利用差异显示技术克隆辣椒抗疫病相关基因

用辣椒疫霉菌对8叶期的辣椒品种茄门和93-100-17-1-0进行诱导处理,提取接种前后的总RNA,利用mRNA差异显示技术,结合植物抗病基因保守结构域,将DDRT-PCR的一端引物为oligo(dT)15A／G／C,另一端为来源于不同抗病基因同源序列的简并引物B1／C1／D1,其扩增产物在6％聚丙烯酰胺凝胶上得到两个差异表达的带,回收差异片段并克隆到T-载体上测序,经BLAST检索,发现为两个新的序列,GenBank登录号为AY497910,AY497911。     

cDNA文库与RACE方法结合克隆马铃薯DnaJ -like基因全长cDNA

 以青枯病菌小种3号(生化变种2) PO41诱导24 h和48 h的马铃薯抗青枯病基因型ED13叶片为材料, 应用SMART技术构建了一个富集青枯病抗性相关基因的cDNA文库。继而利用RACE技术与该cDNA文库相结合克隆了一个马铃薯分子伴侣基因的全长cDNA。该cDNA长735 bp, 5′端有25 bp的非翻译区, 3′端具有完整的polyA 尾, 包含一个编码177 个氨基酸的完整开放阅读框架( GenBank 登录号:DQ885360) 。该分子伴侣基因与拟南芥DnaJ-like 20的部分核苷酸序列具有84%的一致性, 与其编码的氨基酸序列具有59%的一致性, 暂命名为StDnaJ。目前在马铃薯中尚未发现与之同源的已知基因。半定量RTPCR结果表明, 该基因同时受青枯病菌的诱导和茉莉酸的调节, 可能在青枯病菌和茉莉酸胁迫下具有促使胁迫损害细胞恢复活性的功能。     

几个抗疫病性不同的辣椒材料抗病基因同源序列的分离与比较

 根据已克隆抗病基因的保守序列设计简并引物, 对9 个不同抗、感疫病的辣椒种质材料基因组DNA 进行抗病基因同源性序列的特异PCR 扩增, 经序列测定和同源性分析发现14 个抗病基因同源性序列(RGAs) 与辣椒抗疫病作用相关, 其中B 引物扩增的8 个RGAs 与烟草抗花叶病基因N 、拟南芥抗丁香假单菌基因RPS2 和亚麻抗锈病基因L6 的同源性较高, 属于广谱(细菌、病毒、真菌) 抗病基因同源序列; C 引物扩增的6 个RGAs 与番茄抗叶霉病基因Cf2 和Cf9 有较高的同源性, 与抗疫病作用密切相关。研究还发现, 高感疫病的辣椒基因组中也存在抗疫病相关RGAs , 这与已报道的辣椒抗疫病微效QTLs 位点则来于感病亲本基因组的研究结论一致。     

致病疫霉对苯酰胺类杀菌剂抗性研究概述

致病疫霉 (Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ)引起的马铃薯和番茄晚疫病是一种世界性的重要病害 ,该病造成的损失及用于防治的费用使晚疫病成为世界上耗资最大的病害之一〔1〕。 1995年 ,美国哥伦比亚盆地和俄勒冈州 ,因马铃薯晚疫病造成的损失及用于防治的费用高达 30 0 0万美元 ;1998年 ,通过改进栽培管理 ,其经济损失和防治费用有所降低 ,但仍达 2 2 30万美元 ,其中杀菌剂费用占去 1980万美元〔2〕。由此可见杀菌剂在晚疫病的防治中依然起着不可替代的作用。苯酰胺类杀菌剂 (ＰＡＦｓ)主要包括甲霜灵 (瑞毒霉 )、恶霜灵 (杀毒…     

黄瓜根结RDR酶基因的分离与表达分析

 基于黄瓜（Cucumis sativus L.）自交系9930全基因组序列,采用RT-PCR的方法,分离出根结形成过程中表达的RDR基因,共获得了5个CsRDR基因：CsRDR1a、CsRDR1b、CsRDR1c、CsRDR2和CsRDR6（HQ738485 ~ HQ738489）。qPCR定量分析表明,5个基因在接种根结线虫后的不同时期表达量都有不同程度的增加。CsRDR1a、CsRDR1b、CsRDR2和CsRDR6在接种线虫早期（6 h）相对表达量明显增加;而CsRDR1c在接种36 h时相对表达量达到最高,从而表明CsRDR基因与黄瓜根结的发育相关。     

刺角瓜营养成分及抗氧化活性的分析与评价

利用高效液相色谱仪、紫外分光光度计及全自动氨基酸分析仪等对甜瓜属新种质刺角瓜的营养成分含量进行了测定,并对其抗氧化活性进行了评价。结果表明:刺角瓜富含VC、多酚、多糖及氨基酸等营养成分,其中VC含量为125mg·kg~(-1),多酚含量为314 mg·kg~(-1),可溶性总糖、可溶性多糖含量分别为2.7%、0.5%,游离总氨基酸、必需氨基酸含量分别为9 908、3 120 mg·kg~(-1),水分及灰分分别占鲜质量的95.0%、0.6%;刺角瓜具有一定的抗氧化活性,其对DPPH半清除率IC50为0.060 g·m L~(-1),对羟自由基半清除率IC50为0.036 g·m L~(-1)。     

南方根结线虫Me3毒性与非毒性群体对寄主趋向性和侵染能力的比较

 探究南方根结线虫Me3毒性与非毒性群体对抗感寄主趋向性和侵染能力,为揭示毒性群体致病机理及防治根结线虫策略提供理论依据。使用以水琼脂为介质的研究方法,通过对比分析辣椒抗病品种HDA149和感病品种茄门根尖附近聚集的2龄幼虫(J2)数量,来揭示南方根结线虫对抗感辣椒品种根尖的趋向性效应,并利用实时荧光定量 PCR 检测侵入到辣椒根系的毒性与非毒性线虫数量,对其侵染能力进行比较。J2 趋向性试验结果显示,在相同的时间点,HDA149 和茄门辣椒根尖处附近聚集的毒性群体 J2 数量总是显著多于非毒性群体的 J2数量;J2 对抗感辣椒的选择性结果表明,不论是毒性群体还是非毒性群体的 J2,在相同的时间点,茄门根尖附近聚集的线虫数量显著多于HDA149根尖附近的线虫数量;荧光定量 PCR 检测线虫侵染结果显示,毒性群体 J2侵入到辣椒根系的数量相对非毒性群体的 J2 更多。总之,相比南方根结线虫Me3非毒性群体,毒性群体的 J2 对寄主根系有较强的趋向性,并且侵染效率更高;相比于抗性寄主,Me3毒性群体和非毒性群体的 J2 对感病寄主有更强的选择性。     

臭氧对蔬菜病害的防治效果

臭氧具有杀菌谱广、杀菌速度快、使用简便、无二次污染的特点，符合无公害蔬菜生产的要求。为此笔者研究了臭氧对温室黄瓜霜霉病、白粉病和辣椒疫霉病的防治效果，并对使用臭氧在蔬菜上可能产生的危害进行了测定，以期为臭氧防治保护地蔬菜病害提供参考。     

设施蔬菜苗期病害病原鉴定及化学药剂筛选

采用普查和定时系统调查的方法对十字花科(大白菜、青花菜、甘蓝、萝卜)、茄科(番茄、辣椒、茄子)、葫芦科(黄瓜、冬瓜、南瓜)等10种主要设施蔬菜苗期病害种类进行了调查,在此基础上采用形态学和分子生物学方法对病原进行鉴定,并对疫病、猝倒病、枯萎病、立枯病等4种主要苗期病害进行化学防治药剂筛选。结果表明:从10种蔬菜上采集的864份苗期病害病样中共分离出736株菌株,共计16个种,其中致病病原有13种,在各类蔬菜上可分别引起8~9种苗期病害,以传统病害猝倒病和立枯病为主,其次为根腐病、疫病、灰霉病;筛选出对立枯病防效显著的杀菌剂32.5%苯甲·嘧菌酯悬浮剂和2.5%咯菌腈悬浮剂,对防治枯萎病有效的药剂70%甲基托布津可湿性粉剂、36%甲基硫菌灵悬浮剂和3%甲霜·噁霉灵水剂,对疫病防效显著的药剂68%精甲霜·锰锌水分散粒剂、25%甲霜·霜霉威可湿性粉剂、72%霜脲·锰锌可湿性粉剂、50%烯酰吗啉水分散粒剂、50%氟啶胺悬浮剂、64%噁霜·锰锌可湿性粉剂、10%氰霜唑悬浮剂,以及防治猝倒病有效的药剂50%氟啶胺悬浮剂、64%噁霜·锰锌可湿性粉剂、10%氰霜唑悬浮剂、72%霜脲·锰锌可湿性粉剂、72.2%霜霉威盐酸盐水剂、50%烯酰吗啉水分散粒剂、68%精甲霜·锰锌水分散粒剂和60%唑醚·代森联水分散粒剂等。     

辣椒疫霉对甲霜灵和霜脲氰抗药性遗传的研究

为了探寻综合治理辣椒疫霉抗药性的有效途径,采用Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－亚硝基胍诱变方法,从辣椒游动孢子群体中筛选出２９株抗甲霜灵、６株抗霜脲氰的突变菌株,并证明突变菌株的抗药性经无性和有性生殖均可稳定遗传。