嘧肽霉素高产菌株的选育

以不吸水链霉菌辽宁变种为出发菌株,经紫外线、亚硝酸诱变和紫外线与嘧肽霉素复合诱变,选育出了嘧肽霉素的高产菌株,抑菌圈直径由原来的20.5mm提高到36.4mm。传代培养5代表明,该高产菌株遗传特性稳定。     

黄瓜根际土壤细菌群落的16S rDNA-PCR-DGGE分析

采用PCR-DGGE技术分析了接种枯萎病菌后黄瓜根际土壤细菌群落的动态变化。对黄瓜种植前、接菌前、接菌后发病、接菌后未发病以及接种清水(对照)共5份土壤样品直接提取其总DNA,用F338-GC/R518引物扩增16Sr DNA基因的V3可变区,结合DGGE电泳条带分析样品的细菌群落组成及变化趋势。结果显示,接种枯萎病菌后,会引起黄瓜根际土壤中细菌数量及种类发生较大的变化,其中,接种枯萎病菌后Rhodococcus phenolicus(E1)、Clostridiumsp.(E3、E6)以及3种未培养细菌(E2、E4、E5)数量增加,另外2种未培养细菌(A1、A2)数量减少。     

嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用

研究了嘧肽霉素对烟草赤星病菌的抑制作用.结果表明:在PDA培养基上共同培养时,抑菌圈直径为47.1mm;嘧肽霉素作用方式是抑制孢子萌发,使病菌菌丝生长受到限制,原生质聚集,后菌丝畸形,出现大量原生质外渗;该药液作用位点在菌体的细胞膜上,菌体失去侵染力.     

烟草靶斑病菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因endoPGs的克隆及表达特征分析

【目的】内切多聚半乳糖醛酸酶（endo polygalacturonases,endoPGs）是重要的致病因子之一。论文从烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）强致病力菌株YC-9和弱致病菌株LF-2中克隆该致病基因,分析比较该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在与烟草互作过程的致病作用。【方法】通过比较GenBank中不同植物病原真菌的endoPGs序列设计简并引物,首先获得菌株YC-9及LF-2的endoPGs基因片段,再采用RACE技术克隆获得其cDNA全长序列;生物信息学分析比较其保守结构域及序列特征;采用MEGA 4.0软件构建endoPGs的系统进化树;通过real-time RT-PCR技术对强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的endoPGs与烟草K326互作的表达特性进行研究。【结果】克隆获得了烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9和弱致病力菌株LF-2的endoPGs的cDNA全长序列,分别命名为endoPG1和endoPG2,开放阅读框（ORF）长度均为1 086 bp,编码361个氨基酸;比较分析表明endoPG1和endoPG2的推测蛋白均具有PLNO3003基因家族保守结构域,其跨膜结构间存在差异;成功构建了该基因系统进化树,结果表明来自烟草靶斑病菌的endoPGs构成独立分支,且烟草靶斑病菌endoPG1及endoPG2同源关系最近;real-time RT-PCR表达特性分析结果显示,靶斑病菌endoPG1和endoPG2与烟草互作（接种）之后该基因的表达与未互作（不接种）的对照样品相比均呈明显上调趋势,同时endoPG1表达迅速且高于endoPG2。【结论】 烟草靶斑病菌强致病力菌株YC-9及弱致病力菌株LF-2的内切多聚半乳糖醛酸酶基因均具有PLNO3003基因家族的保守结构域,其推测蛋白的跨膜结构间存在差异,该推测蛋白与烟草靶斑病菌同源关系最近,且endoPG1和endoPG2的推测蛋白的同源性最高;内切多聚半乳糖醛酸酶基因的表达受与烟草互作的诱导,在不同致病力菌株中存在明显差异。     

烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后内源激素的变化

研究了烟草抗病品种VAM和感病品种K326感染马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)后体内乙烯和吲哚乙酸(IAA)的变化及其与发病的关系。结果表明,乙烯生成速率增加和IAA含量的升高与PVYN引起的烟草叶脉坏死密切相关。抗病品种VAM随接种时间的延长,乙烯生成速率和IAA含量的变化比较平缓,而感病品种K326随症状表现的加重,乙烯生成速率和IAA含量的变化非常显著。     

硫酸镁对烟草感染PVYN后病情及防御酶系活性的影响

对叶面喷施240mg·L-1硫酸镁溶液后,烟草幼苗感染烟草马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato Virus Y-vein necrosis.PVYN)的发病情况、病毒含量及防御酶系活性进行研究.结果表明:烟草幼苗经240 mg·L-1MgSO4处理,再接种PVYN后其发病程度减轻,病情指数及幼苗叶片中病毒含量均低于未喷施MgSO4的对照.叶面单独喷施MgSO4处理和喷施后接种PVYN处理,对苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性均有较强的促进作用.烟草幼苗接种PVYN后,PAL在处理第6天时达到酶活高峰(2.63U·g-1FW),POD、PPO的活性在接种PVYN后第15天时产生高于对照处理的酶活高峰,峰值分别为55.76U·g-1FW和10.62U·g-1FW;但喷施MgSO4对过氧化氢酶(CAT)活性影响较小.本研究证实,MgSO4具有较强的诱导植物产生抗病毒的能力,可明显提高植株的抗病性.     

锌营养对烟草生长及抗性生理生化指标的影响

研究了不同锌营养水平下烟草外渗电导率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、游离脯氨酸含量、丙二醛含量和根系活力等相关抗性生理生化指标的变化情况。结果表明,锌浓度为0.1 mg/L处理后烟株长势较好,并且其外渗电导率、游离脯氨酸含量及丙二醛含量均低于其他处理,而可溶性糖、可溶性蛋白含量及根系活力均高于其他处理,说明该处理浓度对烟草自身抗性有明显的促进作用。     

不吸水链霉菌辽宁变种基因转移系统的建立

以嘧肽霉素生物合成阻断突变株UV2136为研究对象,建立了不吸水链霉菌辽宁变种的基因转移系统.UV2136对硫链丝菌素高度敏感,选择含有该抗生素标记的质粒pU702和pWHM3,探索其转化UV2136的可能性.结果表明:UV2136含有较强的限制修饰系统,采取热衰减法获得原生质体、原生质体热处理、冷处理、EDTA处理、质粒DNA变性等,均不能实现质粒pH702向UV2136的转化.来自非甲基化宿主E.coli ET12567的pWHM3也无法实现转化,而源于E.coli DH5α的甲基化pWHM3.可以低频转化菌株UV2136,转化效率分别为4转化子·μg-1 pWHM3,经自身修饰的pWHM3可实现高效转化,达到104转化子·μg-1pWHM3.     

菌株Streptomyces S90抗菌物质的初步鉴定及抑菌作用机制研究

采用Doskochilova溶剂系统层析、pH纸层析和纸电泳测定表明:菌株StreptomycesS90发酵液中具有抑菌活性的物质为一种单组分碱性水溶性抗生素。采用大孔树脂吸附法提取得到了该抗菌物质的粗提物,研究其对烟草赤星病菌的作用机制表明,当抗菌物质浓度为1.6mg/mL时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达到82.06%和78.80%;随着各处理浓度的增加,抗菌物质使病菌菌丝细胞膜电导率和丙二醛含量变化均增加;抗菌物质对病菌菌丝细胞壁组成物质几丁质没有影响。     

烟草感染PVYN后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO关系研究

 本文采用常规摩擦接种和比色法研究了烟草感染PVY^N后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO的关系。试验结果表明:感病品种K326接种PVY^N后总酚和类黄酮含量升高,且接种处理与未接种对照间总酚和类黄酮含量的差别随症状表现的加重有递增趋势;就部位而言,与根部及叶部相比,坏死严重的叶脉中总酚和类黄酮含量增加幅度最大,其含量分别增加了149.23%和152.97%;其PPO活性在接种PVY^N后3d时出现第一个高峰,比对照高213.61%,随后降至最低,但仍比对照高130.77%,在接种PVY^N后15d,坏死症状表现严重时,又迅速升高。抗病品种VAM接种PVY^N后无异常症状,其总酚和类黄酮含量也升高,但升高幅度不大,不同部位总酚及类黄酮含量增加的幅度也均小于25%,其PPO活性在接种PVY^N后稍有升高,但基本保持一个水平。