成年贵州小型猪脾脏的组织形态学观察及免疫组化研究

为了给人类免疫相关疾病模型的建立提供参考,试验分别取24头贵州小型猪脾脏组织进行组织形态观察,用免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果表明:12头雌性小型猪脾脏指数为18.91±1.59,12头雄性小型猪脾脏指数为17.26±2.44,无显著差异(P>0.05)。CD3+、CD4+、CD8+细胞主要分布在动脉周围淋巴鞘,CD20+细胞主要分布在脾小体,12头雌性小型猪CD3+、CD4+、CD8+、CD20+细胞比例(46.67±6.56,24.25±5.04,25.33±4.52,52.83±6.60)与雄性小型猪(43.17±7.58,23.33±3.58,23.58±5.91,54.42±9.27)比较无显著差异(P>0.05),CD4+/CD8+比值在0.7～1.5之间波动;雌性小型猪和雄性小型猪脾脏中CD20+细胞比例均较CD3+细胞多,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。     

抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。     

枯草杆菌胞外多糖的发酵和提取优化

通过分析MnSO4、CaCl2、接种量和pH值对枯草杆菌B1⑥菌株胞外多糖发酵的影响,获得优化发酵条件:葡萄糖2%,蛋白胨2%,MgSO40.05%,Na2HPO40.2%,NaH2PO40.1%,CaCl20.1%,MnSO40.1%,接种量10%,pH值7.0。枯草杆菌细胞多糖的最佳提取条件为浓缩温度40℃,浓缩比1.0∶1.5,醇沉终浓度70%,其影响顺序为:浓缩温度>醇沉终浓度>浓缩比。     

蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析

为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95%,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927450)的同源性为92%。说明ALAg基因是线虫特有的抗原基因。     

抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选

用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。     

检测犬恶丝虫病免疫层析试纸条的研制

以胶体金标SPA和犬恶丝虫抗原蛋白制备免疫层析试纸条,对300份犬血清进行检测,阳性检出率高达5.0%,同时用虫检法检测犬恶丝虫感染率,阳性检出率为4.0%。结果提示免疫层析试纸条具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬恶丝虫病的快速检测。     

枯草芽孢杆菌B1⑥菌株胞外多糖的提纯和初步分析

以枯草芽孢杆菌B1⑥菌株为材料,在前期优化发酵条件和胞外多糖提取的基础上,经过DEAE-52柱层析,分离出两个胞外多糖成分,对其中含量较高的胞外多糖EPSI进行单糖组分分析。EPSI组分纸层析和气相色谱分析结果显示,EPSI不具有Glu、Gal、Man、Xyl、Rha、Sor和Fuc 7种单糖成分,含有少量Ara,成分较简单。这个研究结果可为枯草芽孢杆菌胞外多糖的功能研究提供参考。     

肠菌群对吴茱萸体外代谢转化的作用

为研究贵州道地药材吴茱萸提取液经肠菌群转化前后其有效成分吴茱萸碱含量的变化和抑菌活性,对转化前后的吴茱萸提取液进行了HPLC分析,并对其抑菌活性进行了纸片法检测.结果表明:经肠菌群转化后提取液中吴茱萸碱的含量逐渐增加,而抑菌能力也随着含量的增加而增强,并在转化后8h吴茱萸碱的含量和抑菌能力均达到最大.其转化后的提取液对...     

应用间接竞争ELISA检测山羊痘抗体方法的建立

[目的]为山羊痘疫苗接种山羊后产生的抗体效价检测和山羊痘的诊断奠定基础。[方法]采用Vero-E6传代细胞分离山羊痘病毒抗原,建立检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA方法。[结果]检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA的最佳工作条件：最佳抗原包被浓度为1μg/ml,兔抗高免血清最佳稀释度为1∶16 000,待检血清的工作浓度为1∶400,阳性血清的临界值为45.19%,阴性血清的临界值为38.89%。用该试验建立的ELISA方法检测3 000份接种山羊痘疫苗的山羊血清,阳性检出率为83.33%,琼脂扩散试验检出率为77.33%,竞争抑制ELISA方法较琼脂扩散试验方法敏感。[结论]该方法具有特异性高、快速、敏感等特点,适合检测山羊痘抗体。     

应用间接ELlSA检测猪旋毛虫抗体

以猪旋毛虫抗原基因Ts88的重组蛋白为包被抗原,建立了猪旋毛虫抗体间接ELISA检测方法。最佳抗原包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释倍数为1：80。采用间接ELISA方法检测2000份猪血清,阳性检出率为1．5％,血清样本对应猪肉采用镜检法,阳性检出率为1．30％。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪旋毛虫的临床诊断和流行病学调查。