1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定

利用细胞培养方法从临床表现神经症状的死亡仔猪脑组织内分离获得1株病毒,同时对该病毒进行电镜负染观察、昆明种小鼠致病性试验、RT-PCR检测和部分基因测序分析。电镜观察可见细胞培养物中有大量的直径约115 nm的冠状病毒样粒子;接种病毒的小鼠均出现典型的神经症状,死亡率100%;血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)特异性引物RT-PCR扩增结果阳性;其S基因序列与GenBank中登录的HEV-67 N相应基因序列的同源性高达99.6%。结果表明,分离的病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒,分离株暂命名为HEV-CC-2007。     

鸡传染性贫血病病毒分子生物学研究进展

鸡传染性贫血病病毒 (ＣｈｉｃｋｅｎＩｎｆｅｃｔｉｎｃｓＡｎｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ,ＣＩＡＶ)是鸡传染性贫血病的病原体。ＣＩＡＮ感染可引起雏鸡严重贫血和胸腺萎缩 ,甚至造成死亡 ,亚临床感染可引起食欲下降 ,并导致雏鸡对其它病原如ＩＢＤ、ＭＤ、ＮＤ等的易感性增强 ,是目前严重危害养禽业的病原体之一[1] 。 1979年Ｙａｓａ首次在日本报道此病后 ,德国、瑞典、荷兰、美国也陆续报道了此病。先后在欧洲、非洲及亚洲的鸡中发现它的血清学证据。1　病原特性1.1　病毒的分类地位在国际病毒分类委员会第六次分类报告公布以前 ,ＣＩＡＶ一…     

我国部分省(区)猪圆环病毒3型的分子流行病学研究

2016年美国报道了一种可引起猪皮炎肾病综合征、母猪繁殖障碍、呼吸道及高热等多系统炎症的新型病毒猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV-3)。为了解我国PCV-3的感染情况,针对PCV-3保守区设计一对特异性引物,对10个省106份样品进行PCR检测并测序分析。结果表明,10个省(区)中6个省(区)为阳性,地区阳性率60%;66个猪场中感染PCV-3的猪场为12个,猪场阳性率为18.2%;106个样品中检测PCV-3阳性的样品为19例,样品阳性率为18.0%。研究结果为更多了解PCV-3在我国感染情况提供了数据基础。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒S1蛋白基因在毕赤酵母中的表达

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用Ec0R I和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαASI。用BstX I酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。     

不同途径感染猪血球凝集性脑脊髓炎病毒的比较病理学

用传代鼠血球凝集性脑脊髓炎病毒接种液，经不同途径感染12头5日龄仔猪作比较病理学研究。结果表明，经脑内注射、前后肢肌肉注射、口服、口服兼滴鼻等途径接种的仔猪全部感染发病，并在接种后36～98h死亡。发病猪出现脑、脊髓的小静脉和毛细管充血、出血、水肿，神经原水肿、急性肿胀、急性液化及中央染色质溶解，胶质细胞轻微增生等非化脓性脑脊髓炎特征。口服兼滴鼻接种猪脑脊髓出血、脑水肿最明显，神经原变质也最重。脑内接种猪脑膜的血管周围出现明显的免疫细胞反应。     

LncRNA-NONMMUT131476.1对PHEV复制的影响及其靶基因Nlrc5的验证

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是长达200个以上核苷酸的转录本,在不同组织和发育阶段的表达具有特异性。为筛选与猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)致小鼠神经系统损失相关的LncRNA,本试验对正常小鼠和PHEV感染小鼠大脑皮质进行高通量测序,获得PHEV感染过程中LncRNA差异表达数据。经过生物学分析,发现与PHEV感染相关的LncRNA-NONMMUT131476.1位于小鼠第8号染色体Herpud1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1)和Nlrc5(NLR family,CARD domain containing 5)两基因间,由5个外显子构成。利用qPCR方法对感染PHEV的小鼠脑组织和N2a细胞中LncRNA-NONMMUT131476.1及Nlrc5基因的表达量进行检测,发现LncRNA-NONMMUT131476.1和Nlrc5基因的表达量均呈上调。研究发现干扰LncRNA-NONMMUT131476.1后Nlrc5表达被抑制,表明Nlrc5可能为其潜在靶基因。同时,沉默LncRNA-NONMMUT131476.1表达能促进病毒复制增殖,表明该LncRNA可能作为调节因子,参与调控PHEV感染过程,但其具体机制有待于进一步研究。本试验为PHEV感染发病机制和PHEV防制研究提供新思路。     

猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察

利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。     

仔猪实验性感染新疆猪瘟病毒野毒株的病理学观察

猪瘟 ( Hog cholera,HC)是由猪瘟病毒 ( HCV)引起猪的一种急性、热性、败血性、高度接触性传染病。猪是惟一在自然条件下对 HCV易感的动物 ,该病流行广泛、发病率和病死率高、危害极大 ,因而在国际兽疫局制定的《国际动物卫生法典》中 ,将它列为 A类 1 6种法定传染病之一 ,我国     

细胞凋亡的常用调控基因研究近况

细胞凋亡主要受基因的控制，现已发现许多基因对细胞凋亡均有直接或间接的调控作用。通常将这些基因分为两大类，即细胞生存基因和细胞死亡基因。一般认为与细胞生存有关的基因包括C－myc,C-abl,Ras,V-src,Bcl-2,EIB,LMW5-HL,C-kit和Bcl-x等；与细胞死亡有关的基因包含P^35,P^53,RB,DCC,WT-1,CpGv,Bcr-abl,V-erb-A,tats20,DAD1,ADO/Fas,TGF-β，TRP－2，RP－8，TRPM－2，SGP－2，TIA，Bax,ICE,C-rel,irrecrst等。本文对目前使用较多研究较深入的几种凋亡调控基因，即C－myc基因，Bcl-2基因，P^53基因，ICE基因，Fas基因及FasL和Cdc2基因的来源，作用和相互间关系的研究近况，予以综述，做一简介。     

金黄色葡萄球菌临床分离耐氟喹诺酮类药物株的gyrA和grlA基因突变

对 5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌 (MIC值范围 :4～≥ 12 8mg/ L) ,提取各细菌染色体DNA,对 gyr A和 grl A基因进行 PCR扩增 ,产物与 p MD18- T载体连接 ,转化至大肠杆菌 JM10 9感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,5株菌均发生了基因突变。突变位点 grl A:Ser80 (TCC)→ Phe(TGC) ,Ser80 (TCC)→ Tyr(TAC) ;gyr A:Ser84 (TCA)→ L eu(TTA )、Ser84 (TCA)→ Ala(GCA)、Glu88(GAA)→ L ys(AAA) ,其中 2株对氟喹诺酮类药物的 MIC值低 (4～ 6 4 m g/ L) ,均发生 grl A单一点突变 ,其余 3株在 gyr A和 grl A上产生多突变位点 ,且对氟喹诺酮类药物的 MIC值较高 (8～≥ 12 8mg/ L )。说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药 ,高水平的耐药需要多位点的突变。 5株耐药菌株均发生 grl A Ser80→ Tyr(Phe)点突变 ,提示环丙沙星、诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶 Iv