一种改良的扩增cDNA 5′末端的方法

 介绍一种改良的扩增基因5′cDNA序列的方法（改良TdT加尾扩增法）,该方法以龙眼为材料采用了TdT（末端脱氧核苷酸转移酶）加尾、锚定PCR、巢式PCR、降落PCR等多种策略。通过与常规方法（用TaKaRa试剂盒）的对比试验,发现该方法原理简单,操作性强;扩增特异性高,结果真实可靠;同时还具有快速低廉的特点,适合于在一般实验室中推广使用。     

香蕉MaTIFY1转录因子特性及其在成熟过程中基因表达分析

从香蕉果实中分离获得1个TIFY亚族的转录因子基因,命名为MaTIFY1。该基因含有一个681 bp的ORF,编码一条长度为227 aa,分子量为24.97 kD,等电点为7.85的氨基酸多肽链。MaTIFY1定位于细胞核,并且具有转录激活活性。荧光定量PCR分析表明,MaTIFY1随着香蕉果实成熟进程表达明显增强,并且外源丙烯处理可诱导其表达。此外,MaTIFY1启动子活性受乙烯利诱导激活,进一步表明MaTIFY1可能参与香蕉果实成熟的调控。原核表达并纯化了MaTIFY1重组蛋白。     

植物耐寒性的诱导及其与蛋白质的合成、基因表达的关系

论述了诱导植物耐寒性的几种方法,植物耐寒诱导过程中合成的特异蛋白质及基因表达与耐寒性的关系,植物耐寒诱导的种、品种及器官性与蛋白质的及基因表达的关系。     

快速高效提取荔枝幼果和离区组织RNA的新方法）

 以荔枝幼果和离区为材料,以N–十二烷基肌氨酸钠（LSS）为RNA提取液的主要成分,建立了一种简单快速高效适合于荔枝幼果和离区总RNA提取的新方法,简称LSS法。该法提取RNA的过程只需2 h,且质量高,幼果和果柄RNA的28S/18S值分别为1.7和1.9,RNA完整性（RIN）值分别为9.7和10.0,分别为380和450 μg · g-1,A260/A280值分别为1.80和1.89。将提取的RNA经DNA酶消化后反转录成cDNA进行PCR,扩增出预期长度的目的片段,满足进行后续基因表达的要求。LSS法操作简单快速,对微量组织样品是一种有效的RNA提取方法。     

香蕉贮运保鲜技术研究进展

香蕉贮运保鲜是一项综合的系统工程,涉及香蕉品种及果实质量、采后处理过程及贮运保鲜技术与果实商品性等方面。本文综述了近年来国内外香蕉贮运、保鲜技术研究进展,着重介绍了以“控制低乙烯”为核心的香蕉保鲜贮运技术及香蕉采后处理轻简装备等在产业上的应用,同时简要介绍了生物技术在香蕉采后保鲜应用中的研究进展。     

简并引物的程序化设计与荔枝HMGR基因片段的克隆

主要介绍了利用NCBI、DDBJ、Blockmaker、CodeHop和Oligo6.0等数据库和生物软件进行简并引物设计的方法。利用设计的6对简并引物进行RT-PCR,从荔枝(LitchichinensisSonn.)果实中克隆到2个长度分别为510bp和582bp的cDNA片段。通过Blastx检索Genbank进行同源性比对后,发现2片段都与其它植物的HMGR基因具有较高的氨基酸序列同源性。研究表明,该程序化设计的简并引物可信性强,阳性率高,能迅速得到满意结果。     

香蕉果实转录因子MaWRKY1基因的原核表达和多克隆抗体制备

MaWRKY1是从香蕉果实中克隆出的一个转录因子基因。为进一步研究该基因的功能,制备了MaWRKY1多克隆抗体。选取MaWRKY1基因全长中N端第168 ~ 400个氨基酸之间的包括两个WRKYGQK保守域的cDNA序列,构建了原核表达载体pET-MaWRKY1,并转化到大肠杆菌BL21中诱导表达菌体蛋白。SDS-PAGE电泳检测结果表明,His-MaWRKY1融合蛋白成功获得了高效表达,分子量在26 kD左右。His-MaWRKY1融合蛋白经过Ni-NTA琼脂糖凝胶树脂纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到的纯化蛋白浓度达到0.5 mg • mL-1。经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清,采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化。将纯化后的抗体通过间接酶联免疫（ELISA）和蛋白质印迹（Western blot）分析,表明所制备的抗体具有很好的效价,效价比为1︰160 000,同时具有良好的灵敏度和特异性。进一步提取香蕉不同组织总蛋白,Western blot检测显示,在分子量26 kD左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗体可以与香蕉WRKY蛋白特异性结合,并且低温可以诱导香蕉果实中MaWRKY1蛋白表达,暗示MaWRKY1蛋白表达可能与果实耐冷性有一定的关系。     

龙眼果实ACS和ACO基因克隆及其表达特性

采用RT-PCR和RACE扩增技术相结合的方法从龙眼果实中分离得到ACS和ACO基因,并分别命名为DlACS1和DlACO1。DlACS1蛋白一共编码486个氨基酸,含有7个保守区域和11个不变的氨基残基;DlACO1蛋白一共编码315个氨基酸,含有7个保守区域和9个不变的氨基残基。在龙眼果实发育过程中,果实乙烯释放量在幼果期出现一个小峰,随后逐渐降低,至发育后期维持在较低水平。Northern分析表明,果皮中DlACS1和DlACO1的表达均在果实快速生长期达到最高;在果肉中,DlACS1只在果肉生长初期表达,DlACO1表达随着果肉的生长缓慢降低,在果实成熟期略有升高。此外,DlACS1和DlACO1表达不具有组织特异性,但在各组织中的表达有明显差异。上述结果为研究非跃变型果实的成熟与乙烯之间的关系奠定了基础。