次郎柿ACC合成酶的转基因工艺研究

为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转基因植株。     

磨盘柿无节茎段不定芽的再生研究

以磨盘柿组培苗的无节茎段为外植体,通过3因素3水平正交试验,研究了基础培养基、激素种类及浓度对磨盘柿无节茎段不定芽再生的影响。同时,首次就无节茎段在组培苗上的着生节位、切段大小及接种方式对不定芽再生的影响进行了研究。结果表明:ZT对分化率和平均不定芽数的作用最大,基础培养基次之,IAA的作用最小。IAA对愈伤组织形成的作用大于ZT和基础培养基;组培苗顶端前2节位伸长无节茎段,切成4 mm左右,平放于培养基中可以获得最高的再生效率。组培苗无节茎段在MS(1/2N)+ZT4.0 mg/L+IAA0.1 mg/L培养基中、直接光照培养条件下分化率可达到83.65%,平均不定芽数为2.25。     

草莓乙烯受体FaEtr2基因植物表达载体构建

为通过转基因技术改善草莓的贮运性能,以全明星草莓为试材,克隆了与草莓成熟有关的FaEtr2基因的2个片段,并构建了该基因的反义和正义植物表达载体。根据已克隆的草莓乙烯受体FaEtr2基因序列及表达载体pBI221上的酶切位点设计2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个全明星草莓FaEtr2基因片段。两片段经双酶切消化后分别以正、反两个方向插入到植物表达载体pBI221的35 S启动子和NOS终止子之间,分别构建成All Star-FaEtr2基因的正、反义植物表达载体。     

3种中草药抑菌成分超声波提取条件研究

中草药提取物对多种果蔬采后致病菌有抑制作用,为获得更好的抑菌效果,从苹果中筛取苹果主要致病菌绿霉菌作为供试菌,以400倍多菌灵做对照,通过琼脂打孔扩散法对14种中草药提取物进行筛选,筛选出3种和400倍多菌灵抑菌效果无显著差异的中草药:丁香、黄连和桂皮。通过单因素试验和正交试验得到了这3种药材超声波的提取最佳条件(乙醇浓度、提取时间、提取温度)分别为:丁香70%、10 min、30℃;桂皮70%、20min、20℃;黄连80%、20 min、30℃。最佳提取条件的得出,为天然果蔬保鲜剂的开发提供了理论数据。     

草莓乙烯受体Ers1基因反义植物表达载体构建

[目的]构建草莓Ers1基因反义植物表达载体,为探明该基因的功能以及采用生物技术方法改良草莓品种奠定基础。[方法]根据已克隆的草莓乙烯受体Ers1基因序列及表达载体pBI121上的酶切位点设计1对带限制性内切酶位点的特异性引物,以Ers1基因的测序质粒为模板,PCR扩增到草莓Ers1基因片段,克隆片段及载体经双酶切消化后,回收产物定向连接,将克隆片段反向补插入到植物表达载体pBI121的35S和gusA之间,构建成该基因的反义植物表达载体。[结果]经酶切鉴定,成功构建了草莓Ers1基因反义植物表达载体。[结论]该研究为进一步探讨Ers1基因功能及利用生物技术方法调控果实成熟衰老进程,从而改善草莓果实的贮运性能奠定基础。     

人工杨树林病虫害的防治方法的分析

随着我国林业的发展和生态环境建设的不断推进,杨树作为一种重要的造林树种,在生态防护、退耕还林、城市绿化等方面发挥着重要作用。然而,近年来,人工杨树林病虫害问题日益突出,严重影响了杨树的生长质量和生态功能的发挥。为了有效防治杨树林病虫害,保障林业的可持续发展,本文将对人工杨树林病虫害的防治方法进行分析和探讨。本文首先对人工杨树林的主要病虫害进行了概述,分析了病虫害发生的原因和影响因素。接着,对目前常用的病虫害防治方法进行了详细分析,包括化学防治、生物防治、物理防治和生态防治等。本文重点探讨了各种防治方法的优势、局限性和适用条件,以及在实际应用中可能存在的问题和挑战。     

富有柿果ACC合成酶基因RNA干扰植物表达载体的构建

分析克隆的柿果ACC合成酶基因的序列,根据其与表达载体pSMAK311上的酶切位点设计2对带酶切位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增柿果ACC合成酶基因片段。双酶切PCR回收产物以及表达载体,将酶切产物定向连接构建成反义表达载体;在此基础上构建该酶基因的shRNA表达载体,由此转录的mRNA因两端序列反向互补而成发夹式RNA,因此,可应用于RNA干扰研究。将所构建好的载体转化农杆菌EHA101用于后续的遗传转化研究。     

上西早生柿试管苗根段植株再生试验

上西早生是松本早生富有芽变甜柿优良品种,在日本有较大的栽培面积,1989年从日本引入我国,目前在浙江、陕西和河北省有少量的栽培[1],适合我国中部地区发展推广[2].多数研究认为柿组培苗生根困难,且品种间存在差异性[3].本文研究了甜柿品种上西早生根段不定芽的再生及提高生根率的方法,旨在揭示上西早生组培苗的生根规律.     

农杆菌介导法将ACC合成酶和氧化酶反义基因转入日本甜柿的研究

以日本甜柿品种次郎(Diospyros kaki Thunb.cv.Jirou)的叶片为外植体,通过农杆茵介导法,建立了次郎柿遗传转化体系.结果表明,茵液OD600值为0.6,乙酰丁香酮浓度为200mg·L-1,筛选培养3 d,头孢霉素为300mg.L-1的转化率最高.在此条件下,将ACC合成酶和氧化酶的反义联合基因导入到次郎柿的组培苗中,经PCR检测,得到了8株转基因植株.     

胡萝卜品比试验

从西宁市引进3个胡萝卜品种,在海拔3000m较寒地区进行品比试验,结果表明,三红胡萝卜折合产量最高为69603kghm^2,通过试验筛选出三红为当地种植品种。