白皮下免疫试验小鼠.间接ELISA检测发现,免疫接种56 d后,抗重组蛋白的抗体效价达到1∶220 000以上.用获得的抗血清进行Western-blot试验,可获得清晰的免疫反应条带.结果表明,本试验所表达的MSA-2c蛋白与文献报道的目的蛋白相符,并具有免疫原性.同时本试验也为建立以MSA-2c重组蛋白作为抗原的血清学诊断体系奠定了基础.     

施氮水平对甜高粱硝酸盐含量和氮素利用特性的影响

试验采用完全随机区组设计,分别于2009和2010年在华东农区生态条件下进行田间试验,研究不同施氮水平(0,100,200,300,400,500kg N/hm2)对大力士甜高粱硝酸盐积累,粗蛋白含量和氮素利用特性的影响。结果表明,随着生育期的推进,植株地上部硝酸盐含量不断降低,相比于叶片,茎秆更有利于硝酸盐的积累。随着施氮水平的提高,粗蛋白生产效率(CPPE),氮素干物质生产效率(NDMPE),干物质生产效率(DMPE)和表观回收率(NARR)逐渐下降,说明施氮量越高,氮素利用越低,损失越大。粗蛋白(crude protein,CP)和游离氨基酸(free amino acid,FAA)含量均随施氮量的增加而增加,但FAA的增幅低于CP,施氮量为500kg N/hm2时,CP的平均增幅为6.11%,FAA的平均增幅为2.99%,说明施氮虽然增加了植株CP含量,但优质蛋白质比例下降。施氮提高了甜高粱硝酸盐含量,施氮量大于400kg N/hm2时,甜高粱硝酸盐含量大于0.2%,青饲时易导致家畜硝酸盐中毒。综合考虑,大力士甜高粱在华东农区较为适宜的施氮量为200~300kg N/hm2,既可满足对甜高粱高产优质的需求,提高氮素的利用效率,又可减少氮素流失和对土壤及地下水的污染。     

天祝天然草地3种有毒植物提取物对粘虫的生物活性

测定了3种有毒植物露蕊乌头,铁棒槌和马先蒿的4种溶剂的提取物对粘虫的杀虫活性。结果表明：露蕊乌头甲醇、乙醇提取物对粘虫均具有一定的触杀活性,LC50分别为3．63、5．79g／L;露蕊乌头甲醇提取物,马先蒿丙酮提取物和铁棒槌甲醇提取物对粘虫的胃毒活性表现较强,杀虫活性LC50分别为2．13,2．82和3．22g／L,马先蒿和铁棒槌的石油醚提取物对粘虫无胃毒活性。3种植物的4种溶剂的提取物对粘虫均表现出一定的拒食活性,其中甲醇提取物的拒食活性都较高,露蕊乌头甲醇提取物对粘虫的拒食活性明显高于其他提取物,当质量浓度达到0．2g／mL时,拒食率为97．6％。而3种植物石油醚提取物的拒食活性均较差。     

家蚕、野桑蚕线粒体Cyt b基因片段序列分析及分子进化研究

以家蚕中系一化地理品种延吉、印度多化品种迈索尔、欧系一化品种法 4 0 8油和中国镇江地区野桑蚕为材料 ,采用PCR技术扩增了其线粒体 (mitochondrialDNA ,mtDNA)细胞色素b(cytochromeb ,Cytb)基因 ,测定其 5′端5 91bp的核苷酸序列 ,并从GenBank中调取中系家蚕品种C10 8、夏芳 ,日系家蚕品种青熟 ,韩国家蚕品种Backokjam和日本野桑蚕的相应序列 ,进行同源性比较 ,发现日系家蚕品种青熟 ,印度家蚕品种迈索尔 ,欧系家蚕品种法 4 0 8油 ,韩国家蚕品种Backokjam和中系家蚕品种C10 8、延吉序列间的同源性最高 ,相互间均为 10 0 % ;日本野桑蚕与各家蚕品种序列间的同源性约 94 %～ 95 % ;中国野桑蚕与各家蚕品种序列间同源性约 98%～ 99%。分子进化树分析显示日本野桑蚕和各家蚕品种相应序列的分歧时间远远早于中国野桑蚕与各家蚕品种序列的分歧时间 ,这是在分子水平上证实家蚕起源于中国野桑蚕的证据之一。     

高寒草甸小气候考察研究

文章介绍了海北高寒草甸试验区的野外考察现场和考察情况,并对青海海北高寒草甸矮嵩草草甸试验区的小气候考察结果进行了讨论,结果表明:高寒草甸地区具有明显高寒大陆性气候特征,日较差大,日照时间长,地表强度具明显的周期变化,太阳辐射强烈,全年总辐射量5.866～6.704×10⁶KJ/m²,但较湿润,可为研究高寒草甸小气候特点、局地生态环境和指导生产实践提供科学依据。     

PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制

采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因（PRRSV N gene）,将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21（DM3）诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%～6.34%和5.04%～7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。