白菜型油菜WRKY基因片段的克隆与表达分析

WRKY转录因子能广泛地参与植物的生物与非生物胁迫反应。为了研究WRKY转录因子在ABA诱导下的表达调控,首先利用同源克隆法在白菜型油菜中克隆WRKY基因和Actin基因片段, 用BLAST和DNAMAN软件对核酸及氨基酸序列进行分析;通过荧光定量PCR技术检测白菜型油菜WRKY基因在ABA处理条件下的相对表达趋势;然后利用相对定量PCR技术（real-time relative quantification PCR,以下简称RT-qPCR）检测WRKY基因在ABA(100 μM)诱导不同时段的差异表达。在白菜型油菜中克隆到一段中克隆到一段长度为680 bp的WRKY基因片段和一段长度为933 bp的β-actin基因片段。RT-qPCR实验结果表明,BcWRKY能被ABA诱导表达,且在诱导1 h后表达量最高。本实验文成功地克隆了白菜型油菜的WRKY转录因子基因和Actin基因片段,并证明了白菜型油菜WRKY基因的表达受ABA的影响。     

茄子品种基于WRKY转录因子的指纹图谱构建及遗传相似性分析

应用WRKY转录因子分子标记构建34个茄子品种的指纹图谱及进行遗传相似性分析,筛选出5对多态性高的引物进行PCR扩增,结果显示,扩增多态性带663条,每对引物检测到多态性条带84～181条,平均为132条。对所得到的34个茄子品种的指纹图谱进行组合和综合分析,可以将供试的34个茄子品种区分开来。表明利用WRKY转录因子分子标记技术可以用以鉴定茄子种质资源。按照UPGMA法进行聚类,从分子水平上将供试品种大体分为5个类群,第一类群又可分为2个亚类群,WRKY转录因子分子标记分类与传统的以果形或果皮颜色单一形态学性状为基础的分类没有直接的相关性。     

白菜型油菜中WRKY基因的克隆与表达(英文)

[目的]为研究WRKY转录因子在ABA诱导下的表达调控。[方法]首先利用同源克隆法在白菜型油菜中克隆WRKY基因和Actin基因片段,用BLAST和DNAMAN软件对核酸及氨基酸序列进行分析;通过荧光定量PCR技术检测白菜型油菜WRKY基因在ABA处理条件下的相对表达趋势;然后利用相对定量PCR技术(real-timerelative quantificationPCR,以下简称RT-qPCR)检测WRKY基因在ABA(100μmol/L)诱导不同时段的差异表达。[结果]在白菜型油菜中克隆到一段长度为680bp的WRKY基因片段和一段长度为933bp的β-actin基因片段。RT-qPCR实验结果表明,BcWRKY能被ABA诱导表达,且在诱导1h后表达量最高。[结论]成功地克隆了白菜型油菜的WRKY转录因子基因和Actin基因片段,并证明了白菜型油菜WRKY基因的表达受ABA的影响。     

番茄杂交及回交后代耐冷性分析

以番茄耐冷品系与冷敏感品系为亲本配制成杂种F1代、F2代、回交一代(BC1)及回交二代(BC2),以低温胁迫处理后的胚根生长抑制度和组织伤害率为指标对杂交及回交后代种子发芽期和植株开花期的耐冷性进行了鉴定。结果表明经耐冷性选择的F2与未经选择的F2相比耐冷性明显提高。在BC1群体中分别选择耐冷株和冷敏感株回交得到的BC2的耐冷性存在显著差异。     

番茄WRKY转录因子基因片段的克隆及序列分析

【研究目的】本研究以番茄苗为实验材料,克隆出番茄WRKY转录因子的一个基因片段并对其核酸序列进行分析。【方法】根据本课题组已经克隆出的番茄特异的WRKY基因片段和番茄EST序列设计特异引物,利用RT-PCR技术获得番茄WRKY转录因子的一个基因片段并连接到pMD19-T载体中,转化DH5α,,筛选阳性克隆,用双酶切分析法对其进行鉴定并进一步对核酸序列进行测序分析。【结果】结果表明,克隆获得的WRKY转录因子基因片段约为680bp,用GenBank中的Blastn程序分析表明,其与CaWRKY（AY789641.1）、WIZZ（wizz mRNA）（AB028022.1）的相似性分别为86％和84％。【结论】WRKY转录因子在番茄中受JA诱导,这为克隆番茄WRKY基因全长,进而为番茄抗病育种奠定基础。     

IRAP分子标记在茄子种质资源亲缘关系分析中的应用

参考马铃薯和烟草的反转录转座子LTRs保守区域设计引物,对34份茄子材料进行PCR扩增,得到了多态性丰富的指纹图谱。聚类分析将34份茄子材料分为三大类群,表明IRAP分子标记适合于茄子种质资源的亲缘关系分析。     

中国南瓜基因型及种瓜成熟度与瓜内种子发芽的关系

以基因型不同的３个中国南瓜农家品种为供试材料进行自交和相互杂交,在授粉后不同时间采收种瓜。不同成熟度的种瓜经４５ｄ贮藏后观察单瓜籽粒数和瓜内发芽籽粒数,计算瓜内种子发芽率。结果表明瓜内种子发芽率随种瓜成熟度的增加而提高,不同基因型品种的瓜内种耶发芽率存在明显差异。     

TomloxD基因在番茄植株生长发育和果实品质中的功能

[目的]探究TomloxD在番茄植株生长发育和果实品质形成中的功能.[方法]本试验以番茄野生型株系CM、TomloxD过表达株系loxD-oe和TomloxD突变体株系spr8为试材,观察植株的生长情况,分析果实发育过程中品质的变化.[结果]结果表明,TomloxD过表达株系的株高、茎粗和叶片数持续均匀增长,最终株高和叶片数与CM相似,茎粗低于CM;spr8植株的整体生长状态要弱于CM植株.相较于野生型,过表达显著提高了果实的可溶性总糖含量;spr8植株的果实中,维生素C、可溶性总糖、可滴定酸、可溶性蛋白和可溶性固形物的含量均较野生型CM显著增加,平均单果重降低.结果说明,TomloxD基因在番茄植株的生长发育和果实品质形成中有重要的作用.     

南瓜RAPD分析体系的优化*

 为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性，对MgCl₂浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜 RAPD反应体系为25 μL反应液中：10×反应 buffer（100 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L KCl, 80 mmol/L (NH₄)₂SO₄ ,pH 9.0,NP-40）2.5 μL, 3 mmol/L MgCl₂，0.2 mmol/L dNTPs，Taq酶l.0 U,引物15 ng/μL ，DNA模板10 ng/μL 。本研究最终确立的PCR反应程序为: 94 ℃预变性5 min,然后按94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s，进行40个循环,最后72 ℃延伸5 min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。     

茄子抗冷细胞变异体的RAPD分析及自交一代株系的抗冷性鉴定

以茄子品系E－9903花药低温胁迫培养获得的抗冷细菌变异体为试材，用SDS方法从茄子幼嫩叶片提取DNA，选用40个长度为10个碱基的寡聚核苷酸（OPK01－OPK20，OPJ01－OPJ20）作为RAPD引物进行PCR扩增反应，并测定抗冷细胞变异体自交一代株系的冷害指数。结果表明：以OPK12为PCR反应引物时RAPD扩增谱带在抗冷性植株与同品系的对照株之间存在多态性差异，抗冷细胞变异体自交一代株系的冷害指数显著低于同品系的对照。