番茄乙烯信号转导相关基因EIN3（Le-EIL）的克隆和表达

摘要：根据拟南芥?穴Arabidopsis thaliana ?雪、烟草?穴Nicotiana tabacum ?雪EIN3基因保守区序列设计简并引物，采用RT-PCR扩增从番茄(Lycopersicon esculentum )果实中得到一个486 bp的同源片段。以此片段作为探针，从番茄果实cDNA文库中分离到一个拟南芥EIN3的同源基因的cDNA克隆,命名为Le-EIL。该克隆含有一个1 845 bp的开放阅读框，编码615个氨基酸。经同源分析，它与烟草TEIL基因的同源性为79%，与拟南芥EIN3、EIL1、EIL2和EIL3的同源性分别为59%、56%、52%、46%。Le-EIL基因表达与番茄果实的成熟及乙烯生成情况具有较强的相关性。在普通番茄果实的不同成熟时期Le-EIL基因都有表达，并且随着成熟度的增加基因表达有明显的增强，在转色期和粉红期Le-EIL基因的表达最强, 在全红期后减弱。在转反义ACS基因的转基因番茄果实中，只有开花后60 d的果实中Le-EIL基因有微弱的表达，在其它成熟时期均没有表达。     

桃果实中ACC合酶基因克隆及基因沉默载体构建

植物中乙烯是一种具有促进果实成熟和衰老的内源激素.ACC合酶是植物乙烯生物合成途径中一个重要的限速酶,沉默ACC合酶基因的表达能减少植物性内源性乙烯的产生.以中华寿桃为研究材料.采用RT-PCR技术,克隆获得ACC合酶基因.将该基因酶切回收后连接到pTRV-RNA2载体上,转化DH5a,筛选阳性克隆,进行酶切鉴定.测序后与已知序列进行同源性比较,其同源性达到99%,表明将ACC合酶基因成功连接到pTRV-RNA2基因沉默载体上.     

案例教学法在食品安全课程教学中的应用

为满足新食品安全背景下的高素质人才需求,食品安全课程更应该注重培养学生自主分析、解读食品安全事件成因并给出应对方案的能力。传统的"满堂灌"式教学模式下学生的主观能动性得不到释放,培养收效甚微。本文尝试引入案例教学法,引导学生独立分析和解决实际问题,同时对改革的可行性、科学性、重要性进行探讨,并在如何实现无缝嵌合、选择案例、实践新型教学模式几个层面进行了理论探索,以期为高素质食品人才的培养提供理论基础。     

番茄果实软化过程中钙处理对多聚半乳糖醛酸酶、脂氧合酶、伸展蛋白的影响

为探明番茄果实的一些生理特性,研究了4% CaCl2 溶液真空渗透处理的番茄果实,在软化过程中多聚半乳糖醛酸酶(PG)、脂氧合酶(LOX)、伸展蛋白(EXP)的变化。结果表明:在处理初期Ca2+ 对LOX活性及LeLOXB基因的表达有显著的抑制作用;在处理的后期,Ca2+ 对PG活性及PG、LeEXP1 基因表达有明显的抑制作用。并就Ca2+对PG、LOX、EXP及果实软化机理的影响进行了讨论。     

1-MCP处理对不同成熟度番茄果实Le-ETR4表达的影响

 以樱桃番茄(Lycopersicon esculentum ) 品种‘卡罗’果实为材料, 研究了1-MCP处理对不同成熟度果实采后20℃贮藏过程中乙烯受体Le2ETR4表达和乙烯释放水平的影响。结果表明: 1-MCP处理可以抑制跃变上升期(破色期) 番茄果实乙烯释放及Le2ETR4表达; 对跃变前期(绿熟) 和跃变高峰期(粉红期) 果实Le2ETR4表达也有抑制作用, 但对乙烯释放无明显影响; 对跃变下降期(红熟期) 果实Le2ETR4表达不仅无明显影响, 反而促进了乙烯释放。     

不同熟期桃果实超微结构及相关代谢的研究

实验研究了不同熟期的大久保桃果肉超微结构变化、果实成熟过程中的乙烯释放规律、Ｌｏｘ酶活性、ＰＧ酶活性变化规律以及相关代谢。结果表明:(１)桃果实超微结构的成熟衰老变化先于乙烯高峰的出现和ＰＧ酶活性的快速上升,但乙烯、ＰＧ仍然是影响超微结构衰老变化的重要因素。(２)Ｌｏｘ可能是引起超微结构前期变化的因素。     

食物源SARS病毒的巢式PCR检测研究

本研究利用巢式RT-PCR技术,针对SARS病毒RNA序列保守区域设计并筛选出实用、可靠、灵敏度高、忠实性好的引物,对食品中的所有RNA进行扩增,并对扩增产物进行分析检测,从而确定食品中是否被SARS病毒污染。通过研究发现建立的巢式RT-PCR检测技术方法可以检测到10-6μg／μL的RNA量水平,并且,通过限制性酶切分析,表明RT-PCR扩增产物具有很好的忠实性;在研究中还发现,用普通RT-PCR对食品进行检测时,会有非特异扩增条带的产生,而用RT-nested PCR方法可以消除这些非特异扩增条带的产生,从而消除由于非特异扩增条带干扰造成的假阴性结果。通过对食品样品的检测没有发现这些食品受到SARS病毒的污染。     

1-MCP处理和贮藏温度对黑宝石李果肉褐变的影

为了探明李果实褐变机理并抑制褐变,研究了1-MCP处理和贮藏温度对黑宝石李果肉冷害褐变、机械伤褐变、多酚氧化酶（PPO）活性、总酚含量和乙烯释放的影响。结果表明,黑宝石李果实在（0±0.5）℃和（3±0.5）℃条件下分别贮藏75d和60d会发生果心的冷害褐变,在（7±0.5）℃下不会发生冷害褐变,但贮藏期短;机械伤诱导李果实在冷藏2d后发生近果皮处果肉的褐变症状。5μL/L 1-MCP处理李果实12h后,在（0±0.5）℃贮藏时可有效抑制冷害褐变和机械伤褐变,但在（3±0.5）℃和（7±0.5）℃时促进果肉褐变。PPO活性和总酚含量的变化与李果实褐变相关,但不是褐变的诱发原因。     

检测及鉴定Roundup Ready转基因大豆寡核苷酸芯片的制备

通过对Roundup Ready转基因大豆（简称RRS）的基因盒结构分析,筛选了包含筛选基因、种属相关基因、目的基因、交联结构基因、特异结构基因、内对照基因、其它阴性控制基因和阳性参考目的基因的特异探针,制备了检测及鉴定Roundup Ready转基因大豆的寡核苷酸芯片。实验表明,该芯片探针特异性好,可在一张芯片上完成对Roundup Ready转基因大豆结构的鉴定;内对照基因灵敏度高,检测极限为0．1ng（DNA）,从而消除假阴性概率;同常用的凝胶电泳检测方法相比,芯片杂交方法灵敏度（RRS为0．5％）优于凝胶电泳检测（RRS为1％）。     

植物多聚半乳糖醛酸酶研究进展

综述了植物多聚半乳糖醛酸酶(PG)的种类、作用方式、作用位点、基因表达和调控模式、功能的多样性以及与其它代谢过程的关系。并讨论了PG与乙烯的关系,以及PG在植物病害发生和逆境反应中的作用。