猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的构建及其生物学特性的测定

为筛选猪痘病毒（SWPV）复制非必需区并测定其缺失株的生物学特性,本研究根据同源重组原理分别针对SWPV的TK（ORF063）、ORF121和ORF143基因设计引物。应用重叠延伸PCR技术拼接同源重组左右臂及EGFP筛选标记表达盒,将拼接片段分别转染到感染SWPV的PK15细胞。利用荧光显微镜观察标记含EGFP的单个蚀斑,筛选获取重组毒株。应用PCR及Western blotting对重组毒株进行鉴定。分别测定各毒株感染PK15细胞的蚀斑大小和皮下接种保育猪致病性。PCR结果表明,目的基因成功整合到相应位点,成功获得重组毒株rSWPV-TK、rSWPV-121和rSWPV-143;Western blotting结果显示,连续传代的重组毒株在PK15细胞上稳定表达外源蛋白。重组毒株在PK15细胞上形成的痘斑均小于亲本毒株,其中ORF121缺失株差异极显著（P<0.01）。各毒株均可导致保育猪痘斑形成,其中ORF121缺失株引起病变时间短,产生痘斑小,毒力较亲本下降。综上所述,本研究筛选到2个SWPV基因组中可供外源蛋白插入的复制非必需区ORF121和ORF143,为构建SWPV基因工程载体奠定了基础。     

甘草渣中总黄酮的提取工艺研究

本文研究了甘草渣中总黄酮的提取工艺,用正交分析法,找出了热回流法最佳的提取工艺条件,并经过放大试验,得到很好的效果。     

蒜瓣浸出液抗柔嫩艾美耳球虫效果研究

为了考察大蒜浸出液在抗鸡球虫临床上的应用。试验设Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,第Ⅰ组:卵囊分别投入50%、20%、10%的蒜瓣浸出液、2.5%重铬酸钾液中,恒温培养24、48、72 h后计算卵囊孢子化率。第Ⅱ、Ⅲ组:分别以50%蒜瓣浸出液抑杀的未孢子化、孢子化卵囊,恒温培养48 h洗净感染1×105个/只卵囊;第Ⅳ组:感染1×105个/只孢子化卵囊,以20%的蒜瓣浸出液作为驱虫中药替代饮水;第Ⅴ组:感染1×105个/只孢子化卵囊后不给药;第Ⅵ组:不感染不给药。结果表明,50%、20%浓度蒜瓣浸出液于24、48、72 h后卵囊孢子化率与对照组差异均显著(P<0.05);以第Ⅱ组雏鸡的平均增重及相对增重率最高,组间差异不显著,与感染对照组(Ⅴ)差异显著;第Ⅲ组平均OPG数仅次于感染对照组(Ⅴ),远高于Ⅱ、Ⅳ组差异显著;第Ⅱ、Ⅳ组卵囊比值在25%~50%区间,卵囊值均为10;第Ⅲ组卵囊比值在75%~100%区间,卵囊值为40;第Ⅲ、Ⅴ组部分鸡只出现血便;第Ⅲ组病变值(11.7)仅次于第Ⅴ组(23.3),第Ⅲ、Ⅳ组间差异显著;在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3组中,ACI以第Ⅱ组(173.95)为最高,第Ⅳ组次之,2组均判为中等效果。第Ⅲ组ACI为117.55,小于120判为无效。蒜瓣浸出液对体外抑杀未孢子化卵囊感染、体内阻断球虫发育效果较好。     

甘草制剂中还原糖及总糖含量的测定方法探讨

采用蒽酮法测定了甘草浸膏中还原糖及总糖的含量，通过实验确定了测定的最佳条件，方法准确度高，重现性好，操作简便，快速。     

广东粮食价格波动影响因素的实证分析

采用2000年1月至2011年10月的月度数据,运用VAR模型对外部冲击背景下广东省粮食价格波动影响因素进行实证分析,结果表明:国际粮食价格对广东粮食价格的传递效应明显,且影响度高达41.17％;经济增长因素排在国际价格因素之后,贡献度达到13.55％;人民币实际有效汇率的影响逐步增大,在第12期贡献度达到3.77％;农业生产资料价格、国际生物能源发展计划和国内货币供应量M2对广东粮食价格波动的影响度不大.根据研究结论,针对发达地区的特点从短期、中期和长期提出了稳定广东粮食价格的相关对策建议.     

早春菜用玉米-夏大白菜秧-秋菜用玉米高效种植模式

早春菜用玉米在湖北十堰地区示范推广了10多年,具有较高的经济效益,广为城市周边菜区菜农种植。近年来,为使种植效益进一步提升,通过生产实践发现,采用早春菜用玉米、夏季短期大白菜秧、秋季菜用玉米种植模式,抓两头,舍中间,产量效益非常可观,取得了很好的经济效益和社会效益,该模式每667m^2平均收获早春菜用玉米1400kg,产值4200元;夏大白秧菜500kg,产值1000元;秋季菜用玉米1300kg,产值3900元。     

餐厨垃圾干发酵滚动式质热交换反应器设计与性能试验

为解决干式厌氧发酵传质传热效果差,易造成微生物生长代谢不均匀等问题,该研究设计一款反应器,利用罐体滚动代替搅拌,使底物自由混合,大幅度解决了干式发酵的阻碍。通过中温批次发酵验证反应器性能,并与搅拌式反应器进行对比,结果表明:滚动式反应器发酵过程中甲烷体积分数最高达74.89%;发酵前期挥发性脂肪酸有一定程度的积累,但在中期被迅速消耗,且未对产气和pH值造成明显影响;底物挥发性固体去除率高达68.74%,发酵体系稳定。微生物群落结构随着发酵进行,不同时期呈现动态变化,厚壁菌门(Firmicutes)是发酵体系中绝对的优势细菌门,最主要的古菌门是广古菌门(Euryarchaeota)。混合营养型的甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)伴随着发酵的推进成长为绝对优势甲烷菌属。     

表达猪圆环2型的多拷贝P28-Cap重组猪痘病毒的构建及表达量分析

为探究猪痘病毒作为载体表达猪圆环病毒2型（PCV2）-Cap蛋白,插入外源基因P28-ORF2的拷贝数与PCV2-Cap蛋白表达量的关系。本试验以猪痘病毒为载体,通过双酶切连接及无缝克隆方法构建重组质粒,并纯化到了8株含不同拷贝数（1~8拷贝） P28-ORF2的重组猪痘病毒,基于荧光斑大小、电镜观察病毒粒子及Western blotting结果进行判断。纯化到的8株重组病毒的荧光斑直径为317.41~384.96 μm,大小无明显差异。重组猪痘病毒粒子形态与亲本病毒一致。Western blotting结果为插入1拷贝P28-ORF2的重组蛋白表达量最低;随着P28-ORF2拷贝数的增加,PCV2-Cap表达量也随之增加;至插入4拷贝P28-ORF2时,PCV2-Cap表达量达到峰值;随后减少。8株重组猪痘病毒荧光斑大小无明显差异,表明猪痘病毒基因组中插入不同拷贝数P28-ORF2对重组病毒在PK15细胞内的增殖无影响。重组猪痘病毒粒子的形态未发生变化说明多拷贝外源基因的插入并未对猪痘病毒的结构造成影响。本研究结果表明,猪痘病毒为载体表达外源蛋白时,单启动子启动多拷贝外源序列能明显提高外源蛋白的表达量,插入4拷贝的外源序列为较合适的拷贝数。     

高平市桑拟干枯病的发生与防控技术

对高平市部分乡镇桑园大面积发生的桑拟干枯病进行了实地调查,认为春季低温冻害天气与秋季过度采叶是引发该病的主要因素,并提出了相应的综合防治技术措施。