东祁连山高寒草地土壤5种镰孢菌的形态鉴定和ITS rDNA分析

为确定东祁连山高寒草地土壤中镰孢菌的分类地位,运用稀释平板法对从其中分离的5种镰孢菌,采用形态学和培养特征进行观察描述,同时利用ITS rDNA序列对其系统发育学进行分析,确定分类地位,并分析比较了基于形态学和ITS rDNA序列分析的两种鉴定手段。结果表明,3个菌株为三线镰孢(Fusariumtricinctum),2个菌株为木贼镰孢(F.equiseti),与传统方法相比,ITS rDNA方法有着较高的灵敏度,但对于东祁连山高寒草地土壤镰孢菌的鉴定,只有形态学与分子生物学鉴定相互结合,才能使镰孢菌的鉴定分类更加完善。     

东祁连山高寒草地土壤无机磷溶解菌分离及溶磷能力初探

使用传统的微生物分离培养法,对5种不同类型的高寒草地土壤中无机磷溶解菌进行了分离培养,并对优势溶磷细菌生理生化特征进行测定,以期为其开发利用提供依据。结果表明:从不同类型的高寒草地土壤中分离和筛选出28种固氮、溶磷细菌,其中wp1,wp2和wp3菌株溶磷能力较强,其氧化酶、接触酶反应均呈阳性,对明胶、硝酸还原和V.P.均呈阴性;对供试氮源wp1仅可以利用谷氨酸和牛肉膏,wp2不能利用胱氨酸和氯化铵,wp3可以利用谷氨酸、胱氨酸、牛肉膏;当pH>9时,wp3和wp1生长开始下降,wp2仍表现生长良好;当氯化钠浓度大于3%,wp2和wp3生长受到胁迫,大于6%时,wp1生长受到胁迫。     

线叶嵩草内生细菌的鉴定及溶磷效果的初步研究

菌株LXA10分离于东祁连山高寒草地线叶嵩草(Kobresia capillifolia),经PKO培养基培养和溶磷活性测定.结果表明:菌株LXA10对无机磷的溶解能力为28.14 mg·L-1,溶磷量为5.60 mg·g-1.不同的培养基成分对菌株LXA10的溶磷能力有影响,培养基中Fe2+、Mn2+、Mg2+等离子...     

乳白香青内生菌RC14抑菌能力测定及其鉴定

以高寒草地优势植物乳白香青(Anaphalis lactea)内生细菌RC14为研究对象,采用平板对峙法测定其对植物病原真菌的抑菌能力;并利用16S rDNA序列分析结合形态特征和生理生化特性对RC14进行鉴定。结果表明:RC14对多种植物根部病原菌和叶斑病菌均具有良好的抑制作用,抑制的病原菌种类有葡萄孢属(Botrytis)、蠕孢属(Bipolaris)、链格孢属(Alternaria)、镰孢菌属(Fusarium)和丝核菌属(Rhizoctonia)等植物病原真菌属,说明RC14具有较广的抑菌谱。RC14菌体杆状,大小为1.9~3.3 μm×0.7~0.8 μm, G⁺,中生芽孢,形态特征和生理生化特性及16S rDNA基因序列综合分析结果表明RC14为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。本研究结果为开发和利用高寒草地所特有植物的内生拮抗菌提供了理论依据,为开发生物农药提供菌种资源。     

甘肃省马铃薯坏疽病鉴定及其病原生物学特性研究

本试验研究了马铃薯坏疽病的症状及病原形态等。结果表明,该病害在块茎上形成圆形、椭圆形或不规则形的凹陷病斑,病斑呈土黄色至淡紫色,大小约1~3 cm,其中央有小黑点。从甘肃省采集到的马铃薯坏疽病26份标样中分离得到8个茎点霉属真菌分离物,经形态特征比对和致病性测定鉴定为同一种真菌分离物,且在症状特征、病原形态学、生化特征及ITS序列分析基础上鉴定该病原物为Phoma foveata;30%丙环唑·苯醚甲环唑、35%多菌灵磺酸盐、5%菌毒清、10%苯醚甲环唑、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯等对马铃薯坏疽病菌抑菌能力较强,其EC₅₀值分别为2.43×10^-5, 1.77×10^-2, 7.40×10^-2, 1.31×10^-1和2.31×10^-1 μg/mL;该病原菌菌丝生长速率及分生孢子萌发率均在20℃最高;在不同培养基上菌落形态及生长速率有差异,但在PDA培养基上生长最快;其分生孢子在pH值为3~10时均可萌发,但pH为6时分生孢子萌发率最高;本研究为国内首次详细报道该病害,该结果为甘肃省有效控制马铃薯坏疽病害提供了依据。     

东祁连山高寒草地优势牧草内生细菌产IAA能力的研究

为明确高寒草地优势牧草内生细菌在特殊生存环境下分泌吲哚乙酸（IAA）的能力及其在宿主体内的分布情况,本试验采用Salkowski比色法对线叶嵩草（Kobresia capillifolia C.B.Clarke）、矮生嵩草（Kobresia humilis Sergiev）、紫花针茅（Stipa purpurea Griseb）和醉马草（Ahnatherum inebrians Keng）的种子、休眠期根部、叶部和花期根部内生细菌分泌IAA能力进行了测定。结果表明：在104株供试内生细菌中有101株具有分泌IAA的能力,分泌IAA量在1.52~327.81 mg·L^-1之间,外源色氨酸对73.3%的菌株分泌IAA的能力有促进作用。其中76（75.2%）株的分泌量在0~20 mg·L^-1之间,分泌IAA能力最强的菌株为263XY3（327.82 mg·L^-1）,265XY6（146.93 mg·L^-1）和266XY1（126.26 mg·L^-1）。分泌量达到10 mg·L^-1以上的有57株,主要分布于线叶嵩草叶部（30.4%）和花期的根部（17.9%）以及紫花针茅花期的根部（10.7%）和叶部（8.9%）。该结果为高寒草地牧草产IAA内生细菌的开发利用提供了菌种资源和筛选方向。     

东祁连山高寒草地几株醉马草内生细菌的生物功能评价及鉴定

采用表面消毒划线法从醉马草分离获得6株内生细菌,分别命名为261MG1、261MG2、261MG3、261MG4、261MY5和261MY6,并对其进行了生物功能测定和鉴定。结果表明,有5株内生细菌对马铃薯炭疽病菌和马铃薯坏疽病菌有较好拮抗作用,有4株对马铃薯枯萎病菌有较好拮抗作用,且261MG2、261MG3、261MG4和261MY6对3种病原菌均有较好拮抗作用;除261MG4外均有固氮和产吲哚乙酸能力;通过培养性状和形态特征,结合16S rDNA序列相似性分析,将261MG1、261MG2、261MG3、261MY6、261MG4和261MY5分别鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、Bacillus axarquiensis、莫海威芽孢杆菌Bacillus mojavensis、解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens、耐盐短杆菌Brevibacterium halotolerans和棒形杆菌Clavibacter sp.。该研究结果为醉马草内生细菌进一步开发利用提供了依据。     

高寒草地针茅内生菌265ZY3的生物学特性研究及其鉴定

对高寒草地针茅（Stipa capillata L.）内生细菌265ZY3进行了抗菌、产IAA、溶磷、固氮等生物学特性的研究,并通过16SrDNA序列分析对其进行了鉴定。结果表明：265ZY3对马铃薯坏疽病菌（Phomafoveata）、马铃薯炭疽病菌（Colletotrichum coccodes）和马铃薯枯萎病菌（Fusarium avenaceum）均有良好的抑制作用,抑菌率分别为81.65%,87.84%和72.64%;在不含色氨酸和含100mg·L^-1色氨酸的King培养液中分泌IAA的量分别为38.59mg·L^-1和42.33mg·L^-1;能溶解无机磷和有机磷,且溶解无机磷的能力是有机磷的68倍;同时,具有固氮能力。结合形态学特征,通过16SrDNA序列同源性分析,将265ZY3初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土壤微生物的影响

利用GFP标记和平板分离法研究了拮抗内生细菌Bacillus mojavensisZA1在马铃薯根内及根际的定殖动态及其对土著微生物的影响。结果表明,标记菌株ZA1-gfp在土壤中定殖数量为3.7×10⁴~7.3×10⁴cfu/g;马铃薯根际为3.0×10³~1.5×10⁵cfu/g,根内为49~630cfu/g;马铃薯的根部横切面、根毛和根表皮等部位均观察到发绿色荧光的菌株ZA1-gfp菌体或聚集菌落。利用灌根法施入生防菌后,土壤中细菌、放射菌数量显著增加(P<0.05),土壤真菌数量在中期下降;土壤中细菌、真菌和放线菌的数量分别在相对稳定范围内(数据之间差异不显著)消长。该结果说明菌株ZA1-gfp能够在马铃薯根内及根际定殖且不影响土壤中土著微生物的群落稳定性。     

李宝聚博士诊病手记（四十九） 西藏设施蔬菜主要根病 发生概况及防治技术（一）

有“世界屋脊”之称的西藏自治区,平均海拔在4 000 m 以上,20 世纪80 年代,拉萨七一农场、城关区、堆龙德庆县、林芝地区、山南地区及日喀则等地开始建造温室或大棚进行设施蔬菜生产,极大地满足了当地人民对各种蔬菜的需求,西藏蔬菜播种面积由1985 年占当年农作物播种面积的1.61%提高到2011 年的9.49%。由于设施条件的不可移动性以及设施内的环境特点,加上连茬栽培,导致土壤中各类病原微生物大量累积,根部病害发生严重,成为制约设施蔬菜生产的主要因素之一。因此,2011 年笔者对西藏拉萨、林芝、山南、日喀则等设施蔬菜主产地进行了根部病害种类调查。