施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法的建立

拟建立施马伦贝格病毒(SBV)S基因焦磷酸测序检测方法,用于施马伦贝格病毒病的快速检测和确诊。通过对公开发表的SBVS基因序列与布尼病毒科其他11种病毒S基因进行比对,找出不同病毒变异区域集中且变异区域两侧保守的序列片段,基因合成,体外转录,作为基因扩增模板。在特异性变异序列两端的保守区域设计扩增引物,进行RT-PCR扩增。在保守区域设计双向测序引物,对RT-PCR产物进行双向焦磷酸测序。通过比对测序结果,确定是否为SBV核酸序列;优化条件,确定检测方法的敏感性、特异性和重复性,建立SBVS基因焦磷酸测序检测方法。结果:建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法扩增基因片段长度为166bp;敏感性为可检测到104个拷贝;每一条测序引物可准确测出50bp左右核酸序列,双向测序可准确测出100bp左右核酸序列,具有较好特异性,完全满足施马伦贝格病毒病确诊要求;重复测序3次,均能准确测出100bp左右核酸序列。本研究建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法,可用于施马伦贝格病毒病的检测和确诊,整个检测过程可在1d内完成,大大缩短了确诊时间。     

新型兽医服务体系建设要素

兽医服务体系对畜牧业持续建康发展,动物重大疫病防控,保障公共卫生安全等起着十分重要的作用。论文结合国家对"三农"工作的发展要求,从兽医服务体系改革思路、构建新型体制机制、提升兽医专业技能水平、政策支持,建立有效的财政保障运行机制、推广普及和新技术应用、完善兽医法律体系建设和兽医信息化建设等方面进行了论述,以期为人类和社会提供更好的服务。     

散养条件下不同设施配置对蛋鸡产蛋性能、鸡蛋品质和空气质量的影响

为比较散养条件下不同设施配置对商品蛋鸡产蛋性能、鸡蛋品质和舍内空气质量的影响,采用单因子设计,选取23周龄商品代蛋用型北京油鸡2800只,随机分为4组,每组630只,每组设3个重复,每个重复210只。均采取舍外散养、舍内地面铺设厚垫料方式。各组配置分别为:1组(对照组)配置平铺型栖架,标准产蛋箱;2组配置平铺型栖架,普通产蛋箱;3组配置直立型栖架,普通产蛋箱;4组配置直立型栖架,标准产蛋箱。观察测定鸡只24~32周龄产蛋性能、产蛋位置和鸡蛋品质变化,以及32周龄平均氨气、二氧化碳浓度。结果表明,散养条件下不同设施配置对蛋鸡24~32周龄的产蛋性能具有显著影响,配置平铺型栖架和标准产蛋箱的对照组产蛋率(平均值为33.25%)显著高于配置平铺型栖架和普通产蛋箱组(平均值分别为21.83%、26.04%、27.48%,P<0.05)。同时蛋箱内第一层的产蛋比例要显著高于第二层(P<0.05),而不同配置对24~32周龄鸡的蛋品质影响不显著(P>0.05)。32周龄3、4组的平均氨气、二氧化碳浓度均显著高于1、2组(P<0.05)。可见,散养条件下舍内设施的应用有助于提高蛋鸡产蛋率,尤其是在配置平铺型栖架和标准产蛋箱的情况下,而且对舍内空气质量也有一定影响。     

Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化简

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件,筛选最佳siRNA干扰片段,进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默,为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy,AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells,RTECs）,并以脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,将Smurf2 siRNA转染入RTECs;通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件,转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响;同时,用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine ^TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时,转染效率最高,为70%～80%;Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显;与正常组相比,转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件,其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。     

草地对全球气候变化的响应及其碳汇潜势研究

 本研究用综合顺序分类法（ＣＳＣＳ）分析了１９５０－２０００年和２００１－２０５０年期间的草原类型演替及碳汇动态。证明中国草地的碳汇主体依次是冻原和高山草地、温带湿润草地、斯泰普草地和半荒漠草地大类,占中国潜在草地总面积的８５．５２％,年碳汇潜力占中国潜在草地年碳汇潜力的９３．２９％。全球草地的碳汇主体是萨王纳、冻原和高山草地大类,两者的面积和占全球潜在草地总面积的４８．５０％,年碳汇潜力占全球潜在草地年碳汇潜力的７２．２２％。在全球气候暖干化的强（Ａ２ａ）、弱（Ｂ２ａ）情景下,与当前（１９５０－２０００年）情景相比,中国将呈现草地面积减少,林地面积增加的态势;与中国的趋势相反,全球将呈现草地面积增加,林地面积减少的态势。在全球暖干化的Ａ２ａ和Ｂ２ａ模式下,草地年碳汇潜力,中国将分别提升１４．６％和１８．５％,全球将分别提升１７．３％ 和１６．８％。但两者的增长方式不同,全球是以温带湿润草地大类年碳汇潜力大幅增加为特征,而中国是以负增长为特征。我国的暖干化趋势在草地年碳汇潜力上的反映较之全球更强烈。尽管造成全球气候暖干化的自然因素远非人力所能控制,但系统问题只能靠系统综合的办法治理。这是草地工作者当前的使命。     

禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备和鉴定

以常规方法纯化H9亚型禽流感病毒，制备了两株分泌抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞11A5和1182，其上清ELISA效价均为1：10^4，腹水效价为1：10^7和1：10^6，HI效价上清分别为8、7log2，腹水效价均为15log2。采用HI方法证明其对禽流感病毒H9亚型的特异性，通过Western blot方法证明两株单抗都针对H9亚型禽流感病毒HA1蛋白。     

禽流感H9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。     

水貂奇异变形杆菌的分离与鉴定

2005年7月,辽宁省某水貂养殖场出现了以零星散发、高死亡率和多种内脏器官出现出血性败血症为主要流行病学特点的病例。从病死水貂内脏中分离出1株细菌,经染色、镜检和生化试验鉴定为奇异变形杆菌。应用药敏试验筛选出了高度敏感的抗菌药,控制了该病的继续发生。     

志贺氏菌的耐药性研究及防治对策

志贺氏菌能感染雏鸡，主要引起雏鸡拉脓血样粪便，该菌耐药性在兽医领域报道较少，本试验通过药敏试验，试管二倍稀释法测定三代头孢抗生素诱导志贺氏菌后可产生多重耐药性。