蔬菜土传病原菌三重PCR检测体系的建立与应用

【目的】 针对生产中危害严重的3种蔬菜土传病原菌瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）、尖镰孢（Fusarium oxysporum）、大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）,建立三重PCR（triplex PCR）检测体系,为蔬菜土传真菌病害的早期诊断和鉴定提供技术与方法。【方法】 筛选3种病原菌特异性引物组合,通过设定不同的PCR退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响三重PCR扩增的因素,建立蔬菜土传病原菌三重PCR检测体系,并对体系灵敏度进行检测。为了验证建立体系的稳定性,选择2×Taq Master PCR Mix（北京博迈德生物技术有限公司）和TaKaRa Taq酶（大连宝生物工程有限公司）2个不同公司的试剂,分别利用C1000 Touch ^TM型（赛默飞世尔科技有限公司）与Aeris ^TM型（新加坡艺思高科技有限公司）热循环仪进行三重PCR反应,比较检测结果的可重复性。对田间采集的35份病害样本和149份土壤样本,分别进行三重PCR和病原菌分离检测,以确定所建立得三重PCR检测体系的适用性。 【结果】 三重PCR反应体系中引物对AsAPH2B/AsPyF、FOF1/FOR1、VActF/VActR可分别扩增出瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌长度为163、328和530 bp的特异性目的片段。反应体系（25 μL）：0.12 μmol·L ^-1 AsAPH2B/AsPyF,0.16 μmol·L ^-1 FOF1/FOR1,0.24 μmol·L ^-1 VActF/VActR,2×Taq Master PCR Mix 12.5 μL,退火温度为60.8℃,35个循环。该体系对病原菌纯培养物的检测灵敏度为10 ^-1ng·μL ^-1,对土壤中大丽轮枝菌、尖镰孢和瓜果腐霉的检测灵敏度分别为10 ⁵、10 ⁶个孢子/g土壤和10 ^-2mg菌丝/g土壤。分别采用2×Taq Master PCR Mix和TaKaRa Taq酶,利用C1000 Touch ^TM型和Aeris ^TM型热循环仪进行三重PCR,扩增结果一致,说明三重PCR体系检测稳定性好。对田间采集的病害和土壤样本进行检测,25份病害样本和71份土壤样本中检测出带菌,三重PCR检测与病原菌分离培养结果一致。 【结论】 本研究建立的瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌三重PCR检测体系具有灵敏度高、稳定性和重复性好的特点,能够快速、准确地检测田间病株及其根围土壤中的瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌,为蔬菜土传病害的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。     

砧木对新郁葡萄生长和果实品质的影响

为评价砧木嫁接对南方湿热地区新郁葡萄生长与果实品质的影响,以Gloire、夏黑、抗砧1号、抗砧6号4种材料嫁接的新郁葡萄为试验材料,调查不同砧穗组合的物候期、生长结果习性、果实经济性状、营养成分等指标,分析各砧穗组合差异性,并用主成分分析法对葡萄砧穗组合的果实品质进行了综合评价。结果表明,Gloire、夏黑、抗砧1号、抗砧6号与新郁的砧穗组合均能提高新郁的萌芽率和结果枝率,Gloire与自根苗的总酚含量和总糖含量显著高于夏黑、抗砧1号、抗砧6号,Gloire、抗砧1号的平均粒质量显著高于夏黑和自根苗。主成分分析综合评价表明,4种材料中,Gloire为最适宜新郁葡萄的优良砧木。     

施肥对板栗八月红生理及营养成分的影响

设计6种不同施肥处理,探索不同处理对板栗(Castanea mollissima)结果性状、光合指标和主要营养成分的影响.结果表明,不同施肥处理对单位面积果枝数、每母枝果枝数、每果枝蓬数、单位面积蓬数和板栗叶片净光合速率无显著影响,不同施肥对结果性状和光合指标影响不显著的原因可能是萌芽期到花期,即3～5月的持续干旱,肥料未被板栗树充分吸收利用.对6种施肥处理的八月红主要营养成分的LSD检验和模糊分析表明,处理B和F有利于营养物质积累,C、D次之,A、E最差.尽管处理F施肥量比处理B多,但持续干旱少雨导致土壤肥料未被充分吸收,而叶面喷施肥料更能被叶片吸收利用,因此这两种施肥对罗田板栗的营养成分积累差异不显著.     

双孢蘑菇非麦粒基质栽培种的出菇对比研究

对以膨胀珍珠岩为主要基质的非麦粒蘑菇栽培种进行出菇试验,以麦粒菌种为对照,比较菌种吃料、爬土、纽结时间及产量情况,试验结果表明,非麦粒基质蘑菇栽培种在蘑菇堆肥上的表现正常,产量与麦粒菌种相当。     

促进郁金香提前开花技术浅析

根据郁金香不同生长阶段对气温、水肥的不同需求,从保温、施肥、浇水、叶面肥几个方面,促使郁金香提前开花和延长花期。     

基于智能手机的分布协同式农业专家咨决策系统设计

农业专家咨询决策系统是发展精确农业、现代农业的一项重要技术,当前我国农业专家决策系统多为静态知识库,无法动态更新;系统普适性偏低,一个决策系统只针对一种作物;便携性较差,很难应用于农村基层.针对这些问题,采用智能手机作为搭载平台,与后台计算机一起构建分布式、协同式农业专家决策系统,实现了专家决策系统的便携性、普适性、动态更新,使农业专家决策系统能够真正应用到农业生产一线,具有较高的使用价值.     

过氧化氢光催化脱色甲基橙溶液的研究

本文在H2O2存在下用紫外灯照射对甲基橙溶液进行光催化脱色。结果表明,甲基橙溶液的脱色率随着H2O2的增加而增加,但存在一个最佳值。当甲基橙浓度低于25 mg/L时,反应为假一级,当甲基橙浓度高于100 mg/L时,反应为零级;但是不符合Langmuir-Hinshewood动力学模型。脱色率在酸性条件下比碱性条件高。日光照射下对实际染料废水的脱色效果好。     

鱼酱脱腥调味工艺研究

以低值淡水鱼为原料,添加日常调味料如姜汁、紫苏、食醋、辣椒、香叶、八角、味精、花椒粉等,综合开展鱼酱脱腥调味的影响研究,确定鱼酱脱腥工艺参数。结果表明:样品添加1%的姜汁,经蒸煮后,加入乙基麦芽酚0.05%,每250 g鱼酱添加含有紫苏水14%,香料水4%、料酒8%,食盐1.0%,辣椒酱3%,胡椒粉0.4%,味精0.6%,酱油2.5%的混合调味料,鱼酱成品感官评分显著升高(P<0.05),脂质氧化速度显著减慢(P<0.05),脱腥效果十分显著(P<0.05)。     

施氮量对迟播油菜生长及氮素吸收的影响(英文)

[目的]分析氮肥对不同冬油菜品种越冬期营养生长和氮素吸收的影响。[方法]连续两年(2009-2011)田间试验,以早熟品种中油116和中晚熟品种中油杂12号为材料,设5种氮肥用量(0,90,180,270,360kg/hm2)。在越冬期对油菜干重,根系和地上部氮含量及比例,叶片硝酸还原酶活性进行测定,并对籽粒产量进行考查。[结果]中油116在施氮量从0增加到180kg/hm2时,地上部干重迅速增加;而在施氮量从180kg/hm2增加到360kg/hm2时,地上部干重缓慢增加。中油杂12号的地上部干重随施氮量的增加呈单峰曲线变化,在270kg/hm2时达到最大值。当施氮量从90kg/hm2到180kg/hm2时,地上部和根中的氮含量及比例均迅速增加,并且中油杂12号根中的氮含量及比例高于中油116。两个品种的硝酸还原酶活性在施氮量从90kg/hm2到180kg/hm2时增加最为明显。[结论]合理施用氮肥能够显著增加不同熟期油菜品种越冬期的干重及氮素吸收,并提高油菜产量。     

气相色谱-串联四极杆质谱测定餐厨废弃物中的丙烯酰胺

【目的】建立气相色谱-串联四极杆质谱（GC/MS/MS）检测餐厨废弃物中的丙烯酰胺。【方法】样品经去离子温水提取结合C18 SPE小柱净化或者经甲酸溶液提取/Carrez试剂预处理,MCX柱净化的两种前处理方法进行前处理,然后经过衍生反应,利用气相色谱串联三重四极杆质谱检测,在SRM检测模式下,以离子对m/z       152＞135和m/z 152＞107为定性离子对,m/z 152＞135为定量离子,碰撞气体能量15 V,外标法定量。【结果】该方法在3.0-30 ng•L-1浓度中呈现良好的线性关系,相关系数R2=0.9984,丙烯酰胺的检出限值为1.0 ng•g-1（S/N=3）,回收率为95.3%-108.1%,3个水平添加下的相对标准偏差（RSD）均小于4.3%。【结论】所建立的方法稳定、灵敏度高,可用于餐厨废弃物中丙烯酰胺的测定。