猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究

RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆人pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15d血清抗体即为阳性,30d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88％以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。     

饲料的科学贮存

1饲料原料(1)动物蛋白质类饲料。鱼粉、蚕蛹、肉骨粉、骨粉等动物蛋白质类饲料极易染菌、生虫,影响其营养价值。这类饲料一般用量不大,采用塑料袋贮存较好。为防止饲料受潮发热霉变,装好后应封严,置于干燥、通风处。保存期间要勤检查温度,如有发热现象要及时处理。     

酒精阳性乳乳腺上皮细胞ATP酶及膜磷脂组分的变化

为探讨酒精阳性乳的发病机理,试验从乳腺组织自由基代谢和膜损伤角度出发检测了酒精阳性乳患牛乳腺组织抗氧化指标,同时检测了膜ATP酶的活性,并对膜磷脂组分进行了检测。结果表明：酒精阳性牛乳腺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低（P〈0.05）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性略微下降,而丙二醛（MDA）含量显著升高（P〈0.05）;膜Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-ATP酶、Mg2＋-ATP酶活性均显著降低（P〈0.05）;细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰乙醇胺（PE）的相对含量明显下降（P〈0.05）。提示酒精阳性乳患牛乳腺组织氧化、抗氧化体系失去平衡,产生的过多自由基及脂质过氧化物攻击乳腺细胞膜,造成膜磷脂组分的改变,膜功能异常而分泌异常乳。     

小鼠附植前胚胎超薄切片的琼脂糖预包埋制备方法

将小鼠附植前胚胎分别经戊二醛一锇酸固定后,采取琼脂糖预包埋法使胚胎凝聚成团,然后对含胚胎的琼脂糖块进行脱水、渗透和包埋。结果显示,Epon812包埋块中的胚胎排列紧密,半薄切片胚胎的整体形态完整,胚胎超微结构保存良好。说明琼脂糖预包埋法是制备小鼠附植前胚胎超薄切片的有效方法。     

黄芩甙对断奶仔猪生产性能和免疫机能的影响研究

将96头杜×长×大三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组设3个重复。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2组在基础日粮中添加0.006%的喹乙醇;第3组在基础日粮中添加0.05%的黄芩甙;第4组在基础日粮中添加0.006%的喹乙醇和0.05%的黄芩甙,探讨黄芩甙与仔猪免疫机能的关系。结果表明:第2、3、4组血清中总蛋白I、gG水平与第1组相比有升高的趋势(P>0.05);第2、4组的白球比值显著低于第1组(P<0.05),3组白球比值也低于1组(P>0.05);第2、3、4组T3、C4、GH水平显著高于第1组(P<0.05),而C3、T4水平有升高的趋势,但差异不显著(P>0.05),皮质醇含量显著低于第1组(P<0.05)。试验结果表明,在早期断奶仔猪日粮中添加黄芩甙具有改善免疫机能的作用,有助于提高仔猪抗病力。     

重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价

试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素（CaIFN-α6）。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用Xho Ⅰ和Not Ⅰ双酶切将其连接至载体pPICZαA中,构建pPICZαA-CaIFN-α6重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取质粒pPICZαA-CaIFN-α6并线性化,电转入酵母感受态细胞X33中制备重组菌。采用甲醇进行诱导表达,收集上清,超滤浓缩,最终获得纯化的重组CaIFN-α6。利用BCA法测得纯化后的CaIFN-α6蛋白浓度为1.5 mg/mL,Western blotting分析表明CaIFN-α6蛋白具有良好的反应原性,SDS-PAGE显示其纯度约在95%以上,MDCK/VSV法检测其效价为2.37×10⁷ IU/mL,比活性为1.58×10⁷ IU/mg。结果表明犬α6干扰素在毕赤酵母pPICZαA表达载体系统中成功表达,且具有较高的生物活性,为后期的犬病毒病的临床预防与治疗提供了良好的支撑。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌诱发仔猪小肠炎症的分子机制研究

本试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌诱发7日龄仔猪小肠炎症反应。选取24头7日龄健康仔猪,随机分为4个处理组:对照组(人工乳)、STa组(人工乳+2×10~9 CFU重组菌LMG194-pBAD-STa)、LMG194组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌LMG194)和K88组(人工乳+2×10~9 CFU大肠杆菌K88),每组6头。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,观察空肠组织形态学变化,并检测血清中炎性细胞因子含量及空肠免疫相关基因的相对表达量。结果显示,与对照组相比,STa与K88组仔猪空肠绒毛明显萎缩变短,有明显损伤甚至脱落;STa、LMG194及K88组血清中IL-10、IL-8和IL-6浓度均显著升高(P<0.05),LMG194和K88组血液和肠道iFABP浓度均显著降低(P<0.05),STa和K88组血清中TNF-α浓度显著降低、NF-κB浓度显著升高,LMG194组NF-κB浓度显著降低、TNF-α浓度显著升高(P<0.05);STa和LMG194组CCL2和CXCL9基因表达水平显著上调(P<0.05),VNN1基因表达水平显著下调(P<0.05),STa和LMG194组IFN-γ组基因水平分别显著上升和下降(P<0.05);K88组CXCL9和IFN-γ基因表达水平显著下调(P<0.05),VNN1基因表达水平显著上调(P>0.05),CCL2基因表达水平无明显差异(P>0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素STa的重组大肠杆菌几乎具有与K88一样的毒性,可导致7日龄仔猪小肠黏膜受损,诱发严重的炎症反应,导致仔猪腹泻,可作为仔猪腹泻模型的候选菌株。