PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。     

二硫化碳火焰光度气相色谱法的测定研究

使用100 mL全玻璃注射器采集CS2气体,注入HC-6型微量硫气相色谱分析仪,经GDX-104色谱柱分离,应用火焰光度检测器检测。测量的线性检测范围为0.0005~0.855 mg/m3,线性方程为Y=32.67869+1.69828X(r=0.99968),相对标准偏差为2.53%~4.98%,最低检出限为0.0005 mg/m3。     

月见草对鹌鹑生产性能及不饱和脂肪酸含量的影响

选取健康公母混合的150只1日龄黄羽雏鹌鹑,随机分成5组,每组设3个重复,每个重复10只。试验设对照组,饲喂基础日粮。试验组在基础日粮中分别添加8%、10%、12%和15%的月见草籽,进行为期50 d的饲养,分别于35日龄和50日龄采样。结果表明:在日粮中添加10%以上的月见草籽能够提高鹌鹑的生长发育速度,降低35日龄鹌鹑的料肉比;添加月见草可显著增加鹌鹑肉中不饱和脂肪酸(PUFA)的含量,改善其品质与风味;日粮中添加10%的月见草,可使鹌鹑肉中ω-6/-ω3比例均衡,降低鹌鹑饲养成本。     

麻雀消化道在繁殖期间形态变化及适应意义

对20只繁殖期前和20只繁殖期麻雀进行体尺测量和消化道各组织器官长度及重量测定,观察其胃、小肠、大肠在繁殖期前和繁殖期的长度、鲜重及干重变化情况。试验结果表明:繁殖期麻雀与繁殖期前相比,麻雀胃的长度、含内容物重、不含内容物重分别增加了12.66%、10.42%和4.76%,差异极显著(P<0.01);干重比繁殖期前增加了8.33%,差异显著(P<0.05)。小肠的长度、含内容物重、不含内容物重、干重分别增加了9.43%、68.18%、75.00%和83.33%,差异极显著(P<0.01)。大肠长度增加了2.48%,差异不显著(P>0.05);含内容物重、不含内容物重分别增加了23.53%和47.62%,差异极显著(P<0.01);干重增加了16.67%,差异显著(P<0.05)。     

蒲公英花粉生活力及柱头可授性研究

采用TTC染色法和联苯胺-过氧化氢法分别测定蒲公英的花粉活力与柱头可授性,并对开花持续时间进行观测以便为蒲公英生殖特性研究提供试验依据.结果表明,蒲公英花期持续时间为5～7 d,开花时间一般在每天的07:30～15:00.蒲公英花粉生活力试验结果显示,蕾期蒲公英花粉生活力为11.0%,开花后1～2d内的生活力为98.0%,3～4d生活力为89.5%,5～7 d生活力为81.7%;柱头可授性试验结果表明,蕾期柱头基本不具可授性,开花后4 h左右蒲公英柱头可授性达到最高,为96%;在同一天中,11:00～13:00柱头可授性都维持在一个较高的水平,达95%以上.因此,在开花当天或3 d内的中午至下午进行人工授粉效果较好.     

金优238在湘西北山区的种植表现及高产栽培技术

金优238(金23A/R238)是湖南省怀化职业技术学院选育的三系杂交晚稻新组合,在湖南作双季晚稻试验示范种植,表现出丰产性好、适应性广、综合农艺性状优良、抗性较好、米质较优等特点.     

氟对不同世代大鼠大脑皮质细胞凋亡的影响

为研究氟中毒能否引起世代蓄积而对不同世代动物大脑造成损伤,试验采用离乳Wistar大鼠16只,随机分为2组,对照组饲喂大鼠标准饲料,饮自来水;高氟组饲喂大鼠正常饲料,饮含氟化钠（NaF）100 mg/L的去离子水。饲喂3个月,生产子二代和子三代大鼠,仔鼠饲喂采用与其母鼠相同的处理。取0、10、20、30、60、90日龄的不同世代大鼠,分别宰杀,取大脑,制成单细胞悬液,采用流式细胞仪检查其细胞凋亡情况。结果显示,与对照组相比,不同日龄高氟组二代、三代大鼠大脑皮质细胞凋亡率升高。与二代大鼠相比,不同日龄氟中毒三代大鼠大脑皮质细胞凋亡程度增高,10、20、60、90日龄时差异显著（P<0.05）。提示,氟中毒可以引起世代蓄积,接触氟环境时间越长,其动物子代大脑损伤越严重。     

白屈菜快速繁殖技术研究

为保护濒危植物白屈菜的野生资源,以白屈菜具有生长点的茎段作为材料,进行了生长点的伸长生长、生长点的分化、试管苗的生根、试管苗的生根继代和移植的研究,建立起白屈菜的快速繁殖技术。结果表明:在无光的条件下,1/2MS+BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.4mg/L是白屈菜嫩茎生长点伸长生长的理想培养基;MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L是白屈菜生长芽分化培养的理想培养基;1/3MS+NAA0.1mg/L+IAA0.5mg/L是白屈菜不定芽生根培养和生根继代培养的理想培养基;移植到山坡上试管苗各种生物性状不变,生长旺盛。通过生长芽分化培养和生根继代培养2种方法可达到快速繁殖的目的。     

传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达

克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。     

秸秆还田与施氮量对小麦、玉米产量与品质的影响

为了研究高产条件下秸秆还田与不同施氮量对冬小麦/夏玉米一年两熟灌溉农田作物产量、品质的影响,在山东龙口进行了田间试验。结果表明,高产条件下,短期(2 a)秸秆还田对小麦、玉米增产效果不显著,但可以提高小麦籽粒蛋白质含量、延长面团稳定时间,改善加工品质。麦季施氮240 kg/hm2(N2)和减氮处理168 kg/hm2(N1)、玉米季施氮皆为112.5 kg/hm2条件下,N1、N2处理间小麦产量2 a均无显著差异,麦季氮肥后效对玉米季产量亦无显著影响。试验第1年,N1、N2处理对小麦和玉米籽粒品质无显著影响,试验第2年,小麦籽粒湿面筋含量及淀粉含量,N1处理显著高于N2处理,N2处理玉米籽粒的淀粉含量显著高于N1,同时也改变了玉米籽粒直链淀粉与支链淀粉比值。综合比较认为,在秸秆还田条件下,氮肥用量以麦季168 kg/hm2、玉米季112.5 kg/hm2较适宜。