两种纯化兔抗酸性红73免疫球蛋白G方法的比较研究

分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×10⁵;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×10⁵。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。     

浙西北单季稻区稻飞虱药剂防控效果

对6种药剂防控稻飞虱试验结果表明,30%混灭.噻乳油80mL/667m2、18%吡.噻可湿性粉剂50g/667m2、25%噻嗪酮可湿性粉剂50g/667m2、10%吡虫啉可湿性粉剂50g/667m2、40%毒死蜱乳油100mL/667m2药后7d对单季稻五(3)代稻飞虱均有较好的总体防治效果,分别为97%、95%、96%、93%、90%,5%氟虫腈悬浮剂40mL/667m2的防效仅为63%,极显著低于其他药剂防效;其中,各处理对白背飞虱校正防效分别达97%、96%、97%、96%、90%、59%,以氟虫腈处理效果为显著低;对褐飞虱校正防效分别达97%、94%、96%、70%、92%、91%,以吡虫啉处理防效为显著差。在稻田以白背飞虱为主发生时,以选用混灭.噻、噻嗪酮、吡.噻、吡虫啉、毒死蜱处理为好,以褐飞虱为主发生时,则以选用混灭.噻、噻嗪酮、吡.噻、毒死蜱、氟虫腈处理为好,不宜使用吡虫啉处理。并且噻嗪酮、混灭.噻、吡.噻、吡虫啉处理区蜘蛛量相对较高,对稻飞虱的持续控制发挥了一定的作用。     

影响五指山小型猪主要脏器重量及脏器系数的因素分析

为测定不同年龄段封闭群五指山小型猪主要脏器重量和脏器系数,研究影响脏器系数的因素,试验选用普通级封闭群五指山小型猪74头(其中♂43头,♀31头),测定体重和心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、胃6个脏器的重量,计算脏器系数,分别以年龄和体重为研究因素,对脏器重量和脏器系数进差异性、相关和回归分析。性别间比较显示,不同年龄段小型猪脏器重量少量脏器间存在显著性差异(P<0.05),但脏器系数性别间差异不显著(P＞0.05)。单因素分析结果显示,随着年龄和体重的增大,脏器重量显著增加(P<0.0001);在脏器系数对年龄因素的分析中,心脏、肝脏、肺脏和胃出现显著减小的趋势(P<0.0001),而脾脏和肾脏的减小趋势不明显(P＞0.05),而在脏器系数对体重因素的分析中,所有脏器系数均出现明显减小的趋势(P<0.01)。多因素分析结果显示,各脏器的重量和脏器系数受体重的影响程度不同。研究结果表明,性别因素对五指山小型猪脏器重量和脏器系数的影响不大,年龄和体重是主要的影响因素,其中体重因素最为关键,脏器重量随着体重的增加而显著增加,而脏器系数明显减小。     

鸭出血性卵巢炎广东病例报道及其RT—PCR方法的建立

本文对广东省内9个白鸭种蛋鸭场发生的鸭出血性卵巢炎症状、病变、流行情况进行了报道,并建立能从病死鸭肝脾组织直接进行特异性RT-PCR的快速检测方法。     

几种新型药剂对斜纹夜蛾的控制作用

通过15%茚虫威乳油等5种高效低毒农药进行防治斜纹夜蛾田间药效试验,明确不同药剂对斜纹夜蛾的防治效果、最佳使用剂量及对作物的安全性。结果表明,20%氟虫双酰胺水分散粒剂（垄歌）2 500倍药后1 d的防效为-0.39%,具有显著性差异;各药剂药后3,5,7 d对斜纹夜蛾均有较好的防效;各处理未见对作物生长产生不良影响,安全无药害,同时也未见对其他有益生物的影响。     

两株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析

为调查广东地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及其遗传变异情况,本研究通过病料SPF鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定,于2013年从广东湛江地区不同发病鸡场分离到两株IBV,分别命名为CK/CH/GD/ZJ10/2013和CK/CH/GD/ZJ11/2013,并对这两株IBV的S1基因进行序列分析。结果显示,CK/CH/GD/ZJ10/2013株S1基因全长1 626 bp,编码542个氨基酸,其裂解位点为NRFRR,属于基因型Ⅲ,并推测其为基因型Ⅲ毒株(CK/CH/GX/NN11-3)与基因型Ⅰ毒株(GX-NN-6)在S1基因处发生重组而产生的新毒株;CK/CH/GD/ZJ11/2013株S1基因全长1620 bp,编码540个氨基酸,其裂解位点为HRRRR,属于基因型Ⅰ(类QX型);两株IBV的S1基因间核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性较低,与位于同一基因型的参考毒株间同源性较高,而与中国使用的Mass型常规疫苗H120和H52之间的同源性最低,仅为75.7%~76.3%和77.1%~77.9%。本研究可为广东省IBV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。     

犬源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药性及4种耐药基因的检测

为调查犬源大肠杆菌氨基糖苷类药物4种耐药基因的携带情况,探讨氨基糖苷类耐药表型与耐药基因的相关性,本试验选用氨基糖苷类代表药物庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和妥布霉素进行药敏试验,参照相关文献用已建立的检测氨基糖苷类4种主要耐药基因的PCR方法对分离鉴定的156株犬源大肠杆菌进行分子检测。随机选取4种耐药基因阳性进行克隆测序并对药敏试验结果和耐药基因检测结果进行比较分析。结果显示,犬源大肠杆菌对庆大霉素、妥布霉素、大观霉素和阿米卡星的耐药率分别为55.8%、32.7%、25.0%和20.5%;所检大肠杆菌4种耐药基因aacC2、aphA3、aadA和aacC4的检出率依次为55.8%、26.3%、23.1%和9.0%。两株携带4种耐药基因,8株携带了3种耐药基因,携带两种或两种以上耐药基因菌株数占总菌株的40.4%(63/156)。序列分析结果表明,犬源大肠杆菌扩增产物与GenBank中的相应序列同源性较高。犬源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以aacC2为主,耐药率与耐药基因的符合率基本呈正相关。     

黧蒴栲遗传多样性的AFLP分析

遗传多样性分析为黧蒴栲优良品种的培育和利用提供技术依据。利用AFLP技术对39个黧蒴栲半同胞家系进行遗传多样性分析,结果显示利用8对引物共扩增出清晰条带761条,其中有多态性的条带有565条,多态率为74.14%,半同胞家系之间遗传多样性较高。黧蒴栲不同优树采集地之间遗传多样性较大,遗传多样性表现出较明显的地域性。各优树采集地内的遗传多样性表现不一致：湖南通道、福建明溪、广东平远优树采集地内遗传变异小;广西永福、融水、平果3地优树采集地内遗传变异较大,存在较大的遗传多样性;广西苍梧优树采集地内遗传变异最大。黧蒴栲出现优良半同胞家系的几率和遗传多样性密切相关,遗传多样性高的出现优良半同胞家系的几率大。出现优良家系的几率与家系所处的地理位置具有相关性,优良率与家系所处的纬度呈高度负相关,与经度为中度负相关。     

猪圆环病毒2型ORF2与T细胞表位基因重组腺病毒表达载体的构建及鉴定

利用腺病毒表达系统表达猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）的ORF2基因与T细胞表位（T cell epitope,TCE）基因,表达的融合蛋白具有反应原性,为研制PCV2新型疫苗奠定基础。以pMD18-T-ORF2、pMD18-T-TCE为模板,采用PCR方法扩增目的基因ORF2和TCE,以多肽接头（Gly₄Ser）₃为连接子,运用重叠延伸PCR技术将2段基因通过连接子（Gly₄Ser）₃进行融合连接。将融合基因定向克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV构建重组质粒pShuttle-CMV-ORF2-TCE,将该重组质粒用PmeⅠ酶线性化后电转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞（内含pAdEasy-1骨架质粒）进行同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-ORF2-TCE。PacⅠ酶线性化pAd-ORF2-TCE质粒后转染AD293细胞包装病毒,重组腺病毒经3轮噬斑纯化后获得重组腺病毒rAd-ORF2-TCE,病毒滴度为10^12.3 TCID₅₀/mL。Western blotting及间接免疫荧光试验（indirect immunofluorecent assay,IFA）结果表明融合蛋白得到正确表达。     

H1亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、简便、准确的方法以诊断和检测H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV),试验根据H1亚型SIV血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,分别设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,建立检测H1亚型SIV的一步法实时荧光定量RT-PCR技术。结果显示,该方法的敏感性可达10²拷贝/μL,除H1亚型SIV外,对H3N2亚型SIV、H9N1亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒的检测均为阴性,且应用该方法对疑似猪流感样品进行检测,其结果与SPF鸡胚分离病毒方法结果的符合率为94%。本试验结果表明该方法特异性强、重复性好,有望成为一种特异、敏感、快速、定量检测H1亚型SIV的方法。