血清对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎发育的影响

从屠宰场收集了本地水牛55头、黑白花奶牛22头的卵巢共获卵泡847枚,平均每个水牛卵巢回收3.67枚可用卵母细胞,约为黑白花奶牛(10.23枚/头)的1/3。试验分别采用添加与不添加血清的培养液体外成熟培养水牛卵母细胞,结果二者的成熟率无明显毒性差异(58.23%对56.67%),但体外受精后早期胚胎发育的8-细胞率有显著差异(35.4%对23.0%),表明体外成熟液中有无血清对水牛卵母细胞体外成熟率没有影响,但血清对卵母细胞的早期胚胎发育有重要影响。进一步比较成熟液中不添加血清但在受精液及胚胎液中添加血清和在各个阶段均有血清参与的早期胚胎发育率(8-细胞率),表明二者差异不显著(33.8%对35.4%)。经无血清成熟培养液培养的成熟卵母细胞可以经孤雌激活后得到早期胚胎(4细胞)。     

Calreticulin promotes migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma cells by inducing cell EMT

AIM:To observe the expression of calreticulin (CRT) in nasopharyngeal carcinoma tissues, analyze the significance of clinical pathology and the influence on epithelial-mesencymal transition (EMT) of CNE2 cells. METHODS:The expression of calreticulin was detected by immunohistochemistry in 52 nasopharyngeal carcinoma and 57 nasopharyngeal benign tissues, and the significance of clinical pathology was evaluated. The calreticulin gene-specific small interfering RNA was constructed, and then was transfected into the NPC cell line CNE2 using the cationic liposome method. The effect of CRT on the morphological changes of the CNE2 cells was observed under light microscope. The effect of CRT on the cell migration and invasion abilities of the CNE2 cells was detected by Transwell migration and invasion assays. The expression of EMT-related proteins E-cadherin, vimentin, transforming growth factor (TGF)-β and matrix metalloproteinase (MMP)-9 in the CNE2 cells was determined by Western blot. RESULTS:The positive expression rate of CRT in the benign lesion tissues was 19.29% (11/57), which was significantly increased in the nasopharyngeal carcinoma tissues as 82.69% (43/52). The expression rate of CRT was positively correlated with the stage of nasopharyngeal carcinoma and lymph node metastasis (P<0.05). Knockdown of CRT expression made the CNE2 cells showing a spindle shape to a flat, cobblestone-like epithelial state change, arranged more compact, and the migration and invasion abilities were significantly decreased (P<0.05). Knockdown of CRT expression resulted in significant increase in the protein expression of E-cadhe-rin, and the decreases in the protein expression of vimentin, TGF-β and MMP-9 in the CNE2 cells (P<0.05). CONCLUSION:Calreticulin expression in nasopharyngeal carcinoma is significantly higher and positively correlated with nasopharyngeal carcinoma stage and lymph node metastasis. Calreticulin promotes cell migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells by inducing EMT.     

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的发酵条件及其对杨树溃疡病的防治效果

本文研究了拮抗细菌吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia pyrrocinia菌株JK-SH007产抗菌物质的最佳发酵条件及其对杨树溃疡病的野外防治效果。结果表明,牛肉膏、蛋白胨是发酵培养基中最佳营养物质,有利于菌株JK-SH007抗菌物质的产生;培养基初始pH、培养时间、温度、培养体积、不同牛肉膏、蛋白胨组合等对菌株生长及其抗菌物质的产生有明显的影响,初始pH7、牛肉膏2g、蛋白胨20g、以1/2装液量装液、30℃振荡培养36h可获得较高产量的胞外分泌型抗菌物质;菌株JK-SH007的发酵液对杨树溃疡病的野外防效可达40.54%。     

绿盲蝽越冬卵在苹果园中的空间分布型及抽样技术

近年来绿盲蝽Apolygus lucorum已经逐渐发展成为果树上的重要害虫之一, 对其越冬卵在果树上的空间分布型进行探究具有重要意义?本研究利用6种聚集度指标?Iwao回归方程和Taylor幂法则分析了苹果园中绿盲蝽越冬卵的空间分布型, 同时对苹果园绿盲蝽越冬卵聚集的原因和最适理论抽样数进行了分析与计算?结果显示, 绿盲蝽越冬卵在苹果园呈聚集分布, 并且随着越冬卵密度的增加, 分布越聚集?绿盲蝽越冬卵的种群聚集是由其生活习性与周围环境共同引起的?运用绿盲蝽越冬卵空间分布型参数, 建立Iwao理论抽样数模型, 从而明确不同密度下绿盲蝽越冬卵的最适理论抽样数, 为今后绿盲蝽越冬卵在苹果园内密度的准确调查和种群密度的预测提供了理论依据?     

柴达木盆地弃耕地盐渍状况的主分量分析

采用主分量分析（PCA）方法对柴达木盆地弃耕地盐渍化状况进行了研究，结果表明，该地属于中重度氯化物盐渍地、耕作层含盐量在0．5％－4．0％之间，盐分表聚强烈，基本无自然淋溶过程。耕作层第一、二主分量显著，累计贡献率高达95．0％左右，反映了该区土壤含盐量及盐离子分布规律，认为全盐量、Cl^-,Mg^2＋是该弃耕地盐渍环境的特征因子。     

金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病治疗试验

为了评价金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病的临床疗效,设立金石翁芍散高、中、低3个剂量组及药物对照组,通过混饲给药方式治疗仔猪大肠杆菌病,进行临床治疗效果比较。结果表明,金石翁芍散对仔猪大肠杆菌病有较好的治疗效果,高剂量组治愈率为91.6%,总有效率为94.4%;中剂量治愈率为88.9%,总有效率为94.4%;低剂量组治愈率为72.2%,总有效率为77.8%。高剂量组、中剂量组在降低死亡率、提高治愈率等方面均优于恩诺沙星可溶性粉（治愈率为72.2%,总有效率为77.8%）。低剂量组的治疗效果低于高、中剂量组;中、高剂量组死亡率、治愈率和总有效率均无显著性差异。     

鸡软骨细胞体外分离培养鉴定以及过表达miR-15a对软骨细胞的影响

为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。     

微小隐孢子虫三个基因主要抗原表位区的串联表达及其抗原性分析

应用多个抗原袁位预测软件对微小隐孢子虫CP15、P23和CP15/60三个子孢子表面抗原的氨基酸序列进行T细胞袁位预测及分析,从中选取了三个抗原表位富集的基因片段,利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapping extension PCR,SOE PCR)将该三个基因片段串联在一起,各基因片段之间以柔性氨基酸(GGGGS)碱基序列链接,得到的拼接片段命名为CpTm.将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pET-CpTm,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.结果成功地构建了CpTm串联基因并在大肠杆菌中以可溶形式高效表达,质谱分析表明重组表达蛋白包含了上述三个抗原的氨基酸序列.Western blot分析显示该重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清及隐孢子虫鼠基因型CP15、P23、CP15/60基因重组表达蛋白免疫兔血清识别,制备的抗血清能被重组蛋白特异性识别,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为多表位疫苗的研制奠定了基础.     

长叶红砂和红砂种子萌发对光照、温度和水分的响应

长叶红砂(Reaumuria trigyna)和红砂(Reaumuria soongorica)均为荒漠地区超旱生小灌木,长叶红砂为红砂属珍稀种,而红砂为广布种。通过种子萌发对光、温和土壤水分需求的研究表明,长叶红砂对光照不敏感,而黑暗有利于红砂的萌发。种子萌发的适宜温度均为恒温20-25℃或15/25℃变温。25℃后,随着温度升高萌发率下降。土壤含水量在3%以上时,有利于两物种的萌发,萌发适宜的含水量都在12%。在各种条件下,珍稀种长叶红砂的萌发均高于广布种红砂,说明种子质量和萌发并没有造成长叶红砂的珍稀濒危。但长叶红砂高萌发率却不利于应对荒漠地区极端和不可预测的环境变化,增加了生存的风险性,可能是其濒危原因之一。     

水稻内生细菌B196的鉴定及其对水稻纹枯病的防治作用

从水稻体内分离得到的细菌菌株B196对水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani的生长有较强抑制作用.通过形态学和生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,将菌株B196鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium.采用浸种和喷雾的方法将菌株B196接种到水稻植株后,均能在稻株体内回收到该菌株,表明菌株B196能在水稻体内定殖.菌株B196对水稻纹枯病的盆栽和田间防效分别为64.29%和55.13%.