J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5％.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44％.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.     

基因打靶备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

护理管理者领导力现状调查及影响因素分析

目的：调查护理管理者领导力现状,并分析其影响因素。方法采用管理者实践量表、一般自我效能感量表、职业倦怠量表、角色认知量表对浙江省210名护理管理者进行问卷调查。结果共发放问卷210份,回收有效问卷182份,有效回收率为86．67％。本组护理管理者的领导力得分为（37．70±5．30）分;是否经常阅读管理书籍、是否参与护士长的分层培训、任命方式以及是否经过护士长岗前培训的护理管理者的领导力得分情况比较,差异有统计学意义（t值分别为－3．608,－7．136,2．343,－2．511;P＜0．05）。领导力与角色认知中的角色模糊、自我效能感以及职业倦怠中的个人成就感均呈正相关,与角色认知中的角色冲突以及职业倦怠中的情绪枯竭、去人格化因子呈负相关（ r值分别为0．589,0.521,0．509,－0．323,－0．291,－0．227;P＜0．01）。多元线性回归分析显示,角色认知中的角色模糊因子、是否参加护士长分层培训、职业倦怠中的个人成就感因子、自我效能感和是否阅读管理书籍为领导力的影响因素（P＜0．05）。结论领导力与护士长的角色认知、自我效能感、职业倦怠及是否分层培训均相关。管理者的分层培训有利于领导力的培养和提升,明确角色定位、降低职业倦怠和提高自我效能感同样可以提升护士长的领导力,另外护理管理者需加强经济管理学方面的知识培训。     

基于Maize6H-60K芯片精准分型的玉米DH群体遗传规律研究

为解析玉米双单倍体（doubled haploid,DH）群体的遗传规律,使用自主研发的精准分型策略对‘先玉335’DH群体的Maize6H-60K芯片结果进行筛选校正和解析。结果表明：1）通过剔除单态、杂合、缺失标记,使用精准分型策略对标记准确聚类,获得的18 947个SNPs标记覆盖玉米全基因组。2）该群体在10条染色体上平均交换次数为1.84～1.03次,在6号染色体随体区域的交换次数显著减少。3）该群体在1、2、3、8号染色体上存在明显的偏分离现象;通过高频次、高密度的交换,染色体两臂端粒区域理论分离系数表现出回归到50%的趋势。利用获得的重组交换及分离规律可提高从DH群体中筛选到预期育种材料的准确性。     

基于荧光显色的环介导等温扩增技术(LAMP)检测禽呼肠孤病毒

建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力.     

2020年养猪科技新技术盘点

"物极必反,困则思变",非洲猪瘟和新冠疫情没有让养猪行业止步不前,反而促使人们去尽最大努力探索养猪科技新技术.无抗替代技术、发酵混合饲料技术、区块链+畜产品溯源技术和生猪期货合约上市等承压前行,在不平凡的2020年交上了不俗的答卷.     

应用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定

根据新城疫病毒 (NDV)强、弱毒株在 F蛋白裂解位点氨基酸组成和序列上的差异 ,参照有关文献 ,设计了 3对引物 (A B,A C,A D)。引物 A B能从 L a Sota、B1 、 系和强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 36 2 bp的核酸片段 ,引物 A C仅能从强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp的片段 ,引物 A D仅能从 L a Sota、B1 、 系的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp片段。 3对引物均不能从 IB、IBD、AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿囊液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离的 3株 NDV毒株均被 A C引物扩出 ,它们的鸡胚平均死亡时间 (MDT)分别为 5 1.8、5 3.2、5 2 .6 h,1日龄雏鸡脑内接种指数 (ICPI)为 1.6 5、1.6 3、1.6 0 ,证明是 NDV强毒。利用 RT- PCR对 NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第 2天从病鸡气管中检测到 NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用 RT- PCR对 NDV毒力的鉴定结果与传统生物学试验的测定结果完全吻合 ,但前者可在 2 4 h内直接对组织匀浆进行诊断 ,具有快速、简便和敏感的特点     

兽医布病防控存在的问题及对策——新疆少数民族自治县案例分析

1 调研背景 我国职业病防治法对职业病的定义为劳动者在职业活动中，因接触有毒、有害物质等因素而引起的疾瘠”。由于兽医与病畜的接触机会多，而且没有防护设施或防护措施简陋，因此兽医是感染人畜共患病的高危人群，一些人畜共患病成为兽医的职业病。     

3种生长素对蓝叶忍冬枝条扦插生根的影响

以蓝叶忍冬(Lonicera korolkowi‘Zabclii’)为材料,研究了2种不同浓度(50、100 mg·L-1)的生长素吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)在不同处理时间(30、60 min),对蓝叶忍冬生根部位、根数和根长的影响。结果表明,3种生长素对蓝叶忍冬枝条扦插生根都产生了一定的影响,IAA处理增加蓝叶忍冬的生根率和根数,但抑制根的伸长。NAA处理对蓝叶忍冬生根效果不明显,仅对根长有一定的促进作用。与对照相比,50 mg·L-1IBA处理60min显著增加了蓝叶忍冬的生根率和根数(P0.05)。另外,3种生长素对蓝叶忍冬枝条生根部位也有影响,3种生长素处理都可以增加皮层生根数,对切口愈伤组织的生根有一定的抑制作用。其中IBA处理对生根部位影响的效果最明显,100 mg·L-1处理30 min可以显著提高皮层生根数并抑制愈伤组织生根(P0.05)。综合比较3种生长素促进生根的效果,IBA最好,IAA和NAA次之。     

聚合酶链反应检测猪细小病毒的研究

本研究成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术。以１６个核苷酸引物对首次完成了ＰＰＶＤＮＡ结构蛋白ＶＰ１编码区２２８ｂｐ片段的扩增。同样数目的另一引物对，也成功扩增了Ｖｐ２编码区１５８ｂｐＤＮＡ片段。ＰＰＶＢＭ－１株与其它国内分离株（广西株、天津株和哈尔滨株）均出现相同扩增结果。琼脂糖凝胶电泳显示了特异条带（ＶＰ１２２８ｂｐ．Ｖｐ２１５８ｂｐ），而伪狂犬病病毒、犬细小病毒均未扩增，表明了本方法的特异性。同时，限制性内切酶分析（Ｖｐ１２２８ｂｐ及Ｖｐ２１５８ｂｐ分别含单一ＰｖｕⅡ、ＥｃｏＲⅠ位点），也证实了特异性。本方法敏感性高，可检出１０ｆｇ模板ＤＮＡ。既可作样品的快速检测，又能检查细胞系的污染。具有特异、简便、快速的优点。