猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定

为克隆和研究猪细胞因子及相关基因,应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结,分离单个核细胞,经LPS PHA联合刺激不同时间后,提取总RNA。将各组样品混合,分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链和第二链,与EcoRI和HindⅢ接头连接。酶切和过柱分级分离后,与λScreen载体连接,经体外包装转染E.coliER1647宿主菌,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序。结果表明,成功构建了猪细胞因子cDNA文库,文库原始库容量为8×105,插入片段在300~2 000 bp,扩增得到特定的IL-2和IL-4基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。     

Mitogen-activated protein kinase is involved in the changes of intracellular free calcium concentration induced by wound exudate in cultured rat epidermal stem cells

AIM: To observe the effects of harvested wound exudate on intracellular free Ca²⁺ in epidermal stem cells (ESCs) in vitro, and to investigate the relationship between mitogen-activated protein kinases (MAPKs) signal pathways and Ca²⁺ mobilization in this condition.METHODS: Wound exudate was harvested from the 80 full-thickness wounds produced on both sides of the back in 40 adult Wistar rats. ESCs were isolated, purified from neonatal Wistar rats by referring to the formerly records and binding our ideas. When the cultured cells showed up clone growing, they were divided into five groups as follows: group A: control group (no-treatment); group B: only treatment with wound exudate; group C: treatment with wound exudate and PD98059; group D: treatment with wound exudate and SB203580; group E: treatment with wound exudate, PD 98059 and SB203580. Then, the cells were incubated with fluorescence Ca²⁺ dye fluo-3/AM at 37 ℃ for 30 min, and measured by using laser scanning confocal microscope.RESULTS: The results showed that the fluorescent intensity of group B was higher than that in group A. A phenomenon of calcium oscillation was found in group C and group D. Furthermore, a rapid decrease of fluorescent intensity was observed in the cells that were preincubated with PD98059 and SB203580 at the same time. CONCLUSION: Based on above results, we propose that wound exudate can directly induce an increase in intracellular free Ca²⁺concentrations of ESCs. MAPKs signaling pathway has an important function of feedback regulation for free Ca²⁺ mobilization of ESCs in this condition, and also is capable of affecting the biological behaviour of epidermal stem cells.     

甘肃省草本植物白粉菌调查(一)

对甘肃省部分草本植物白粉菌进行了调查研究 ,共报道发生在甘肃省草本植物上的白粉菌12种 ;对症状、病原形态、寄主植物及采集地进行了记载 ,对生产实践中预防和控制该病害的发生有实际意义和参考价值     

绿肥和施氮对旱作冬小麦农田土壤酶活性的影响

基于田间定位试验研究了种植绿肥和施氮对旱作冬小麦农田土壤酶活性的影响。试验采用绿肥和氮肥双因素完全设计方案,其中绿肥作物在夏季休闲期种植,包括长武怀豆、苏丹草、怀豆+苏丹草混播和裸地休闲（对照）4种处理;氮肥于冬小麦播前施入,包括0、60、120 kg·hm^-2共3个水平;观测指标包括土壤β-葡萄糖苷酶、纤维二糖水解酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶、亮氨酸氨基肽酶活性。结果表明,与对照相比,休闲期种植怀豆、苏丹草、怀豆+苏丹草混播均显著提高了以上4种土壤总体酶活性,0～10 cm和10～20 cm土层增幅分别达12.9%～59.3%和6.19%～48.8%。土壤β-葡萄糖苷酶和纤维二糖水解酶活性在不同绿肥处理间无显著差异,而种植怀豆较种植苏丹草和混播显著提高了乙酰氨基葡萄糖苷酶和亮氨酸氨基肽酶活性。施氮肥对土壤酶活性具有显著促进作用,且4种土壤酶活性均随着施氮水平提高而增加。氮肥与绿肥对纤维素二糖水解酶活性具有交互影响。黄土高原旱作种植系统休闲期间可以考虑通过种植绿肥作物尤其是豆科绿肥来提高肥力。     

基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的作用

【目的】基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的有效活性成分及其作用机制。【方法】从TCMSP数据库搜集黄芪中药化合物成分,并获取其潜在靶点。利用GeneCards和OMIM数据库搜集肠道菌群失调性腹泻(flora imbalance diarrhea)的作用靶点,将两者预测的潜在作用靶点进行映射,获得共同作用靶点。运用STRING数据库构建靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)关系,用Cytoscape_3.8.0软件对其网络进行拓扑分析,用DAVID数据库对共同作用靶点进行富集分析,用AutoDuck_4.2.6软件对其核心成分与核心靶点进行分子对接。【结果】黄芪含有11个调控仔猪肠道菌群失调性腹泻核心成分,其对应靶点基因65个,疾病靶点854个,交集靶点25个。PPI网络中显示肿瘤坏死因子(TNF)、转录因子AP-1(JUN)、半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、白细胞介素-6(IL6)、NF-κB抑制剂α(NFKBIA)、IL1B、IL10、细胞肿瘤抗原p53(TP53)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、C-C基序趋化因子2(CCL2)为关键靶点。GO功能和KEGG通路富集分析发现,黄芪有效成分主要通过美国锥虫病、炎症性肠病、阿米巴病、细胞因子-细胞因子受体相互作用、A型流感、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路参与转录调控、免疫反应、细胞对脂多糖的反应等生物过程。分子对接结果显示,槲皮素、山奈酚、芒柄花素等核心成分与TNF、IL1B等关键靶点结合紧密,亲和力较好。【结论】黄芪可能通过槲皮素、山奈酚、芒柄花素等主要活性成分作用于TNF、IL1B等靶点,通过参与美国锥虫病、炎症性肠病、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路进而治疗仔猪肠道菌群失调性腹泻。     

产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备

本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和Hind Ⅲ的双酶切,将得到的1125 bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys宿主菌中,37 ℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1 ku,与预期大小一致。Western blotting结果显示,该重组α毒素蛋白可被A型产气荚膜梭菌定型血清识别,表明该重组α毒素蛋白具备与天然毒素相似的反应原性。重组α毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和超声波裂解沉淀中均有分布,且以包涵体表达为主,表明重组α毒素蛋白可同时在胞外、周质和胞浆表达。小鼠毒力试验结果表明,重组α毒素蛋白不具有毒性。毒素—抗毒素中和试验结果表明,该抗血清具有α毒素特异性。以重组α毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明每1 mL重组α毒素蛋白抗血清可以中和100 MLD的A型毒素。     

破伤风疫苗的研究进展

作者阐述了破伤风毒素的来源、危害、历史以及在预防破伤风方面的疫苗研制情况，破伤风类毒素制备工艺及其存在的不足，提出了亚单位疫苗、基因疫苗和基因工程疫苗等的优点和应用前景。     

毛泽东与江泽民民族经济发展思想比较与思考

从民族经济地位、发展战略思想和措施等方面对毛泽东与江泽民的民族经济发展思想进行比照,认为建国后,我国三代领导集体有关民族经济发展的思路,是我国民族经济发展和和谐社会构建的原动力。     

红阳猕猴桃的栽培与管理

本文根据眉县地处秦岭北麓的地理位置及气候条件,结合近几年眉县猕猴桃果业生产实践经验,总结出的一套红阳猕猴桃优质丰产栽培技术措施。对眉县及周边地区发展优质猕猴桃产业具有参考价值。     

消费者安全农产品消费意愿与消费行为的一致性研究——以吉林省为例

消费者安全农产品购买意愿和支付行为的一致性对保障农产品质量安全具有重要的逆向促进作用。本文以吉林省城镇消费者的问卷调查数据为基础,实证分析了消费者安全农产品认知和消费情况,并用Logistic回归模型识别了影响区域消费者安全农产品购买意愿和购买行为一致性的因素。结果显示,尽管81.27%的受访者表示愿意购买安全农产品,但受溢价约束购买意愿和动机鲜少转化为购买行为。受教育程度、家庭人口规模、家庭月收入、消费环境、消费体验对消费者安全农产品购买意愿与行为的一致性具有显著影响;消费者农产品质量安全认证知识和政府农产品质量安全监管了解程度也对安全农产品消费意愿与行为的一致性有重要影响。