猪圆环病毒2型核酸疫苗的小鼠免疫保护试验

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗在小鼠攻毒试验中的免疫保护效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,扩增出ORF2基因及其截短基因8个片段(A(ORF2)、B(51-100aa)、C(101-150aa)、D(181-235aa)、E(151-200aa)、F(51-150aa)、G(101-235aa)、H(51-235aa)),将其插入到pcDNA3.0载体中,构建出真核表达质粒,并将其转染至PK-15细胞,用间接免疫荧光试验检测其瞬时表达情况。将试验小鼠随机分成9组,其中免疫组7组,阴阳性对照各1组,将纯化的真核表达质粒对小鼠进行组合免疫;二免后,用经处理过的PCV-2 GXWZ-2株阳性病料悬液腹腔注射免疫组和非免疫对照组小鼠,阴性对照组用生理盐水腹腔注射;其后进行体重记录、病理切片制作及PCR检测。结果表明:共有6个真核表达质粒成功在PK-15细胞中表达。在攻毒后的3周内,阳性对照组小鼠PCR诊断均为阳性;免疫组中,部分组小鼠在攻毒后第1周或在第2周为阳性,到第3周时各免疫组小鼠全部为阴性;阴性对照组始终为阴性。免疫组在病理保护学方面明显优于非免疫对照组,非免疫对照组的体重增长速率略低于免疫组和阴性对照组。由此可见猪圆环病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒试验中有明显的保护作用。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒2型二重实时荧光定量PCR检测方法的建立

以胸膜肺炎放线杆菌(App)apx ⅣA基因和猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因为靶基因,分别设计特异性引物和探针,建立App和PCV-2的二重荧光PCR方法。App引物扩增的目的片段大小为132bp,PCV-2为169bp。建立的方法可在同一反应体系中同时对App和PCV-2进行定量检测鉴别,其敏感性分别为1×101拷贝和1×100拷贝,对其他猪病病原核酸的检测为阴性。利用该方法对10份人工感染临床样品进行检测试验,其结果符合率达100%,说明该方法可用于对临床样品中App和PCV-2的检测。     

新生仔猪赖氨酸的需要量研究

本试验旨在研究不同日粮赖氨酸水平对新生仔猪生长性能、氮利用及体沉积的影响,探讨新生仔猪赖氨酸的需要量.选取4日龄、平均体重为(1-90±0.05)kg的杜×长×大三元杂新生仔猪46头,其中40头按窝别和体重分成5组,每组4个重复,每个重复2头猪,另外6头在试验开始时屠宰,测定体成分;各组日粮赖氨酸水平分别为1.27%(对照组)、1.37%、1.47%、1.57%及1.67%,饲养至21日龄.结果表明:1)1.47%～1.67%组仔猪21日龄体重、15～21日龄及4～21日龄平均日增重显著高于对照组(P<0.05),以1.57%组平均日增重最大.1.57%组和1.67%组在15～21日龄及4～21日龄的平均日采食量显著高于对照组(P<0.05).1.37%～1.67%组的仔猪料重比均显著低于对照组(P<0.05).2)1.47%～1.67%组仔猪氮的生物学价值显著高于1.27%～1.37%组(P<0.05).3)日粮赖氨酸水平未显著影响能量和脂肪沉积(P>0.05);随日粮赖氨酸水平的提高,蛋白质的每日沉积量增加,147%~1.67%组显著高于1.27%～1.37%组(P<0.05),以1.67%组最大.综合各项测定指标得出,4～21日龄仔猪日粮赖氨酸适宜水平为1.57%,即赖氨酸含量为73.1 g/kg CP或0.85 g/MJ DE;仔猪每日赖氨酸需要量为2.43 g/d.     

高效液相色谱法测定猪血浆及组织中喹赛多及其脱二氧代谢物

建立了测定猪血浆及肝脏、肾脏、肌肉等组织中的喹赛多及其代谢物脱二氧喹赛多的高效液相色谱(HPLC)法.血浆样用甲醇沉淀蛋白后离心取上清液进样测定.组织样先用乙腈匀浆,用正己烷脱脂后作HPLC检测.色谱柱为ODS C18柱;流动相血浆样测定为乙腈水(2080),组织样测定为甲醇水(4258),流速为1.0 mL/min;紫外检测波长305 nm.药物工作液质量浓度范围为0.005～0.500 mg/L时,血浆样品及组织样品测定条件下药物质量浓度与响应值均具良好线性关系,相关系数＞0.999.血浆中药物质量浓度为0.02、0.10、0.50 mg/L时,喹赛多及脱二氧喹赛多的回收率均大于70%,组织中药物含量为0.05、0.20、1.00μg/g时,肌肉样品的回收率均大于70%,肝脏、肾脏样品则为50%～80%.本试验条件下,喹赛多及其脱二氧代谢物的最低检出质量浓度,血浆样品分别为0.01、0.02mg/L,组织样品2种检测物均为0.025μg/g.测定了工作液3种质量浓度0.01、0.05、0.25 mg/L的仪器精密度,日内相对偏差＜8.0%,日间相对偏差＜17.0%.     

恒河猴血清抗体和补体成分测定

采用全自动血液生化分析仪测定了恒河猴血清抗体和补体成分。不同性别比较，除成年组雄性IgM和C3较高、青年组雌性C4较高外(P＜0．05)，其余各组雌雄间抗体和补体值差异均不显著。不同年龄组间比较，IgG和IgA与年龄关系不密切；IgM幼年组高于青年组和成年组(P＜0．01)，也高于老年组(P＜0．05)；老年组C3和C4较低。     

酵母硒对夏季柴鸡血液生化指标及内分泌机能的影响

旨在探讨夏季柴鸡日粮中添加酵母硒对其血液生化指标及内分泌机能的影响。试验选用30周龄河北柴鸡360只,随机分成5组,每组3个重复,基础日粮含硒(Se)0.08mg·kg-1,试验组Se的添加水平分别是0、0.15、0.3、0.5、1mg·kg-1;预试期7d,试验期为50d。结果表明:随着酵母硒的添加量的增加,清/球蛋白比差异不显著(P0.05),但呈上升趋势,饲喂0.3mg·kg-1硒的柴鸡体内清/球蛋白比最高;血糖呈下降趋势,但各组差异不显著(P0.05);可不同程度地降低血清谷丙转氨酶(GPT)和肌酸激酶(CK)活性(P0.05),提高乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)活性(P0.05),使T3、T4和血清皮质醇(CORT)活性显著下降(P0.05)。试验结果表明,柴鸡日粮中添加0.3～0.5mg·kg-1的硒可以缓解机体热应激反应,提高机体免疫力,同时改善机体物质代谢,进而提高柴鸡的生产性能。     

牛胚胎玻璃化冷冻技术的发展和应用概况

胚胎冷冻保存是动物胚胎工程的重要组成部分，它是胚胎移植技术在生产中推广应用的重要基础。和现在通用的常规冷冻法相比，玻璃化冷冻具有用时短，所需设备少和操作简单等优点，成为目前国内外胚胎冷冻保存领域发展新方向。本文就牛胚胎玻璃化冷冻的概念、方法和国内外发展状况做一简要综述。     

NaCl胁迫下黑麦草种子萌发过程中DNA甲基化与基因表达分析

为了解黑麦草（Lolium perenne）种子在正常条件与NaCl胁迫下萌发过程中DNA甲基化动态变化以及重要盐胁迫相关基因的表达。运用甲基化敏感扩增多态性技术分析对照和150 mmol·L^-1 NaCl处理下黑麦草种子萌发过程（0,1,2,4,7 d）的DNA甲基化水平及动态变化,并通过实时荧光定量 PCR（QRT-PCR）检测8个重要的盐胁迫相关基因的表达情况。结果表明：黑麦草种子萌发过程中甲基化水平呈下降趋势,以双链甲基化方式为主,甲基化变化同时发生在编码序列和非编码序列中。NaCl处理下DNA甲基化程度高于CK,而去甲基化程度低于CK,最终导致NaCl处理下基因组净的甲基化位点数目增加。黑麦草种子耐盐萌发过程中代谢增强,8个盐胁迫相关基因表达量呈上升趋势,而NaCl胁迫延缓了种子萌发进程,在大多数时间点的基因表达低于对照。     

日粮添加赛乐硒对西门塔尔牛瘤胃发酵和尿嘌呤衍生物含量的影响

选用7头体重420 kg,2.5岁装有永久性瘤胃瘘管的西门塔尔牛,采用7×7拉丁方设计,研究日粮添加赛乐硒(7.5,15.0和22.5 mg/d)和Na2SeO3(7.5,15.0和22.5 mg/d)对瘤胃发酵和尿嘌呤衍生物含量的影响。结果表明,15.0和22.5 mg/d赛乐硒组瘤胃pH值显著低于Na2SeO3组(P<0.05)。各处理组瘤胃氨态氮浓度显著低于对照组,但赛乐硒与Na2SeO3处理之间无显著差异(P>0.05)。22.5 mg/d赛乐硒组瘤胃乙酸浓度显著高于Na2SeO3组,赛乐硒各组丙酸浓度显著高于Na2SeO3各组及对照组,15.0和22.5 mg/d赛乐硒组瘤胃丁酸和总挥发性脂肪酸浓度显著高于Na2SeO3组,赛乐硒各组乙酸/丙酸显著低于Na2SeO3各组及对照组(P<0.05)。15.0mg/d赛乐硒组玉米秸秆干物质、有机物质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维有效降解率显著高于其他处理(P<0.05)。15.0 mg/d赛乐硒组豆粕干物质有效降解率显著高于对照组,15.0 mg/d赛乐硒组豆粕粗蛋白质有效降解率显著高于7.5 mg/d赛乐硒组(P<0.05)。15.0 mg/d赛乐硒组尿嘌呤衍生物含量显著高于Na2SeO3组(P<0.05)。赛乐硒较Na2SeO3显著促进瘤胃发酵,促进瘤胃纤维等营养物质的分解,促进蛋白质的合成,适宜补充量为7.5~15.0 mg/d。     

过瘤胃保护蛋氨酸稳定性及其评定方法的研究

本研究应用双外流连续培养系统和瘤胃尼龙袋法检验动物油包被蛋氨酸在瘤胃中的稳定性。根据动物油添加比例不同(分别添加20%、30%和40%),保护性蛋氨酸分为过瘤胃保护蛋氨酸I(RPMet-I)、过瘤胃保护蛋氨酸II(RPMet-II)和过瘤胃保护蛋氨酸III(RPMet-III)。试验结果表明:与未包被蛋氨酸相比,动物油包被蛋氨酸在瘤胃中的释放率显著降低(P<0.05);动物油添加比例不同对于过瘤胃保护蛋氨酸的稳定性影响显著(P<0.05)。不同形式保护性蛋氨酸在双外流连续培养系统中的降解趋势与在瘤胃中的降解趋势相似,且应用双外流连续培养系统测定各个时间点保护性蛋氨酸的释放率简单、稳定,与瘤胃尼龙袋法相比各个时间点的释放率均存在强相关回归关系(n=5,P<0.01),因此该系统适宜于评定保护性氨基酸的稳定性。