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[目的]进行染色体免疫共沉淀(ChIP)试验,挖掘MYB类基因At3g11280和At5g05790所调控的下游基因。[方法]在构建了标签融合蛋白植物表达载体的基础上,利用农杆菌介导的转化将这些载体转入拟南芥植物中,获得转基因植株,并用Western blotting检测标签融合蛋白在转基因植株中的表达。[结果]拟南芥植株转基因的效率很高,4种标签蛋白融合载体的转化均获得了20株以上的转基因植株。随机对4种转基因植株的8株T1代植株进行Western blotting分析,结果表明4,种转基因植株中均鉴定出阳性植株。融合蛋白的条带大小在30 kD左右,将显色信号条带与Marker比对,显示条带大小与预测蛋白大小相符。[结论]这些有融合蛋白表达的转基因植株为ChIP试验的进行提供了重要材料。 相似文献
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我国规模化猪场主要繁殖障碍性病毒病的血清学调查 总被引:7,自引:0,他引:7
猪的繁殖障碍是临床表现为母猪返情、早产、流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔以及仔猪存活率低等一类疾病的统称[1]。随着集约化养猪的发展,它已成为规模化猪场引起严重经济损失的一类重要疫病。引起猪繁殖障碍的原因错综复杂,除了生理性、营养性和饲养管理的因素外,由疾病引起的猪繁殖障碍越来越突出,其中病毒性疾病主要有猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病、猪瘟、猪圆环病毒2型感染、日本乙型脑炎、猪细小病毒病、猪流感等。为了摸清由病毒引起的繁殖障碍疾病在我国规模化猪场的流行情况,对本实验室收集的2004年12月至2005年11月由各地送检的3 1… 相似文献
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PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化 总被引:31,自引:0,他引:31
为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deleting ORF5)。将d ORF5克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-2,在E.coli BL21细胞中成功表达了重组蛋白GST-dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20.8%。Western-Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 相似文献
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重组N蛋白间接ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 总被引:7,自引:0,他引:7
用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白作为包被抗原,建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确定了ELISA最佳工作条件:抗原包被浓度为0.27μg/ml,37C1h加4C过夜,血清(1:40)和酶标免抗猪IgG(1:400)分别在37℃温育30min,底物溶液37℃显色15min。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高;与美国IDEXX试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为97.6%和92.1%,无显著性差异。用已建立的方法检测临床血清样本187份,总阳性率为30.5%。 相似文献
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本研究采用健康肉仔鸡和环磷酰胺免疫抑制肉仔鸡模型,通过体外细胞培养试验来研究2种共轭亚油酸异构体(c9,t11-CLA和t10,c12-CLA)对肉鸡巨噬细胞溶菌酶分泌水平的影响.选取24只1日龄爱拔益加(Arbor Acre)肉仔鸡随机分为免疫抑制处理组和健康肉仔鸡组,分别于14、15和16日龄进行环磷酰胺(cyclophosphamide,CY;80 mg/kg体重)腿肌注射和等体积生理盐水腿肌注射.巨噬细胞体外培养试验采用含不同浓度(0、25、50和100μmol/L)c9,t11-CLA、t10,c12-CLA或1:1的混合物(CLA混合物).结果表明,t10,c12-CLA可减缓CY对巨噬细胞溶菌酶合成和分泌的抑制作用.添加高剂量的t10,c12-CLA效果好于低剂量添加.c9,t11-CLA对巨噬细胞溶菌酶的分泌无明显影响. 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对外周血单个核细胞凋亡细胞因子mRNA表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductine and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)单感染和共感染6周龄健康仔猪,采用real-time PCR技术对外周血单个核细胞(PBMC)中的病毒栽量以及Fas、FasL、TNFR1和TNF-α等凋亡细胞因子mRNA表达水平进行检测,采用流式细胞术对PBMC的凋亡比率进行检测.结果显示,PRRSV/PCV2共感染组PBMC中PRRSV和PCV2载量、PB-MC凋亡比率均显著高于PRRSV感染组或PCV2感染组.所有病毒感染组的Fas、FasL、TNFR1和TNF-α的mRNA表达水平均显著上调,并且PRRSV/PCV2共感染组的表达水平均显著高于单感染组.结果表明,Fas/FasL、TNFR1/TNF-α表达水平的显著上调可能在PRRSV和PCV2协同诱导凋亡机制中扮演重要角色. 相似文献