草莓果实特异表达基因annfaf 在E. coli 中的表达及抗血清的制备

摘要：将草莓?穴Fragaria ananassa Duch. ?雪果实中特异表达的膜联蛋白基因annfaf的cDNA连接重组到pET-30a质粒中，构建了融合和非融合蛋白表达载体。annfaf 基因转化大肠杆菌(E. coli )后以包含体形式得到了高效表达，同时研究了annfaf基因表达的影响因素。实验结果表明, 最佳培养温度是37 ℃ ，培养时间为4 h，当培养液中加入利福霉素时可明显提高表达量中目的蛋白的含量。SDS-PAGE检测表明该蛋白分子量为35 kD，与目的蛋白相同。以表达的蛋白作抗原免疫家兔，制备了抗Annfaf蛋白的抗血清。ELISA检测及Western印迹表明，制备的抗血清可与其免疫抗原发生特异的免疫学反应，且具有较高的效价。该实验结果为进一步研究Annfaf蛋白在草莓果实细胞中的定位及其生理功能奠定了基础。     

甘薯花青素的提取及其抑菌效果分析

 建立了甘薯块根花青素（sweetpotato anthocyanin,SPAC）的大孔树脂吸附制备技术，分析了其抑菌作用和机理。结果表明，在0.8%柠檬酸、物料比1∶200，60℃温水浴提取2 h的条件下可获得最大的提取率3.81 mg·g-1。 粗提物经AB-8大孔树脂过柱纯化后可获得色价为225.1E的纯品，色价提高6倍。研究发现SPAC对3种常见致病菌均有抑菌作用，并与其浓度呈正相关。通过电镜观察、SDS-PAGE分析及生长曲线比较表明，SPAC抑菌机理是通过SPAC与细胞中的蛋白或酶结合，使其变性失活，抑制对数生长期的细胞分裂，而后使细胞质固缩、解体，导致细胞死亡。SPAC具有色素和抑菌双重功能，是理想的功能性天然色素。     

不同芦荟品种主要成分及抗菌作用的比较研究

芦荟系百合科多年生肉质常绿植物，自古以来就是我国一种重要的药材。具有抗肿瘤、杀菌、美容和保健等功效。但由于目前分布于世界的芦荟属植物多达500余种，而且各品种间的药用成分存在着一定的差异。为此，我们对目前国内市场应用较多的3种芦荟，即木立芦荟(Aloe arborescens)、库拉索芦荟(Aloe vera Linn)和开普芦荟(Aloe africana)的主要成分含量进行了研究比较，为其今后应用提供依据。     

潜江市节水农业技术应用现状及发展建议

随着农业供给侧结构性改革的深入,留住青山绿水、建设美丽乡村、节约水资源已成为全社会的共识。阐述了潜江市节水农业技术的推广现状及节水工作主要措施,总结了其取得的成效,分析了节水农业存在的主要问题,并提出了节水农业的发展建议,以期为该技术的有效推广提供参考。     

樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化

 以优良樱桃砧木新品系98-1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化，建立了高频率再生系统，并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0—2.0 mg/L、NAA 0.3—0.5 mg/L、GA 0.5 mg/L、AgNO3 5.0—10.0 mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键，延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及Southern Blot检测为阳性，表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木98.1基因组。     

天南星的抑菌作用及其机理研究

以天南星块茎的醇提物对革兰氏阴性菌，大肠埃希氏菌、鸡大肠杆菌、猪大肠杆菌和革兰氏阳性菌，金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌进行了敏感性实验。结果表明：天南星醇提物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有明显的抑制作用，抑菌谱广；其抑菌活性主要成分为皂甙。扫描电镜观察，天南星醇提物对大肠埃希氏菌的菌体结构造成破坏，菌体缢缩变形。直至其缢缩成为颗粒状残体而死亡；透射电镜观察，药物作用下大肠埃希氏菌的细胞质固缩，导致质壁分离，并随药物作用时间增长细胞质解体出现空腔，部分细胞壁缺失，细胞膜破裂；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明在此醇提物作用下，大肠埃希氏菌表达的总蛋白含量下降，而且大分子蛋白下降尤为明显，有些蛋白谱带消失(如R1，R6)；绘制出正常大肠埃希氏菌和药物作用下菌的对比生长曲线，可见这种抑菌作用主要发生在对数生长期，其机理可能是抑制细胞的分裂；实验发现，天南星醇提物对鸡大肠杆菌和猪大肠杆菌的抑制作用强烈，有代替抗生素防治鸡大肠杆菌病和猪大肠杆菌病的应用潜力。     

抗虫基因(CpTI)辣椒转化的初步研究

以辣椒叶片为外植体，通过比较基因型、培养基成分等因素对不定芽分化的影响，建立了具有较高分化频率的再生系统。有农杆菌介导把豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）基因导入辣椒。在筛选培养基上获得抗性植株，经Southern斑点杂交检测，初步证实外源基因已整合到辣椒基因组中。     

番茄转果聚糖合酶基因获得抗寒植株

 从枯草芽孢杆菌毖Bacillus subtilis中分离克隆果聚糖合酶(levansucrase)基因sacB,构建置于CaMV35s启动子调控下的表达载体,通过农杆菌介导,将sacB基因导入番茄栽培品种碧娇。Southern杂交证明,目的基因已经整合到番茄基因组中。RT-PCR分析表明,sacB基因在转基因植株中获得转录。在含50mg·ml-1卡那霉素生根培养基中转化植株生根良好。抗冻试验、叶片电导率测定、多糖含量测定的试验结果均表明,果聚糖合酶基因赋予转基因番茄良好的抗寒性状。     

草莓annfaf基因反义融合表达载体构建及转基因植株的获得

 【目的】建立研究草莓果实膜联蛋白基因annfaf功能体系。【方法】利用反义基因技术将从草莓成熟果实中分离克隆的annfaf基因定向克隆至植物中间表达载体pROKⅡ，构建了annfaf反义融合基因植物表达载体pRRJ4，通过根癌农杆菌EHA105将其导入草莓基因组。对获得的抗性植株进行PCR和Southern检测分析。【结果】表明该反义基因已整合到草莓基因组中。【结论】可进一步筛选annfaf基因表达缺陷型植株，用于探讨annfaf在非跃变型果实草莓成熟中的调控作用，为培育草莓新品种提供中间材料。     

大白菜AB-81高频再生系统的建立及gus A基因瞬时表达的研究

 以大白菜自交系AB-81 的子叶和真叶切块为外植体, 建立了高频不定芽离体再生系统。在MS 附加TDZ 0. 2 mg/L , NAA 2. 0 mg/L , AgNO₃ 10 mg/L 和ABA 0. 25 mg/L 的再生培养基上, 子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到93. 3%和90. 0%, 每块外植体的不定芽数达3～6 个, 最多达21 个。以EHA105/ pMOG410 为载体转化侵染大白菜AB-81 的子叶, 获得较高gus A 基因瞬时表达频率的条件为: 子叶预培养2～3 d ; 侵染的工程菌液的浓度OD 0. 3～0. 5 ; 侵染时间2～10 min ; 共培养时间2～3 d。