应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法

 【目的】丝状支原体丝状亚种SC（Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC，MmmSC）是引起牛传染性胸膜肺炎（contagious bovine pleuropneumonia，CBPP）的病原体。成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的，在自然感染和人工感染时，特异性免疫反应产生早，持续时间长，抗体滴度高，因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。【方法】由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸（Trp），而在细菌中则为终止密码子，故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRI Ⅹ的lppQ基因进行原核表达，利用重组抗原建立间接ELISA方法。【结果】序列分析表明，将lppQ基因第198位的A成功突变为G， 并将突变后的脂蛋白LppQ N端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，构建了原核表达载体。重组菌经诱导后，表达出了分子量约为42 kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白，纯化后蛋白质纯度高达95%，Western blot结果显示，重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35 ?g·ml-1，包被酶标反应板，优化反应条件，P/N为4.8（0.934/0.193）。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376，敏感性为95.8%（46/48）， 特异性为98.9%（161/163）。应用间接ELISA和补体结合试验（CFT）对来自3个省自治区3 817头份牛血清进行了检测。【结论】Kappa值为0.63，两种方法存在中、高度一致性。     

特色蔬菜紫背天葵组培工厂化育苗的研究

以紫背天葵为试验材料,研究了适宜其组培工厂化育苗的技术要点。结果表明：以茎段为外植体,最佳灭菌组合为75%酒精消毒20秒后用HgCl2 消毒6分钟;最适诱导和增值培养基为改良M S + 6-BA 1.0 m g／ L + N AA 0.2 m g／L + 蔗糖30g／L + 琼脂7g／L,pH 为 5.6;闭瓶炼苗6天后,开瓶炼苗3天的移栽成活率最高。     

河北省种子企业发展现状及对策建议

近年来,河北省把现代农作物种业发展作为深入推进农业供给侧结构性改革和乡村全面振兴的重要支撑,以建设种业强省为目标,逐步构建以企业为主体、产学研相结合、育繁推一体化的现代农作物种业体系,河北省种子企业进一步做大做强,在规模和业绩等方面取得明显成效。通过对河北省种子企业发展现状和面临的问题进行分析,并提出对策建议,为实现“十四五”期间种业振兴目标提供参考和依据。     

蔓荆子黄酮提取物的抗癌活性的研究

分别给昆明种小鼠接种肉瘤S180和肝癌H22,以抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数为考察指标研究蔓荆子黄酮提取物的抑瘤作用和免疫调节活性。结果表明,蔓荆子黄酮提取物对肉瘤S180和肝癌H22均具有一定的抑制作用。其中高剂量组（400mg/kg）小鼠的瘤重显著低于对照（生理盐水处理）,而脾脏指数和胸腺指数较对照有所增加。     

基于CRISPR/Cas9技术的法尼醇X受体缺失株的构建及其对HeLa细胞增殖的影响

试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体（FXR）基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA（small guide RNA,sgRNA）,以PX459质粒为载体,构建真核重组表达质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,再用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞FXR基因敲除稳定株中FXR的表达量,并用Western blotting方法鉴定HeLa细胞FXR基因敲除效果。最后用结晶紫染色试验检测FXR基因敲除对HeLa细胞增殖的影响。结果显示,经测序后,3对sgRNA位置与方向均正确插入到PX459质粒载体内,成功构建出重组表达质粒PX459-sgRNA;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,转染后筛选出的细胞中FXR蛋白不表达,表明构建出稳定敲除FXR基因的HeLa细胞株;结晶紫试验结果发现,FXR基因敲除的HeLa细胞染色深度明显低于正常HeLa细胞,FXR基因敲除HeLa细胞孔D_{595 nm}值极显著低于野生型HeLa细胞孔（P<0.01）,说明HeLa细胞FXR基因敲除株的增殖能力较正常HeLa细胞显著降低。本试验利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源FXR基因敲除细胞株,且FXR基因敲除对癌细胞增殖具有显著抑制作用,为研究FXR的功能和作用机制提供了细胞模型,并为研究FXR在相关癌症发生发展中的作用奠定了基础。     

云雾山典型草原火烧不同恢复年限土壤化学性质变化

云雾山典型草原处于黄土高原半干旱地区,也是草原火灾多发区,试验比较了未烧地与新烧地、火烧后3 a和火烧后11a土壤有机碳(SOC)、全N、全P和速效K含量的变化过程.测量的土壤深度为50 cm,每10 cm一层,比较了4个样地0-10 cm、10-20 cm、20-30 cm、30-40 cm、40-50 cm土壤养分的变化.结果表明:(1)新烧地土壤剖面各层SOC、全N、全P和速效K含量都显著高于未烧地.(2)火烧后3 a样地土壤剖面各层SOC、全N、全P和速效K含量与未烧地差异不显著.(3)火烧后11a样地土壤剖面各层全N含量都显著高于未烧地,SOC、全P和速效K含量除了0-10 cm层与未烧地差异不显著外,其它土层均显著增加.(4)4个样地的土壤剖面各层从上到下SOC、土壤全N、全P和速效K含量呈递减趋势.(5)3个火烧样地土壤表层(0-10 cm)的pH值和未烧地差异不显著.     

双酚A和酞酸酯对鱼类的内分泌干扰效应和繁殖毒性的研究进展

环境雌激素作为一类内分泌干扰物进入人和动物体内后能干扰机体内分泌系统的正常功能,通过多种机制表现出拟天然雌激素或者抗天然雄激素的作用。双酚A（bisphenol A, BPA）和酞酸酯（也称作邻苯二甲酸酯,Phthalic Acid Esters, PAEs）是具有雌激素类活性的环境内分泌干扰物,广泛存在于水环境中,并对水生动物,特别是鱼类的安全造成潜在威胁。本文总结了目前BPA和PAEs对鱼类毒性效应的研究成果,特别是内分泌干扰作用和生殖毒性,为评估这两类环境污染物对鱼类的影响提供参考。     

陕西某羊场莎能奶山羊球虫分离鉴定及感染情况

对陕西省某羊场莎能奶山羊的球虫感染情况进行调查研究,应用球虫卵囊富集技术,结合形态学方法对采自该场2～12月龄的49份（≤2月龄22份;3～5月龄13份;6～12月龄14份）奶山羊新鲜粪便样品进行球虫卵囊分离,显微镜检测和OPG（Oocysts per gram）统计。结果显示,莎能奶山羊球虫总感染率为98.0%（48/49）,OPG统计发现,3～5月龄羔羊球虫平均OPG最高,为2 442个/g。最高OPG存在于2月龄羔羊样品中,为15 083个/g,且该羊只出现严重腹泻症状。对富集分离到的球虫卵囊进行孢子化和种类鉴定,共鉴定出7种山羊艾美耳球虫。进一步对随机提取的277个孢子化球虫卵囊进行优势虫种统计分析,其中雅氏艾美耳球虫（Eimeiria ninakohlyakimovae）、阿氏艾美耳球虫（E.arloingi）和柯氏艾美耳球虫（E.christenseni）占比最高,依次为17.3%（48/277）、15.9%（44/277）和15.2%（42/277）,是该羊场莎能奶山羊球虫的优势虫种。综上所述,初步明确该羊场莎能奶山羊不仅普遍存在球虫感染,而且存在多种球虫混合感染和致病力较强的优势虫种。     

太行山区春季地膜马铃薯套种夏玉米高效栽培技术

正位于河北太行山区一带的赞皇、平山、井陉、阜平、唐县、易县等山区半山区县,农民可耕种的土地少,且坡地梯田较多,浇水困难,种植冬小麦产量低且不利于机械操作。因此这些地方冬小麦面积逐渐减少,大多只种植一茬春玉米。造成该地区一方面春季大量土地闲置,土地利用率和复种指数低,另一方面农民收入少,甚至粮食不够吃,始终摆脱不了贫穷的困扰。为了提高山区土地的利用率,增加农民的收入,近年我们在太行山区发展了春季地膜马铃薯套种夏玉米种植模     

番石榴产区橘小实蝇转移为害规律研究

诸多室内研究结果表明番石榴(Psidium guajava L.)是橘小实蝇[Bactrocera dorsalis(Hendel)]最嗜好的寄主.然而,自然条件下番石榴的果实成熟期均有明显的季节性,当其采收后橘小实蝇种群如何生存和繁衍尚不明确.假设番石榴果实成熟采收前后橘小实蝇会转移为害,且其转移为害规律与气象因子紧...