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为研究融合表达肿瘤靶向肽(RGD)和蜂毒肽(MEL)双基因重组减毒沙门氏菌对小鼠黑色素瘤B16细胞的体外抑瘤作用,本实验将RGD-MEL基因片段克隆至pEGFP-N1载体,将重组载体导入减毒沙门氏菌LH430,构建了重组沙门氏菌LH430/pEGFP-RGD-MEL,经PCR技术、质粒双酶切鉴定后采用阳性重组菌株侵染体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞,提取细胞总RNA经反转录后采用PCR检测目的基因RGD-MEL转录情况,western blot检测目的蛋白RGD-MEL以及凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax的表达;流式细胞术检测B16细胞凋亡情况。结果显示:导入RGD-MEL基因的减毒沙门氏菌LH430侵染B16细胞后,目的基因RGD-MEL高效表达;经重组菌株侵染的B16细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax表达水平均显著增高(p<0.05);重组沙门氏菌诱导B16细胞的凋亡作用较PBS组显著增强(p<0.05)。本研究为细胞穿膜肽和细菌联合治疗肿瘤提供实验支持,并为后续动物试验奠定了研究基础。 相似文献
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根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物,提取皮肤组织总RNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后与pGM-T载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞Top10,质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定,获得阳性Hairless、β-actin重组质粒;将阳性重组质粒按103~107拷贝/反应梯度稀释作为模板,进行实时荧光定量PCR,系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示,产物熔解曲线峰值单一,说明引物特异性高,且无引物二聚体;Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r2=0.998、r2=0.999,说明线性关系好。重复性试验结果显示,所构建的重组质粒9次同条件扩增Ct值具有良好的重现性,且变异率小于6%(107拷贝/反应除外),说明标准曲线重复性好。试验成功构建了目的基因Hairless、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绒山羊Hairless基因的mRNA表达水平奠定基础。 相似文献
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论述了新一轮本科人才培养方案修订的指导思想、基本原则、总体框架和主要特点,为进一步培养基础宽厚、能力强的高素质复合型人才奠定基础。 相似文献
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不同处理方法对美国截叶胡枝子种子发芽的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
截叶胡枝子(Lespedezacunecta)是原产于亚洲东部的一种多年生的豆科植物,在我国南方地区野生分布很广。它具有耐瘠、耐旱、耐酸、耐热、固土能力强、适应性广等特性,在国外也颇受重视。我国于1983年从美国引种,通过对其生物学和生态学特性、经济性状和栽培技术研究证明,引进的美国截叶胡枝子在人工栽培条件下,表现出良好的经济性状,是南方草地改良的希望种子。但是在生产中,由于其硬实的存在,使得种子的发芽率很低,往往造成出苗困难和草地建植缓慢,甚至出现严重缺苗断垄的现象,直接影响田间产量,限制了它的进一步推广应用。试验采用不同处… 相似文献
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Huntley JF van den Broek A Machell J Mackellar A Pettit D Meikle L Barcham G Meeusen EN Smith D 《Veterinary parasitology》2005,127(3-4):323-332
The present study confirms that following infection with the ectoparasitic sheep scab mite, Psoroptes ovis, there is a rapid (within 24 h) inflammatory influx of eosinophils and apoptosis of the keratinocytes at the site of infection. In order to investigate whether these inflammatory reactions are important in the maintenance of mite infection, a group of animals were treated daily after the establishment of infection with the potent anti-inflammatory drug, Cyclosporin A. The course of infection was monitored by determining the lesion area and mite numbers, systemic antibody and blood eosinophils, as well as the inflammatory cells and T cell sub-populations within the lesion throughout the 6-week duration of the experiment. These parameters were compared with those in a similar infected control (non-treated) group. In control infected animals, the lesion area and mite numbers increased steadily throughout the 6-week period. In contrast, lesion area and mite numbers were severely depressed in the group which received Cyclosporin A. Local and systemic eosinophils, and systemic antibody were also significantly reduced in the drug treated animals, compared to controls. Surprisingly however, the number of lesional pan T cells, T helper cells, gammadeltaT cells and dendritic cells in Cyclosporin A treated animals were either the same, or significantly (P < 0.05) enhanced when compared to the control infected animals at the termination of the experiment. The results will be discussed in terms of the role of the dermal inflammatory response in the establishment and maintenance of the sheep scab mite. 相似文献
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