应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系

[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8￣2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。     

日光温室“越冬黄瓜—草菇”抗连作障碍栽培技术

采用“越冬黄瓜—草菇”轮作可有效抗连作障碍,同时合理利用农业废弃物,节本、优质、高效。     

长春地区猪源链球菌分离株的病原特性研究

2000～2001年从长春地区分离到20株猪源链球菌,结合培养特征、生化特性及血清学反应等对其进行鉴定,其形态、染色、培养特征及理化特性基本符合猪链球菌的特点,大多具有α或β溶血,生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A～G乳胶分型诊断试剂盒检测20株分离菌,5株为C群链球菌,9株为D群链球菌,1株为G群链球菌,2株与D群和G群有交叉反应,3株不在检测范围。20株链球菌对小白鼠致病性有所差异。本实验可证实长春地区猪链球菌病的病原已不局限于原有的C群链球菌,因此研制针对本地区流行株的多价灭活疫苗已成为控制该病的当务之急。     

春小麦单产500千克栽培技术

2005年我场种植春小麦5 067公顷,平均单产为478千克/667米~2,其中达到500千克/667米~2以上的3 533公顷,450千克/667米~2以上的1 467公顷,实现了大面积高产稳产,创历史最好水平。一、选地与整地1.选地合理轮作,避免重茬,同时选择土层深厚、肥力高、有灌溉条件、杂草少、有机质含量在1.5%左右的土壤为佳。碱解氮大于50毫克/千克,有效磷大于20     

羊布鲁茵16MvjbR蛋白酵母双杂交诱饵表达载体的构建及其毒性和自激活效应检测

利用Sos招募系统（SRS）,通过聚合酶链反应（PCR）扩增羊布鲁菌16MVjbR基因的编码序列,定向克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵重组质粒pSos－VjbR,经测序正确后其将转入酵母菌cdc25H（α）感受态细胞,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无自激活作用。结果表明,经序列测定证实重组诱饵质粒pSos－VjbR构建成功。重组质粒转化入酵母细胞后,经检测其表达产物对cdc25H（α）酵母细胞无毒性作用,对报告基因亦无自激活作用。这为利用SRS来研究与羊布鲁菌16MVjbR蛋白相互作用的蛋白奠定了基础。     

周麦21在淮安市的种植表现及栽培技术

周麦21由河南省周口市农科院根据育种目标选育而成,来源于周93S优/郑麦9023杂交组合。于2007年通过国家审定（审定编号：国审麦2007013）,已获国家小麦新品种权保护。该品种属弱春性早熟、强筋优质、高产小麦新品种。品质达到国家优质小麦标准,最高产量9294kg/hm2。     

荞麦栽培的技术

1选茬整地 选茬。轮作制度是农作制度的重要组成部分。轮作,也称换茬,是指同一苦荞地块于一定年限内按一定顺序轮换种植不同作物,以调节土壤肥力,防除病虫草害,实现作物高产稳产。荞麦对茬口选择不严格,无论在什么茬口上都可以生长,但忌连作。为了获得荞麦高产,在轮作作物中最好选择好茬口,比较好的茬口是豆类、马铃薯,这些都是养地作物。其次是玉米、小麦、菜地茬口,这些都是用地作物。     

禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定

为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验(AGP)、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定。结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0%⁹9.8%,氨基酸同源性为89.3%99.8%,氨基酸同源性为89.3%⁹9.3%;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远。结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异。     

2型猪链球菌强毒株与无毒株胞外蛋白的双向电泳图谱比较分析

利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较,寻找与毒力相关的蛋白质.2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16 h,从培养物上清中获得胞外蛋白.第一向电泳用pH4-7线性IPG胶条进行等电聚焦,第二向电泳用SDS-PAGE凝胶再分离蛋白,经过考马斯亮蓝R350染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像.在2型猪链球菌强毒株和无毒株的胞外蛋白质图谱中都分别检测出180±10个蛋白质斑点,它们的蛋白质分子质量分布基本相似;在所检测到的差异蛋白质斑点中,其中有50个蛋白斑点只存在于无毒株中而强毒株中不存在,有52个蛋白斑点只存在于强毒株中而无毒株中不存在,有7个蛋白斑点的表达量相差达5倍以上.这为研究2型猪链球菌的致病机理提供了蛋白质组学方面的信息.