中药复方多糖及其均一组分对雏鸡免疫功能的影响

目的:观察从自拟中药复方免疫增强剂中提取的复方多糖及其均一组分对雏鸡免疫功能的影响。方法:将14日龄健康雏鸡660只随机分为12组,每组55只。分别于15、16、17日龄口服黄芪多糖 环磷酰胺、复方多糖 环磷酰胺、GCPS-1-A-Ⅰ(多糖均一组分Ⅰ) 环磷酰胺、GCPS-2-A-Ⅱ(多糖均一组分Ⅱ) 环磷酰胺、GCPS-3-A-Ⅲ(多糖均一组分Ⅲ) 环磷酰胺、黄芪多糖、复方多糖、GCPS-1-A-Ⅰ、GCPS-2-A-Ⅱ、GCPS-3-A-Ⅲ、生理盐水、肌注环磷酰胺。分别在用药前、用药后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,测定红细胞数量;分别在NDⅣ系疫苗首免后7、14、21 d,二免后7、14、21 d采血、分离血清,测定ND-H I抗体效价。结果:中药复方多糖及其均一组分可使雏鸡红细胞数量、首免和二免后ND-H I抗体效价明显升高,其中以GCPS-2-A-Ⅱ组效果最佳;环磷酰胺可使上述指标明显下降,中药多糖能使环磷酰胺所致免疫抑制逆转至正常水平,复方多糖 环磷酰胺组、GCPS-2-A-Ⅱ 环磷酰胺组、GCPS-1-A-Ⅰ组、GCPS-3-A-Ⅲ组与生理盐水对照组相比差异不显著,复方多糖组、GCPS-2-A-Ⅱ组与黄芪多糖组相比差异显著。结论:中药复方多糖均一组分具有很好的免疫增强作用,但是其纯度与免疫增强效果不成正比。     

高温对母猪泌乳和相关调控激素影响的研究进展

母乳的产量和质量对哺乳仔猪的成活率、生长速度及健康程度至关重要,而高温是影响家畜泌乳健康的一个重要环境因素。特别是夏季,动物因长期处于高温环境而容易引发热应激。此外,动物的泌乳过程受到机体内分泌系统的严格调控,涉及多种激素,包括催乳素（PRL）、生长激素（GH）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）等。很多生产数据和研究结果表明,高温会造成母猪采食量降低,泌乳性能下降以及内分泌状态的改变,进而对母猪、仔猪均产生不利影响。为了保证母猪的健康状态及仔猪良好的生长性能,了解高温对母猪泌乳及相关内分泌激素的影响十分必要。作者针对高温对母猪泌乳量、乳成分和泌乳相关激素的影响进行总结,得到高温会降低母猪泌乳量,改变乳糖、乳脂和乳蛋白的含量及泌乳调控激素水平的结论,为后续探索高温影响母猪泌乳的内分泌机制及寻找适宜的缓解高温对母猪泌乳危害的措施提供参考。     

伪狂犬病病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达

本研究以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,PCR扩增含ULl8全长基因的片段并克隆至pMDl8-T载体,采用双脱氧末端终止法测序.序列分析显示ULl8全长891 bp,可编码297个氨基酸.将该基因亚克隆到原核表达栽体pQE.82L的6×His标签下游,获得原核表达质粒pQE-UL18,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达,表达的融合蛋白6 × His-UL18的分子量约为33 ku.Western blot证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应.进一步将UL18基因插入真核表达栽体pEGFP-N1中EGFP基因的5'端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL18,转染HeLa细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现,转染后24 h融合蛋白EGFP-UL18主要定位于细胞浆,仅有部分定位于细胞核,而48 h时则主要定位在细胞核.但对照载体pEGFP.N1转染细胞的荧光一直呈弥散型分布于整个细胞中.     

青藏高原东缘中国沙棘的克隆多样性及克隆结构

应用随机扩增多态性DNA标记(RAPD markers)对青藏高原东缘中国沙棘的克隆结构、克隆多样性进行了初步的探讨。结果表明,1) 14条RAPD引物在8个中国沙棘居群共184个样本中平均形成55.75种条带,平均有15.13种条带在居群内表现出多态性,平均多态条带百分率为27.64%;鉴别出26种基因型,平均每基株形成3.4个分株;2)与应用DNA分子标记研究的其他克隆繁殖能力较强的植物相比,中国沙棘的克隆多样性水平偏低,Simpson’s多样性指数(D)平均值为0.85;Fager’s均匀度指数(E)平均值为0.87;3)克隆结构分析表明,中国沙棘每克隆内分株间的平均距离为1.75 m,克隆繁殖的生长型主要为游击型,并且在居群内存在以某一优势基株为主的克隆分布方式;4) 居群的定居时间、生境及群落结构等对中国沙棘的克隆多样性有一定影响。     

小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列的克隆及序列分析

本研究对军事兽医研究所病毒二室分离驯化后的小熊猫源犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)基因组进行全序列测定,并对其基因组特征及H基因遗传稳定性进行比较分析。根据GenBank公布的犬瘟热病毒全长基因组序列设计合成17对特异性引物,以小熊猫源犬瘟热病毒总RNA为模板,RT-PCR进行分段扩增,并克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经测序、拼接获得全长cDNA序列。结果显示,小熊猫源犬瘟热病毒全基因序列与GenBank登录号分别为AF014953、AY445077、AY542312、AY466011、AY386316、AF164967、EU716337、EU726268、AY443350、AB474397、GU138403和AY649446的12个不同毒株全基因序列的同源性分别为86.6%、92.4%、92.5%、92.5%、94.3%、96.3%、95.9%、87.1%、94.5%、92.3%、87.4%和94.6%,与标准强毒株A75/17株(AF164967)的亲缘关系最近,全基因同源性达96.3%,但与疫苗株Onderstepoort(AF014953)亲缘关系相对较远,同源性为86.6%。小熊猫源犬瘟热病毒H基因与其他不同地区具有代表性的30株CDV进化树分析显示,小熊猫源犬瘟热病毒属于Asia Ⅰ型,H蛋白中309－311位氨基酸残基所形成的潜在糖基化位点,为疫苗株没有而野毒株所共有的,并且可能与病毒的免疫原性有关。因此,致弱的小熊猫源CDV在预防免疫的针对性上可能强于已有的疫苗株。     

鸭传染性浆膜炎疾病模型方法的建立

鸭传染性浆膜炎是鸭最常见的急性、败血性传染病之一,死亡率高,严重影响到养鸭业的发展。本试验通过对鸭传染性浆膜炎疾病模型的建立进行条件筛选,确立对6周龄雏鸭采用腹腔注射0.5 mL 4.5×10⁹ CFU/mL细菌浓度的鸭疫里默氏杆菌,5 h后鸭开始发病,3~5 d死亡率达80%,临床症状、病理学检查及病原学鉴定均符合该疾病模型复制的要求。本试验结果可以为该病的病理学研究及新药筛选提供理论依据。     

副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)单克隆抗体(MAb),本研究采用H.parasuis 5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了一株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有H.parasuis标准菌株;免疫共沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别的蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬菌体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有KTPAE-R保守序列,对应于H.parasuis SH29755株和SH0165株的469位~475位的氨基酸残基。对OppA氨基酸序列比对结果表明H.parasuis与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1%~74.5%,本研究结果为进一步研究H.parasuis感染的病原学诊断建立了良好的基础。     

生长激素对体外培养猪COCs影响的研究

研究了生长激素对猪COCs体外成熟过程中卵丘细胞扩展、卵丘细胞凋亡、卵母成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:生长激素(STH)能够促进卵丘细胞扩展,抑制卵丘细胞凋亡,对卵母细胞的成熟和激活后卵裂呈现双重效应。在猪COCs培养液中添加0.15μg/mL STH成熟率(73.83%±1.80%)和卵裂率(64.76%±2.84%)显著高于对照组(mNCSU-23+PMSG(10IU/mL)+hCG(10 IU/mL))及添加0.01、0.05、0.1、2μg/mL STH组(P<0.05),在本实验中为猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。     

对3个桑品种生理生态特征的比较研究

研究了湖桑32号、农桑14号和丰田2号等3个桑树品种的光合特征及叶绿素的部分参数。3个品种的光补偿点为3.58～50.10μmol/(m2.s),表观量子效率为0.022～0.051,湖桑32号>农桑14号>丰田2号;光饱和点为1 436.78～1 571.43μmol/(m2.s),丰田2号>农桑14号>湖桑32号;CO2补偿点为62.87～103.40μmol/mol,CO2饱和点为921.88～1 055.56μmol/mol,其中,湖桑32号的CO2补偿点和饱和点、羧化效率及二磷酸核酮糖羧化酶的最大再生速率(Pmax)均较显著高于其它两个品种;叶绿素相对含量丰田2号>农桑14号>湖桑32号,表明丰田2号单位叶面叶绿体数量较多,具有相对较大的光合潜力;光化学效率和光合电子传递效率分别为0.746 2～0.801 8、1.58～3.43,其中丰田2号的叶绿素荧光参数值显著高于其它2个品种,具有一定光适应和抗逆性能力。     

禽流感H9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。