抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

为鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗原表位,本研究将IBV tl/CH/LDT3/03株免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆筛选,得到两株针对IBV核(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)6H3和6F9,其染色体数目分别为90条和102条,MAb亚类鉴定分别属于IgG1和IgG2b,轻链均为κ链。对MAb6H3和6F9的抗原表位进行初步鉴定,将N基因分成8个片段克隆于pGEX-6p-1载体中,转化BL21(DE3)内诱导表达。经western blot分析,MAb6H3表位的初步定位在aa80～aa99,而MAb6F9表位的初步定位在aa64～aa82。而且MAb6F9还能特异性识别其他5株IBV的天然N蛋白,推测它们含有一个相同的B细胞表位。     

楼式高床羊舍对舍饲山羊的影响

在重庆市万州区研制、改造楼式羊舍,推广退耕还林地种草和舍养羊综合技术.并测定羊舍的小气候环境,舍养羊的草料消耗量、粪污排放量,比较研究山羊舍养羊与放牧饲养的生长、繁殖、疫病、养殖效益和对生态的影响,为三峡库区等地推广示范提供依据.     

厄贝沙坦及其复方制剂中痕量杂质N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸残留方法学研究

采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)建立厄贝沙坦及其复方制剂中N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)的测定方法。采用Waters ACQUITY UPLC○RHSS T3色谱柱进行分离,以0.005 mol/L甲酸铵(用甲酸调pH值至3.0)为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱,质谱检测器,流速为0.3 mL/min。结果显示NMBA的线性范围为0.156 6~3.132 6 ng/mL,相关系数r>0.99,方法检出限浓度为0.047 0 ng/mL(相当于样品浓度0.01μg/g),定量限浓度为0.156 6 ng/mL(相当于样品浓度0.03μg/g),样品加标回收率在80%~130%。说明该方法可以快速、简便、灵敏、准确地测定厄贝沙坦及其复方制剂中NMBA含量。     

不同生态型胡杨异形叶对虫害的抗氧化反应

圆形叶和披针形叶是成年胡杨(Populus euphratica)的两种叶片,本研究分析两种叶片遭受虫害时活性氧释放和抗氧化酶活性的变化。结果表明,遭受虫害时两种叶片超氧阴离子(O-2.)的释放,过氧化氢(H2O2)的含量,以及过氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均有增加,但圆形叶抗氧化酶变化显著高于披针形叶,尤以POD最为显著。以上结果说明圆形叶比披针形叶能经受更严重的虫害胁迫。     

猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。     

Study on Expression of Bcl-2 and PCNA Genes in Testicular Tissue of Chickens,Quails and Chicken-quail Hybrids

In order to investigate the molecular mechanism of stunted growth testis of chicken (♂) and quail (♀) hybrids. 84 testicular tissue samples of New Roman cocks, male Korean quails and chicken-quail hybrids at different developmental stages were collected,the mRNA expression of Bcl-2 and PCNA genes in testicular tissue of cocks, quails and chicken-quail hybrids at different growth stages were detected using Real-time PCR. The results showed that the Bcl-2 and PCNA genes mRNA expression patterns in testes of chickens and quails at different growth stages were similar.The Bcl-2 gene was fluctuated in a whole, and decreased to the lowest value, then recovered rapidly and remained at a high level. The PCNA gene had a very significant peak value.Compared with the chicken and quail,the expression of Bcl-2 and PCNA genes mRNA in hybrids had no obvious change, which indicated that the pattern of the Bcl-2 gene regulation apoptosis in testis was different from chicken and quail at the hybrid testicular development process, and there was no obvious cell appreciation process.It was suggested that the molecular influencing factors of testicular dysplasia of chicken and quail hybrids were related to the abnormal expression of Bcl-2 and PCNA genes mRNA in testes.The results provided an important reference for the further study of the mechanism of testicular dysplasia between chicken and quail interspecific hybrids.     

河北省奶牛源大肠杆菌的分离鉴定、致病性及中草药体外抑菌效果研究

【目的】 分析河北省奶牛源大肠杆菌的致病性及中草药体外抑菌效果。【方法】 于河北省收集30份具有典型临床症状的奶牛粪便样品,对样品进行细菌培养观察、生化鉴定、血清型鉴定、透射电镜观察、PCR扩增及致病性研究。采用传统煎煮法与醇提法提取9种中草药,通过96孔板-二倍稀释平板法测定最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）及最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration,MBC）,筛选出抑菌效果较强的中草药;将中草药进行两两联合,采用牛津杯法测定抑菌圈直径（inhibition zone diameter,IZD）,并通过96孔板-二倍稀释平板法测定MIC和MBC,评价药物的抑菌效果。【结果】 分离获得12株奶牛源大肠杆菌,检出率为40%,均具有致病性,其优势血清型为O55,检出率为58.3%。在中草药水提取液中,五倍子、五味子抑菌效果最强,MIC和MBC均为7.80 mg/mL,其次为乌梅、夏枯草、石榴皮,具有较好的抑菌效果,MIC和MBC均为15.63 mg/mL;在中草药醇提取液中,五倍子抑菌效果最强,MIC和MBC均为3.97 mg/mL,其次为五味子抑菌效果较好,MIC和MBC均为7.80 mg/mL。在中草药两两联合中,五味子与乌梅联合用药表现出协同作用,抑菌效果最强,IZD为26.00 mm,MIC和MBC均为3.97 mg/mL,其次为五倍子与乌梅,IZD为23.66 mm,MIC和MBC均为7.80 mg/mL。【结论】 本研究成功分离到具有致病性的大肠杆菌,优势血清型为O55型,筛选出抑菌效果较好的单味及复方中草药,为大肠杆菌引起的奶牛腹泻临床应用中药防治提供科学依据。     

沙漠化草地的恢复与重建途径

在分析国内外草地沙漠化治理现状的基础上,研究1985-1998年沙化草地的自然恢复与人工恢复,结果表明:自然恢复属于进展演替类型,经历"沙生、一年生植物群落"、"根茎禾草杂类草群落"和"丛生禾草群落"三个演替阶段,最终向地带性植被类型发展;其植被物种组成,覆盖度、产草量均呈增加趋势,土壤有机质增加,表土结构变好;人工恢复的效果显著,播种抗旱、抗风沙型植物,可以快速建成植被覆盖地面,同时生产大量优质牧草,是我国沙化草原恢复重建的一条重要途径.     

百例牛剖腹产手术的经验及技术探讨

难产是牛常见的产科病之一，奶牛发病明显高于黄牛。难产发生以后，经过各种办法难以从阴道产出犊牛，就应果断的，不失时机的施行剖腹产手术，从而有效的救治牛只。如能慎重果断的选择病例，早期进行手术，加上熟练的技术，成功率是很高的。     

模拟氮沉降和收获期对秋萌东方旱麦草生长与饲用品质的影响

短命植物东方旱麦草(Eremopyrum orientale)广泛分布于新疆北部,适时萌发,有助于缓解春季饲草短缺。为探究氮沉降和收获期对秋萌东方旱麦草生长与饲用品质的影响,本试验采用人工模拟方式,设置0 kg·ha^-1·a^-1,30 kg·ha^-1·a^-1,60 kg·ha^-1·a^-13个氮添加处理和2个收获时期(拔节孕穗期和开花期),分析不同处理下秋萌东方旱麦草生长指标和饲用品质指标变化。结果表明：在30 kg·ha^-1·a^-1,60 kg·ha^-1·a^-1氮添加条件下,秋萌东方旱麦草的株高、叶长、叶宽、分蘖数、茎粗、平均地上鲜重、粗蛋白和粗脂肪含量均高于0 kg·ha^-1·a^-1;同时,中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量降低。与第一收获期相比,第二收获期东方旱麦草粗蛋白含量显著降低,中、酸性洗涤纤维与粗脂肪含量升高,平均地上生物量无差异。综合考虑东方旱麦草秋萌株的生长与饲用品质,在第一收获期(拔节孕穗期)和60 kg·ha^-1·a^-1氮添加下可获得最优饲草,但30 kg·ha^-1·a^-1较低水平氮沉降也能显著提升其生产力与饲用品质。