卵泡抑制素与GFP融合基因疫苗pEGISI的构建及表达

为构建卵泡抑制素与绿色荧光蛋白（GFP）融合基因疫苗pEGISI,将pcISI中的乙肝表面抗原（HBsAg）S基因及插入S基因中的抑制素（INH）基因片段酶切回收;PCR扩增pcISI中INH基因片段,调整阅读框,一起融合到pEGFP-N1中EGFP基因的5’端,构建ISI-EGFP融合表达质粒pEGISI。酶切和测序鉴定表明,重组质粒pEGISI构建成功。将pEGISI转染293T细胞,16h后检测到绿色荧光,48h检测到强烈荧光,说明融合基因在293T细胞获得高表达;ELISA检测证实,表达产物ISI—EGFP融合蛋白具有INH的抗原抗体反应原性。质粒pEGISI的成功构建及表达为抑制素基因免疫的机理及安全性研究奠定了基础。     

细叶百合低温解除休眠过程中鳞茎内糖分及相关酶的研究

通过低温处理打破细叶百合鳞茎休眠,探讨细叶百合鳞茎解除休眠过程中的糖类化合物及蔗糖、淀粉代谢酶的变化规律。结果表明,鳞茎休眠解除过程中伴随着旺盛的糖类代谢活动,淀粉含量下降,淀粉酶活性升高。内层鳞片在冷藏60 d时可溶性糖含量达到峰值,贮藏前期,蔗糖含量,蔗糖合成酶(SS)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性上升,SPS和SS协同控制蔗糖代谢及转运。冷藏条件下鳞片及顶芽内淀粉向可溶性糖方向代谢过程中促进了腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活性的增加。各种淀粉代谢相关酶在鳞茎冷藏不同时期和不同部位的作用规律不同。鳞茎各个部位总可溶性糖含量与蔗糖、葡萄糖含量及淀粉磷酸化酶(SP)、SS、α-及β-淀粉酶活性都存在显著或极显著的正相关性。糖类代谢成为鳞茎休眠解除的物质基础。     

芡欧鼠尾草的组织培养和快速繁殖

以芡欧鼠尾草(Salvia hispanica)成熟种子为外植体,1/2MS为基本培养基,研究不同浓度的外源激素对愈伤组织的诱导、增殖和生根的影响,从而初步建立了芡欧鼠尾草组织培养的快速繁殖体系。结果表明,诱导种子愈伤组织的最适宜培养基为1/2MS+10.0mg·L~(-1) 6-BA+1.0mg·L~(-1) NAA+0.4mg·L~(-1) ZT,诱导率为66.5%;不定芽增殖的最适培养基为1/2MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+0.5mg·L~(-1) NAA,增殖倍数为7.69;生根的最适培养基为1/2MS+0.5mg·L~(-1) NAA,生根率达100%,平均生根数为5.68;移栽后植株生长良好,成活率较高,达97%。     

黄土高原地形对苜蓿种子产量和质量的影响

对产自甘肃环县黄土高原沟壑区阴坡，阳坡、沟谷阶地和塬地4种地形的苜蓿种子产量和质量进行了研究分析，结果表明，地形对种子产量和质量均有显著影响，其中，阴坡种子产量最低，分别为1．86g/株和311．74kg/hm^2，阳坡单株种子产量最高，为6．41g/株，塬地单位种子产量最高，为650．65kg/hm^2，质量最低种子也产自阴坡，其发芽率只有23％，硬实率却高达66％，地形对种子产量构成因素无显著影响，4种地形的种子产量与其构成因素的相关性完全一致，即除千粒重外，种子产量与其他各因素均存在显著正相关，相关性强弱依次为：单株生殖枝数＞每生殖枝荚果数＞每荚粒数＞千粒重，单株生殖枝数对种子产量贡献最大。     

前列腺素E2和F2α对LPS刺激后奶牛子宫内膜上皮细胞COX-1和COX-2表达的影响

试验旨在阐明前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）和F_2α（prostaglandin F_2α,PGF_2α）对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1（cyclooxygenase-1,COX-1））与环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×10⁶个/孔接种于6孔板,以10^-7mol/L PGE₂和PGF_2α分别预处理细胞24 h,以100 ng/mL细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激细胞4、8和12 h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2 mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE₂单独作用4、8和12 h后显著上调（P<0.05）;COX-2 mRNA表达量在PGE₂单独作用4和12 h后显著上调（P<0.05）,PGE₂单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调（P<0.05）。与对照组相比,LPS刺激8和12 h时COX-1 mRNA表达量显著下调（P<0.05）,LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化（P>0.05）;LPS刺激后4、8和12 h时COX-2 mRNA表达量显著上调（P<0.05）,LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调（P<0.05）。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE₂处理组在8和12 h时COX-1和COX-2 mRNA表达量均显著上调（P<0.05）,同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调（P<0.05）。PGF_2α在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2 mRNA的表达无显著影响（P>0.05）,仅在PGF_2α单独处理8和12 h后COX-1 mRNA表达量上调（P<0.05）。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2 mRNA表达具有一定的协同诱导作用。     

饲粮中添加牛至精油对绵羊复胃发育、消化酶活性及瘤胃微生物区系的影响

本试验旨在研究饲粮中添加牛至精油对绵羊复胃发育、消化酶活性及瘤胃微生物区系的影响。选取18只体重相近[(20.30±1.27) kg]、体况良好的3月龄萨福克×小尾寒羊F1代公羔,随机分为3组(每组6只):对照组(CON组)饲喂基础饲粮,牛至精油组饲喂在基础饲粮基础上分别添加4(EO4组)和7 g/d(EO7组)牛至精油的试验饲粮,预试期10 d,正试期72 d。结果显示:1)绵羊瘤胃容积随饲粮中牛至精油添加量的增加显著增大(P<0.05),与CON组相比,EO7组瘤胃容积指数提高了2. 09%(P <0. 05),皱胃容积指数降低了1. 61%(P <0. 05)。2)与CON组相比,EO4组瘤胃中纤维素酶和胃蛋白酶活性显著升高(P<0.05),皱胃中纤维素酶和β-葡萄糖苷酶活性显著升高(P<0.05); EO7组瘤胃、网胃中纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶活性显著升高(P<0.05),瓣胃中纤维素酶和皱胃中胃蛋白酶活性显著升高(P<0.05)。3)饲粮添加4和7 g/d牛至精油均显著降低了瘤胃中原虫数量(P<0.05);与CON组相比,EO4组瘤胃中黄色瘤胃球菌数量显著升高(P<0.05); EO7组瘤胃中真菌、黄色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌数量均显著升高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加牛至精油能促进瘤胃发育及瘤胃中真菌和纤维分解菌的增殖,抑制原虫的生长,提高瘤胃消化酶活性,且以7 g/d的添加量效果较好。     

从江县鲤爆发性死亡病例实验室诊断

2018年10月贵州省从江县某水产养殖专业合作社鲤爆发死亡,本研究对死亡病例进行了流行病学调查、病理学观察、寄生虫学检查、细菌分离鉴定和病毒PCR检测等诊断。结果显示:病鲤病变以鳃丝溃烂、体表出血、肛门红肿和眼球凹陷为主要特征,组织的主要病变是肾小球萎缩出血、肾小囊空腔、鳃丝肿胀粘连及上皮细胞脱落等;细菌分离培养可得到圆形凸起、表面光滑的灰白色菌落,经染色镜检、生理生化鉴定和16S rRNA基因测序分析,鉴定该分离菌为嗜水气单胞菌;PCR检测显示鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)为阳性,未检出鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)和鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV);显微镜观察亦未见到寄生虫虫体;分别取分离菌和鲤浮肿病毒阳性病例组织悬液进行人工感染试验,均可引起健康鲤发生死亡。上述结果表明,从江县鲤的死亡是嗜水气单胞菌和鲤浮肿病毒混合感染所致。     

饲粮中添加牛至精油和莫能菌素对荷斯坦犊牛血清生化指标、消化酶活性及瘤胃微生物区系的影响

旨在研究牛至精油（oregano essential oil,OEO）与莫能菌素（monensin,MON）对荷斯坦犊牛血清生化指标、消化酶活性以及瘤胃微生物区系的影响。本试验前期阶段选用了体重相近（（41.31±2.23）kg）,体况良好的荷斯坦初生犊牛80头,随机分为4组,每组20头,采用单栏饲养。对照组饲喂全脂牛乳和颗粒饲料,其他3个试验组在饲喂全脂牛乳和颗粒饲料的基础上分别添加4 g·kg^-1牛至精油、3.6 g·kg^-1莫能菌素和7.6 g·kg^-1牛至精油和莫能菌素的混合物,饲喂至56、70日龄时,从每组中选取6头体重相近的公犊,颈静脉采血测定血清指标,并通过口腔导管的形式采集犊牛的瘤胃液,检测消化酶活性以及瘤胃微生物区系。结果表明：1）添加牛至精油显著提高了56日龄犊牛血清中TP、SOD、GSH和GSH-Px的浓度（P ≤ 0.05）;莫能菌素对56、70日龄犊牛BUN浓度有降低的趋势（P<0.10）。2）牛至精油显著降低了56、70日龄犊牛瘤胃中产琥珀酸丝状杆菌的数量（P<0.05）,显著提高了白色瘤胃球菌的数量（P ≤ 0.05）;莫能菌素显著降低了56、70日龄犊牛瘤胃中原虫的数量（P ≤ 0.05）,并有降低白色瘤胃球菌数量的趋势（P<0.10）,在56日龄时,莫能菌素有降低犊牛瘤胃中黄色瘤胃球菌数量的趋势（P<0.10）;牛至精油和莫能菌素对56、70日龄犊牛瘤胃中溶纤维丁酸弧菌有显著的交互作用（P ≤ 0.05）;在56日龄时,牛至精油和莫能菌素对栖瘤胃普雷沃氏菌有交互作用的趋势（P<0.10）,而在70日龄时则呈显著的交互作用（P ≤ 0.05）。3）牛至精油和莫能菌素对56、70日龄犊牛瘤胃中胃蛋白酶浓度有显著的交互作用（P ≤ 0.05）。综上所述,饲粮中添加牛至精油可提高犊牛的免疫力和抗氧化能力。莫能菌素在抑制瘤胃内原虫数量上强于牛至精油,牛至精油对提高主要蛋白质降解菌数量的作用效果优于莫能菌素。总之,牛至精油可改善犊牛的健康状况以及调控瘤胃微生物区系,牛至精油作为天然植物抗生素可替代犊牛期预防性治疗的其他类抗生素生长促进剂。     

彭水县野生药用蜜粉源植物资源

位于重庆市东南部的彭水县因亚热带湿润季风气候使其生物资源丰富,种类繁多。对彭水县蜜粉源植物调查发现150余种蜜粉源植物,其中野生具有药用价值的99种,隶属于49科,84属。重要的药用蜜粉源植物有盐肤木(Rhus chinensis Mill.)、川莓(Rubus setchuenensis Bureau et Franch.)、川续断(Dipsacus asperoides C. Y. Cheng et T. M.Ai)、大叶醉鱼草(Buddleja davidii Franch.)等。     

高分辨四极杆飞行时间质谱仪判别复原乳和超高温灭菌乳

采用高分辨四极杆飞行时间质谱仪,结合化学计量学方法,利用非靶向代谢组学方法,对超高温灭菌乳和复原乳进行检测。牛乳样品经过前处理后,经过C18色谱柱分离,采用FullScan模式进行一级全扫描,扫描结果通过数据预处理后,导入SIMCA-P14.1软件中进行主成分分析和偏最小二乘方差判别分析。结果表明:正、负离子模式下共找到14种判别超高温灭菌乳和复原乳的表征因子,进一步通过这14种表征因子建立区分2种乳的判别模型,通过该判别模型能够准确地区分超高温灭菌乳和复原乳,为复原乳的判别提供理论依据。