黄瓜遗传转化体系优化及表皮毛基因Gl的转化

选用黄瓜无毛突变体gl的子叶节为材料,对芽诱导阶段及根诱导阶段潮霉素的浓度进行筛选,分别确定2和3mg/L为其最适浓度;以pCAMBIA2301-gusA为载体,农杆菌GV3101介导,筛选出Silwet L-77(表面活性剂)的最佳体积分数为0.04%,侵染液浓度以原菌液(OD600=0.6)等倍稀释最佳;另外,对快速提取黄瓜DNA方法进行了优化。结果表明,添加500μL 0.5mol/L NaOH与200μL 100mmol/L Tris-HCl的组合最好。用优化的体系对表皮毛基因Gl进行遗传转化,获得7株阳性苗,为研究Gl基因的调控机制奠定了基础。     

湖北省水牛巴贝斯虫病调查研究(Ⅵ)——镰形扇头蜱体内牛巴贝斯虫虫样体的观察

人工感染牛巴贝斯虫的去脾脏水牛犊2头,当血液中出现巴贝斯虫体,染虫率达0.2%时,于一耳内放入饥饿成蜱,使之吸血。雌蜱吸饱血离休后,收集并分别放在28℃相27℃的恒温箱中,每隔24小时取蜱剪肢,涂片检查。发现置28℃的蜱在72小时,其血淋巴中出现虫样体,96—120小时,虫样体出现最多,144小时仍可见到。成熟的虫样体大小为12.0—15.0×1.8—3.5μm;置37℃的蜱其血淋巴中始终未能查到虫样体。     

利用套式PCR检测牛羊乏质体

为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较.结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段.套式PCR检测乏质体DNA量为0.2 pg(相当于6个感染红细胞).检测l 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份.首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国.同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体.上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5％(835/848).检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定.     

湖北省水牛巴贝斯虫病调查研究 Ⅴ.镰形扇头蜱经卵传递牛巴贝斯虫的证实

1986年从病牛身上摘下饱血雌蜱,经实验室饲养,孵化为第二代成蜱,人工越冬。于1987年将上述蜱100只接种于已去脾23天的一岁龄健康水牛,以后每天从该牛身上取蜱查其唾液腺。结果在吸血期间,始终查到梨形虫体,其平均大小为1.3×0.68微米。接种后第4天,牛血中开始出现巴贝斯虫,至第19天,红细胞感染率高达9.6％,单梨形虫体大小为0.84～2.64×0.42～1.22微米,双梨形虫体大小为0.64～1.64×0.37～0.97微米,以后逐渐下阵。该牛出现体温升高)41.6℃)、严重贫血(血红蛋白量2克,红细胞压积14％,红细胞总数177万/毫米~3)、黄疸及精神萎顿等症状。上述结果表明,该牛感染了巴贝斯虫病,由此证实镰形扇头蜱是经卵传递巴贝斯虫,其感染阶段是成蜱。     

寄生于中国水牛Bubalus Vbubalis的巴贝斯虫一新种(梨形虫目:巴贝斯科)

经作者等深入研究，发现湖北省水牛巴贝斯虫病病原不是牛巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｂｏｖｉｓ与双芽巴贝斯虫Ｂ．ｂｉｇｅｍｉｎａ，而是一新种——东方巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓｓｐ．ｎｏｖ．。病牛红细胞中的虫体呈梨形（单梨形多于双梨形）、椭圆形、指环形、边虫形及杆状。以梨形虫体居多，病的初期其长度均小于红细胞半径，其平均大小为２．２×１．３μｍ，双梨形虫体尖端相连多排列成钝角或一字形，位于红细胞偏中央处。病的后期（出现虫血症后５～６ｄ）及体外培养７２ｈ，有少部份（１～２％）虫体直径大于红细胞半径。新种的传播者为镰形扇头蜱Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓ经卵传递（由第二代成蜱传给健康牛）。在成蜱的血淋巴中的虫样体（裂殖子）呈圆锥状、一端钝圆、尾部直而尖，不形成钩。新种对黄牛不能感染致病，只能使水牛致病。以１９９培养基加黄牛血清进行体外培养（微气静相培养技术）不能生长繁殖     

猪疥螨病防治进展

猪疥螨寄生于猪的皮肤内．引起猪剧烈瘙痒．主要是通过猪与猪直接接触而传播，根据临床症状和在病料中检查到病原——疥螨进行诊断，对于规模化猪场的猪最好采用在饲料中添加《虫螨净》药物根除此病。     

中药免疫增强剂(维康)对母猪免疫应答及生产性能的影响

挑选80头胎次相同、配种日期接近的湖北白猪母猪,进行饲料中添加中药免疫增强剂(维康)的对比试验.验证了维康具有增强免疫应答、提高母猪猪瘟疫苗免疫抗体水平的显著功效(p<0_05);还能显著提高母猪妊娠期增重( p相似文献   

葡萄糖基氟虫腈处理下蓖麻内参基因的稳定性分析

【目的】筛选葡萄糖基氟虫腈（GTF）及溶剂二甲基亚砜（DMSO）处理下蓖麻Ricinus communis稳定的内参基因,为研究GTF的韧皮部装载机制提供参考。【方法】选取Actin,ARC,ef1a,SamDC,TUA6为内参基因,通过实时荧光定量PCR分析基因表达量并利用geNorm,NormFinder,BestKeeper,Delta CT软件及RefFinder在线分析工具综合比较不同时间和不同浓度的GTF与DMSO处理后,5个候选内参基因在蓖麻幼苗子叶中表达的稳定性。【结果】各软件分析得出的内参基因稳定性排名依次为geNorm：Actin=ef1a>SamDC>ARC>TUA6;NormFinder：SamDC>ARC>Actin>ef1a>TUA6;BestKeeper：Actin>ef1a>SamDC>ARC>TUA6;Delta CT：SamDC>Actin>ARC>ef1a>TUA6; RefFinder：Actin>SamDC>ef1a>ARC>TUA6,而单独分析DMSO处理时,稳定性排名则为：ef1a>SamDC>Actin>TUA6>ARC。【结论】综合分析GTF和DMSO处理,Actin的表达最稳定;在DMSO处理下,则ef1a最为稳定。     

肉牛传染性牛支原体肺炎流行的初步诊断

自2008年以来,湖北省多个地区肉牛养殖场(户)发生以肺肉变及坏死为特征的呼吸道传染病,病牛咳嗽,消瘦,有的继发关节炎.常规抗生素治疗效果差,犊牛及体弱牛病死率高.为此,本研究组采集病牛样本(血液和肺等内脏器官),对该病开展了流行病学与病原学研究.实验室检测项目包括:1)支原体培养鉴定,PCR扩增与基因测序鉴定;2)细菌分离鉴定;3)牛结核诊断,包括牛结核菌素皮内变态反应、牛结核菌抗酸染色、牛结核菌培养鉴定,与牛血清结核抗体ELISA检测;4)泰勒虫血涂片检测与PCR检测等.