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[目的]克隆、表达牦牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白基因H(ompH)并鉴定其抗原性.[方法]扩增牦牛源多杀性巴氏杆菌去信号肽的ompH基因,构建原核表达载体pET28a - ompH,转化大肠杆菌BL21( DE3)并诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定表达目的蛋白,利用Western blot检测该蛋白的抗原性.[结果]成功克隆、构建了牦牛源多杀性巴氏杆菌去信号肽的pET28a - ompH原核表达载体.诱导表达蛋白约38 kDa,Western blot检测重组蛋白具有良好的抗原性.[结论]ompH基因的成功表达为重组OmpH蛋白的血清学检测方法的建立、多克隆抗体的制备及疫苗的研制奠定了基础. 相似文献
29.
对食源性单核细胞增生李斯特菌LM5567的lmoF2365_0032基因进行克隆和序列分析,利用PCR方法对lmoF2365_0032基因进行扩增,将扩增产物连接到pMD19-T载体上,筛选阳性菌株进行测序比对分析。结果显示,扩增获得的lmoF2365_0032基因序列长度为811 bp,克隆得到lmoF2365_0032基因的阳性转化子;生物信息学分析表明,lmoF 2365_0032蛋白属于跨膜蛋白,无信号肽序列;二级结构中无规则卷曲和延伸链结构占比较大,分别是37.86%和36.89%;序列比对结果表明,LM5567菌株lmoF2365_0032基因的核苷酸序列与02-6680菌株(4b,奶酪,加拿大)、10-0811菌株(1/2b,螃蟹,加拿大)的相似性均为99.7%;与10-0809菌株(4b,粪便,加拿大)、81-055菌株(4b,脑脊髓液,加拿大)、02-1103菌株、02-1792菌株(4b,奶酪,加拿大)、81-0861菌株(4b,卷心菜,加拿大)的相似性均为99.8%;LM5567 lmoF 2365_0032基因编码的氨基酸序列与上述菌株相似性均为94.7%。试验成功克隆了lmoF 2365_0032基因,可为进一步探究lmoF2365_0032基因功能奠定基础。 相似文献
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从新疆部分地区羊场近年来发生的以脑炎为主要临床特征的病死羔羊体内分离出2株细菌,经鉴定为粪肠球菌。经链球菌A-G乳胶分型诊断液检测后确定为D群链球菌。该菌对小鼠和羔羊有较强的致病性,人工感染可引起小鼠的死亡,感染羔羊能够复制出与自然感染相同的临床症状和病理变化,并从感染发病和死亡羊的脑、心血、肝脏中再分离到相同细菌,分离菌对万古霉素、氟苯尼考、头孢噻肟钠、诺氟沙星和恩诺沙星敏感,根据GenBank中粪肠球菌主要毒力因子的基因序列设计引物进行PCR检测,结果显示,1株细菌明胶酶(GelE)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、新的表面蛋白1(EF3314)等毒力因子基因阳性;另1株细菌溶血素激活因子(CylA)、表面蛋白(esp)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、2种新的表面蛋白1和2(EF0591和EF3314)等毒力因子基因为阳性。 相似文献