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氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(mAbs),建立间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA 免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和icELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备mAb,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水mAb,建立icELISA标准曲线,对icELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·mL-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;icELISA方法的包被原浓度为1 μg·mL-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(GaMIgG-HRP) 1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性最好,2H5的线性回归方程为y=-28.022x+56.219,R2=0.9 782,对10种FQs的IC50值分别为环丙沙星(CPFX)1.67 ng·mL-1、诺氟沙星(NOR)1.82 ng·mL-1、培氟沙星(PEF)1.97 ng·mL-1、恩诺沙星(ENR)1.54 ng·mL-1、单诺沙星(DAN)2.79 ng·mL-1、洛美沙星(LOM)3.38 ng·mL-1、氧氟沙星(OFL)5.50 ng·mL-1、麻保沙星(MAR)4.40 ng·mL-1、沙拉沙星(SAR)11.76 ng·mL-1、二氟沙星(DIF)13.60 ng·mL-1,与10种FQs的交叉反应率为12.3%-108.4%,与非FQs交叉反应率均低于0.01%,对10种FQs的检测限(LODs)为0.09 ng·mL-1-0.64 ng·mL-1。icELISA法鸡肉中10种FQs的回收率为80.5%-91.8%,HPLC法的回收率为85.1%-95.7%,二者变异系数均低于10.0%;两种检测方法差异不显著(P>0.05)。【结论】该试验获得了高效价、敏感、广谱特异性的mAbs,建立的icELISA方法可用于同时检测鸡肉中10种FQs。 相似文献
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我所于1986年筛选出的AP.4毛木耳优良菌株,其菌种特性已在《食用菌》第4期上作了报道,本文主要介绍其栽培技术。一、菌种制作(一)母种采用PDA 培养基。由于AP.4菌种不适于低温保存,母种要通过组织分离 相似文献
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摘要:本试验旨在研究不同方法处理的玉米青贮饲喂肉牛效果对比,选择体重340kg左右的西门塔尔杂交牛30头,随机分为3组,保证精饲料不变,粗饲料分别饲喂3种不同方法处理的玉米青贮,其中试验Ⅰ组为全株玉米青贮、试验Ⅱ组添加剂全株玉米青贮、试验Ⅲ组玉米秸秆黄贮,试验期70d。结果表明:1)试验Ⅱ组的平均日增重极显著高于试验Ⅰ组、试验Ⅲ组(P<0.01),分别比Ⅰ组、Ⅲ组高出17.57%、65.71%;Ⅲ组干物质采食量显著高于Ⅰ组、Ⅱ组(P<0.05);Ⅰ组和Ⅱ组料重比极显著低于Ⅲ组(P<0.01)。试验Ⅱ组养殖效益最高为14.14元?天-1?头-1,比试验Ⅰ组高5.05元,比试验Ⅲ组高15.74元。综上,添加剂全株玉米青贮饲喂肉牛效果和养殖效益最佳,全株玉米青贮、玉米秸秆黄贮次之。 相似文献
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本文研究了用液相色谱串联飞行时间质谱建立生乳中29 种兽药残留的快速检测方法。生乳样品采用0.2%甲酸乙腈溶液提取上清液,采用Dikma ProElut QuECHERS净化管净化后测定。目标化合物通过Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,以乙腈和1.0%甲酸水溶液为洗脱剂进行程序洗脱,正离子扫描模式检测。结果表明,通过对数据进行靶向分析,20.0 min内生乳中29 种兽药残留能够同时被检测出来,其中Mass Error在±2.0 mg/kg之内,Library Score得分均在90 分以上,准确性高,操作简便。 相似文献
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琥珀酸酐法将雌二醇(E2)衍生化,再用碳二亚胺法(EDC)将半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,E2与BSA偶联比为12.3∶1。将E2-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗E2杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。结果表明,筛选的3株杂交瘤细胞E2D5、E3F7和E4A6抗体效价均在8×104以上。以E3F7细胞株建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线,其线性范围为0.0666.2μg/L,检测限和IC50值分别为0.03和0.76μg/L,除与去氢甲睾酮22.9%的交叉反应率外,与其他化合物无交叉反应。本研究为开发ELISA试剂盒,检测食源性动物产品中E2残留奠定基础。 相似文献