防御素基因克隆和表达载体构建

人防御素(HNP)是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对于细菌、真菌乃至某些被膜病毒有广谱杀伤作用,是免疫系统中的重要组分。实验根据已发表的HNP-1cDNA序列,设计并合成了一对引物。以HL-60细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pUC18载体上,经筛选获得阳性重组子pUC18-HNP-1(pDFS1)。测序分析证实,扩增片段即为HNP-1cDNA。pDFS1再经SmaI与SalI酶切、插入pGEX-6p-1质粒构建HNP-1表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子最终获得pGEX-6p-1-HNP-1(pDFS2)重组质粒。     

洋葱细胞质雄性不育系与相应保持系线粒体DNA的RAPD分析

运用RAPD技术对洋葱细胞质雄性不育系A和相应保持系B的线粒体DNA(mtDNA)进行了100个单引物的多态性研究。结果表明69个引物有扩增,表现出多态性的有12个,然后随机选取不育系A和保持系B各9株验证多态性片段在单株中的稳定性,有两种引物A13和E14扩增出的多态性片段表现稳定。     

热处理对木材力学性能的影响综述

热处理可有效提高木材尺寸稳定性,同时对木材力学性能也有明显的影响。文中按照力学指标分别综述热处理工艺对静曲强度/弹性模量、抗压强度、脆性/冲击韧性及其他力学性能的影响,进而总结热处理对木材力学性能影响机理的研究进展;提出可以从以下方面深化热处理技术的研发:一是热处理技术研发时宜根据应用领域科学选择合适的力学指标,二是进一步拓展热处理介质以控制力学性能损失,三是进一步探索热处理对木材不同力学指标的影响机理。     

鸡贫血病毒哈尔滨分离株VP2基因克隆测序和比较

通过PCR方法克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒（CAV）的VP2基因，并对之进行了测序，该基因的开放读码框由65bp组成，编码216个氨基酸。通过将本次克隆的基因与GenBank收录的CAV的VP2基因比较，同源性至少为99％，未发现与本次克隆的VP2蛋白完全一致的CAV分离株，与之同源性最好的是CIA－1的VP2蛋白，相差1个氨基酸，与Cux-1也仅相差2个氨基酸，因此从该蛋白看CAV哈尔滨分离株的变异程度不很高。比较这27株病毒的VP2及其基因序列，发现共有31处核苷酸发生变异，这些变异将导致VP2的12个氨基酸变化，尽管他们散布于整个VP2，但在186到191号氨基酸区域存在一个没有报道过的变异程度相对较高的区域，CAV的VP2是相对较保守的蛋白。     

几种与肝再生有关的细胞因子研究概况

肝脏是机体具有强大再生能力的重要器官之一 ,当肝脏被部分切除或受到药物 (如四氯化碳 ,Ｄ -氨基半乳糖胺等 )毒害后 ,剩余的或未受损害的肝细胞可以分裂增殖 ,使肝组织再生恢复到原来的体积。有关肝细胞再生的调控机理的研究国际上已进行了百余年 ,近年来 ,研究发现了肝细胞分裂受内分泌、旁分泌和自分泌等多种因素的影响[1] 。目前已知的与肝细胞再生有关的因子很多 ,包括表皮生长因子 (ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ ｔｏｒ,ＥＧＦ) [2 ] ,胰岛素 (ｉｎｓｕｌｉｎ) ,转化生长因子 -α(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａ…     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究Ⅲ.耐热保护剂鸡痘冻干疫苗的试验

试验中用耐热保护剂制备的鸡痘弱毒活疫苗,在2～8℃条件下保存效价比较稳定,保存24个月时试验疫苗效价下降率为6%～16.3%,而对照的常规疫苗下降率达31.4%.     

猪肺炎支原体PCR诊断方法的建立

建立了一个PCR检测猪肺炎支原体(Mhp)的方法。根据国外发表Mhp 16sr RNA基因设计了一对特异性引物，扩增出一个大小为653bp的特异性片段。将PCR产物克隆并测序表明，与GenBank的Mhp的序列的同源性为89．2％。而对于常见的猪呼吸道疾病有关的病原胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌以及牛支原体、羊支原体不能扩增出特异性片段；PCR的敏感性实验显示这对引物能够检测到1ng的DNA，结果表明此方法特异、敏感。     

一步法快速纯化mRNA

介绍一种针对 Ｒ Ｎ Ａ、ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的理化及生物学特性，在酸性胍一步抽提法基础上加以改进，并配合ｏｌｉｇｏ （ｄ Ｔ）） 纤维素亲和层析法纯化提取ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的方法， 此法具有简便、经济、快速、重复性好等多种优点。本实验通过对 Ｈｅｌａ 细胞、兔脾脏组织、菜豆苗ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的分离提取， 并运用甲醛变性凝胶电泳及分光光度计检测， 证明采取此法所获得的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 完全符合实验要求， 可广泛应用于ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库的建立、核酸探针制备、逆转录 Ｐ Ｃ Ｒ 多项生物学技术。     

GFP与GnRH/TRS融合基因表达载体的构建及表达

应用基因工程技术构建GnRH/TRS与绿色荧光蛋白的融合基因,核酸序列测定和Western boltting印迹分析基因表达;激光共聚焦荧光显微镜观察活细胞内荧光布局。结果融合基因获得了正确表达,GnRH/TRS-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果。GnRH/TRS-GFP融合蛋白具有绿色荧光蛋白的自发荧光特性,且不影响Gn-RH/TRS分子在细胞内的正确表达,为低促性腺激素性功能减退综合征治疗的进一步研究奠定了基础。