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【目的】克隆家蚕卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor, VgR),分析其在昆虫细胞中的表达特征,了解正常VgR和突变VgR的表达模式,为阐明其生物学功能提供参考依据。【方法】基于家蚕VgR的基因编码序列设计特异引物,扩增的目的片段连接到载体pET28a上,构建原核表达载体,转化E. coil BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导获得目的蛋白;用镍柱亲和层析方法纯化诱导表达的家蚕VgR肽蛋白;将纯化后的肽蛋白制备BmVgR的兔源多克隆抗体;PCR扩增获得大造和突变型白妙卵(scanty vitellin,vit)的LBD1+EGF1结构域(C11D和C11V)片段,连接到细胞表达载体上,通过细胞转染表达目的蛋白,采用细胞免疫组化检测大造和突变型vit的VgR在细胞里的表达情况;通过Western blot检测细胞培养液中大造和突变型vit VgR的表达量。【结果】原核表达获得了一个大小约为22 kD的融合蛋白,以包涵体形式表达;镍柱亲和层析初纯化得到BmVgR的肽蛋白,进一步切胶纯化后,以此为抗原制备BmVgR的兔源多克隆抗体,其抗体效价>1﹕512 000,纯度为95%以上。转录水平检测表明Sf9和Spli221昆虫细胞中没有BmVgR和BmVg内源基因的表达;在Sf9昆虫细胞中成功表达了家蚕野生型和突变型vit BmVgR的结构域SP+LBD1+EGF1肽段,家蚕突变型vit在BmVgR第1个表皮生长因子同源区域的第3个ClassB区域有编码50个氨基酸残基的核酸序列缺失;细胞免疫组化试验表明,突变型和正常型的C11V和C11D都能在Sf9细胞质中正常表达;制备的BmVgR兔源多克隆抗体和Myc标签抗体同时检测到细胞表达的目的蛋白,表明试验所制备的VgR抗体特异性较好;由于SP+LBD1+EGF1肽段存在信号肽,细胞表达的蛋白会分泌进入细胞培养液中,Western blot对培养液进行蛋白检测,表明突变型vit存在氨基酸缺失,但并不影响肽蛋白的正常表达,且表达量没有明显差异。【结论】EGF1结构域的缺失并不影响SP+LBD1+EGF1肽蛋白的正常表达,可能是其蛋白功能异常导致突变型vit表型产生。 相似文献
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夏庆友 郭一然 张泽 李东 玄兆伶 李卓 代方银 李英睿 程道军 李瑞强 程廷才 蒋涛 赛琳·贝凯 徐讯 刘春 查幸福 樊伟 林英 沈以红 蒋岚 杰弗里·詹森 伊恩丝·黑尔曼 唐思 赵萍 徐汉福 余昶 张国捷 李俊 曹建军 刘仕平 何宁佳 周妍 刘慧 赵静 叶辰 杜周和 潘国庆 赵爱春 邵浩靖 曾巍 吴平 李春峰 潘敏慧 李晶晶 殷旭阳 李大为 王娟 郑会松 王文 张秀清 李松岗 杨焕明 鲁成 瑞斯摩·尼尔森 周泽扬 汪建 向仲怀 王俊 《蚕学通讯》2009,29(3):7-30
1材料与方法
1.1样品收集
为了囊括全世界实验室所保存的主要的蚕系统,我们收集了各种的地理区域的品系,如中国、日本、欧洲和热带地区(主要是东南亚:印度,柬埔寨和老挝),和突变系统。列于表S1的29个家蚕品系来自中国西南大学蚕学与系统生物学研究所。 相似文献
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在现今保护物种的世界上,真菌还是个新成员。保护鸟类和哺乳动物的运动已持续了大约一个世纪之久,而植物成为保护的核心也有数十年了。目前,两栖动物、鱼类和爬行动物都出现了濒危物种。近些年来,对于无脊椎动物也需要保护的认识也有了很大提高。不知何故,在这条路上却遗漏了真菌,而且原因似乎并不让人高兴。从18世纪早期开始,当 相似文献
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植物体内往往生存着许多内生微生物,其中内生细菌属于主要的成员,它们与宿主植物长期协同进化,在演化过程中与植物形成了互惠共生关系,对宿主植物有固氮、促生、抗病、抗逆等多方面的有益作用,因此植物内生细菌已经成为了植物微生态系统中的重要组成部分.最近十几年,关于外来入侵植物的研究已经取得极大进展,但相关研究主要集中在入侵植物与本地植物的竞争、入侵植物对入侵地取食动物的防御能力等方面,而关于入侵植物与其内生菌(特别是内生细菌)关系的报道则极少见.植物内生菌不仅对工业、农业、医学等领域的研究有着重要的意义,而且在生态环境保护方面同样也有着重大的意义,内生菌对提高入侵植物的入侵性亦有重要的贡献.本文主要针对内生细菌的研究方法、生态学、有益生物学作用等进行了综述,并着重针对植物内生菌在入侵生态学中的研究前景做了展望,以期为入侵生态学的研究开辟新的思路. 相似文献
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为了筛选防治花生网斑病菌的有效药剂,采用菌丝生长速率法测定12种杀菌剂原药对花生网斑病菌的室内毒力活性,筛选出防效较好的杀菌剂;选取不同类型的杀菌剂进行复配,并对花生网斑病菌进行室内毒力测定试验。结果表明:95%咯菌腈、98.6%嘧菌酯、97%咪鲜胺、95%苯醚甲环唑、95%己唑醇、95%甲基硫菌灵、97%戊唑醇对花生网斑病菌具有较强的抑制作用。87%代森联与97%咪鲜胺按1:9复配时,具有增效作用,EC50值为0.673 μg/mL。室内杀菌剂毒力测定结果显示试验选取的单剂和复配药剂均对花生网斑病菌的菌丝生长具有抑制效果,该结果为花生网斑病的研究提供了理论依据,为下一步田间防效试验奠定基础。 相似文献
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39.
以不同浓度贝莱斯芽孢杆菌BP-1的发酵滤液处理花生网斑病菌孢子,采用显微观察法、电导率测定法和紫外吸收法测定发酵滤液对病菌细胞膜渗透性、麦角甾醇含量、脂质过氧化程度和可溶性蛋白质含量的影响,研究BP-1发酵滤液对花生网斑病菌孢子的抑制作用.结果 表明:BP-1发酵滤液可致花生网斑病菌孢子畸形、破裂;并可导致菌丝体内电解质泄漏,细胞膜上麦角甾醇的合成受阻,脂质过氧化产物(丙二醛)含量明显升高,同时显著抑制菌丝体内蛋白质含量. 相似文献
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