检测猪乙型脑炎抗体胶体金免疫层析法的建立与初步应用

利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化vero细胞培养SA14-14-2株猪乙脑病毒灭活抗原,进行胶体金点样和配比优化,制备GICA试纸条.结果最优浓缩样品配比构成是PBS 1.32 mL、灭活病毒液24 mL、30％蔗糖2.6 mL、55％蔗糖6.6 mL;用于胶体金偶联的抗原浓度约2.80 mg/mL.试纸条能明显区别阴阳性血清,阳性血清稀释1∶256能显示条带,优化后灵敏度达到1∶1024.与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、Ⅱ型圆环病毒病阳性血清不发生交叉反应.用于检测2群免疫母猪抗体阳性率分别为86％和100％,说明疫苗免疫效果较好;检测未经免疫肉猪出现阳性结果,分别达到38％和24％,说明存在病毒隐形感染.     

鸡传染性法氏囊病血清Ⅰ型病毒亚型毒株的分离

从广东地区接种鸡传染性法氏囊病(IBD)弱毒疫苗又发生 IBD 的18～39日龄肉用鸡群采集有肉眼病变的法氏囊组织制成悬液,经20%乙醚处理后,接种10日龄 SPF鸡胚、回归24日龄非免疫鸡和28日龄 IBD 免疫鸡,,分离获得了与 D_(7?)、TAD、BV、Lukert 和 CJ 弱毒疫苗病毒抗原性不相同的6株 IBD 血清Ⅰ型病毒的亚型毒株(GF_(901)、GZ_(902)、GN_(903)、GS_(904)、GB_(905)和 GD_(906)。从肉用鸡群中分离刮 IBD 血清Ⅰ型病毒的亚型毒株,在国内尚属首次报道。     

应用阻断酶联免疫吸附试验检测赤羽病血清抗体

赤羽病(Akabane disease，AKD)又名阿卡斑病，是由布尼病毒科布尼病毒属的阿卡斑病毒引起的牛、绵羊和山羊等动物的一种多型性传染病，主要以流产、早产、死胎及新生儿关节弯曲综合征和积水性综合征为特征。该病首次于1949年在日本群马县赤羽村发生因而得名。世界上很多国家，如澳大利     

用抗原捕获ELISA方法及过氧化物酶染色法检测蓝舌病病毒

蓝舌病 (Bluetongue,BLU)是由呼肠弧病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的羊等反刍动物的严重传染病。该病传播快 ,发病率和死亡率都较高 ,因而对畜牧业的发展有着极大的影响 ,进出境动物检疫中将其列为一类传染病。蓝舌病血清抗体的检验方法通常较简便 ,如琼脂扩散 (AGID)、补体结合试验(CFT)及竟争性酶联免疫吸附试验 (C- ELISA)等 ,然而对其病毒的直接检测 ,通常比较复杂 ,并要较长时间 ,一般很难在 45天规定的隔离检疫期内完成任务 ,不符合口岸动物检疫工作快速、准确、简便的基本要求。为了改变这种状况 ,我们采用了一种新程序 ,引…     

应用荧光RT-PCR技术检测口蹄疫病毒

1　材料与方法1.1　试剂　裂解液 ,DEPC水、carrier RNA、RT-PCR反应液 ,RT- PCR酶颗粒 (Beads)、Taq酶。均由深圳匹基生物工程股份有限公司提供。1. 2　引物设计　上游引物 :5′- TCCACTAGC-GAGTGTTAGTAGC- 3′;下游引物 :5′- GCCTGT-CACCAGTGTTTGAGTA- 3′。1.3　试验材料　进口冻肉、冻猪脚、冻猪耳等。1.4　仪器　荧光 PCR仪 ,L ight cycler(Roche公司生产 )。1.5　操作方法1.5 .1　样本处理　 (1)取 n个 1.5 ml灭菌离心管 (n=样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照 ) ,作好标记。 (2 )在各离心管中加入 6 0…     

广东省猪PCV-2感染的病原学调查

2004年-2006年从广东省4个不同地区458个规模化猪场采集2128份病料,进行了PCV-2的抗原检测,结果表明,被检地区的猪群中普遍存在PCV-2感染,检测的458个规模化猪场中有372个猪场有PCV-2阳性猪,平均阳性率达到81．22%;2128份被检病料样品中有863份为阳性,平均阳性率达40．55％（863／2128）;不同地区不同时段猪场阳性率为63．64％～92．86％,病料样品的阳性率为24．00%～48．00％。     

水疱性口炎病毒RT-LAMP快速检测方法的研究

根据逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)原理,针对水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G基因序列中的6个区域设计内外各1对特异引物,建立扩增VSV糖蛋白(G)基因的RT-LAMP方法。扩增产物电泳呈特异的阶梯状条带分布,扩增产物加SYBR GREEN I染色呈特征性的黄绿色,肉眼可直接观察判定。同时,还建立了可以进行定量检测的实时RT-LAMP方法。特异性试验显示,本方法可快速检验鉴别VSV与口蹄疫病毒(FMDV)和猪水泡病病毒(SVDV)。敏感性试验显示,建立的实时RT-LAMP方法检测VSVRNA的最低检测量为0.01 PFU,比实时荧光RT-PCR显著提高。建立的LAMP方法可检测p-VSVNJ质粒DNA的最低量为6.36×10-3pg/μL(1.4×103copies/μL),比PCR也显著提高。综合表明,本研究建立RT-LAMP检测VSV的方法具有特异、敏感、快速、简便的特点,具有开发应用前景。     

猪流行性腹泻和传染性胃肠炎混合感染的诊断及防制研究

猪流行性腹泻和传染性胃肠炎混合感染的诊断及防制研究李树根童昆周李力复林志雄（广州动植物检疫局，５１００１０）１９９３年以来已有关于ＰＥＤ和ＴＧＥ两病混合感染的调查和防制的报道［１，２，３］。鉴于近年这两种传染病有日益普遍和严重的趋势，为了进一步揭示这...     

应用荧光RT-PCR技术检测高致病性猪蓝耳病病毒

猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪病毒性传染病。该病主要引起妊娠母猪早产、晚期流产、死胎、弱胎以及木乃伊胎。仔猪和育肥猪呼吸困难,呈间质性肺炎。公猪性功能下降,精液质量和精子活力受到影响。该病是进出口猪必须检疫的一种重要的猪传染病。